Albino rotte
I voksne albino rotter (Ortín-Martínez et al., 2015; Salinas-Navarro et al., 2010; Schnebelen et al., 2009; Valiente-Soriano et al., 2015b) såvel som i voksne albino rotter (Cuenca et al., 2010; Salinas-Navarro et al., 2010; Salinas-Navarro et al.., 2009c) og pigmenterede (Valiente-Soriano et al., 2015a) mus, resulterede OHT inden for de første 2 uger i tab af ca. 80% af RGC-populationen identificeret i de venstre (laserede) nethinder med de retrograde sporstoffer FG eller OHSt anvendt på begge SCi 1 uge før dyrets behandling. Disse nethinder viste områder, der næsten var blottet for retrograd mærkning af RGC’er, og som antog form af tærteformede sektorer med deres basis placeret i nethindens periferi og deres spids mod den optiske disk; disse områder var hyppigere i de dorsale nethinder og varierede i størrelse fra en lille sektor til en eller flere nethindekvadranter. I modsætning hertil viste højre nethinde (kontrol ikke laseret) en normal fordeling af RGC’er (retrograduelt mærket eller immunfarvet med Brn3a) med de højeste tætheder i den visuelle stribe, langs den nasotemporale akse i den dorsale nethinde, med et højdepunkt i den superotemporale kvadrant, som tidligere beskrevet (Nadal-Nicolás et al, 2009, 2012, 2014, 2015; Ortín-Martínez et al., 2010, 2014; Salinas-Navarro et al., 2009a,b). Konstruktionen af isodensitetskort gjorde det muligt at foretage en detaljeret undersøgelse af den topologiske fordeling af overlevende RGC’er i disse OHT-nethinder (Fig. 2-4, 6 og 8). Vi fandt variabilitet i sværhedsgraden af nethindeskader, og dette er i overensstemmelse med tidligere rapporter fra dette (Vidal-Sanz et al., 2012) og andre (Fu og Sretavan, 2010; Levkovitch-Verbin et al., 2002) laboratorier. Desuden er der også blevet rapporteret om variabilitet i graden af degeneration i en arvelig pigmenteret musemodel af eksperimentelt glaukom, DBA/2J-musene (Filippopoulos et al., 2006; Howell et al., 2007; Jakobs et al., 2005; Pérez de Lara et al., 2014; Schlamp et al., 2006; Soto et al., 2008). Ud over dette sektorielle tab afslørede isodensitetskort også et diffust tab, selv inden for de retinale områder, der viste overlevende RGC’er. Denne mængde retinal degeneration var baseret på kvantificering af RGC’er mærket med retrograde sporstoffer, der blev påført SCi 1 uge før dyrenes behandling. Når den overlevende population af RGC’er blev identificeret med dextran tetramethylrhodamin (DTMR), en sporstof, der, når den påføres på den okulære stump af den orbitalt transekterede ON, diffunderer passivt mod cellens somata, eller med Brn3a immunfarvning, var der en klar uoverensstemmelse mellem antallet af sporede RGC’er og antallet af DTMR+RGC’er eller Brn3a+RGC’er i de samme nethinder. Antallet af Brn3a+RGC’er var signifikant større end antallet af sporede RGC’er i tidlige perioder efter LP, men ikke ved overlevende intervaller på 5 uger eller mere, hvilket indikerer, at i tidlige tidsperioder efter OHT havde en stor population af overlevende RGC’er mistet deres aktive retrograde axonale transport (Agudo-Barriuso et al, 2013a; Vidal-Sanz et al., 2012); en sådan ændring er tidligere blevet observeret efter andre typer nethindeskader eller ON-skader (Lafuente López-Herrera et al., 2002; McKerracher et al., 1990). Mellem 1 og 5 uger efter LP faldt antallet af Brn3a+RGC’er imidlertid betydeligt, hvilket indikerer, at tabet af RGC’er var progressivt mellem 1 og 5 uger efter LP.
Figur 2. Okulær hypertension inducerer tab af ortotopiske og forskudte retinale ganglieceller. Kort over tre repræsentative nethinder (et pr. række), der viser fordelingen af retrograduelt sporede ortotopiske (oRGC’er) (A, C, E) og forskudte (dRGC’er) (A′, C′, E′) og af Brn3a+oRGC’er (B, D, F) eller Brn3a+dRGC’er (B′, D′, F′) i en naiv rotte (første række) eller i eksperimentelle rotter (anden og tredje række) 3 uger efter laserfotocauterisering af limbiske og episklerale kar for at fremkalde okulær hypertension. Isodensitets- (C-F) og de tilsvarende nabokort (C′-F′) viser et parallelt topologisk tab mellem oRGC’er og dRGC’er (FG-traced og Brn3a+), hvilket er i overensstemmelse med en axonal kompression, der er produceret på niveauet af synsnervehovedet. Nederst på hvert kort er vist antallet af repræsenterede RGC’er eller dRGC’er. Farveskala (forskellige gråtoner i den trykte udgave) for isodensitetskort i (B) nederst til højre, for nabokort i (A′). RE, højre øje; LE, venstre øje; D, dorsalt; V, ventral; N, nasalt; T, temporalt. Skalaen i (A) = 1 mm.
Figur 3. Tabet efter OHT er selektivt for RGC’er i GCL. Isodensitetskort fra en repræsentativ eksperimentel nethinde 15 dage efter laserfotocauterisering af perilimbar og episklerale vener, immunreageret for Brn3a (A) og farvet med DAPI i gangliecellelaget (B). Brn3a isodensitetskortet viser en typisk tærteformet nethindesektor uden RGC’er i en eksperimentel nethinde 15 dage efter LP-induceret OHT. Den samme nethinde viser et stort antal DAPI-farvede kerner i de områder, der mangler Brn3a+RGC’er, som det fremgår af DAPI-isodensitetskortet (B). Nederst på hvert kort: antal celler optalt i den pågældende nethinde. Densitetsfarveskalaen (forskellige gråtoner i den trykte udgave) i A og B nederst til højre går fra 0 (lilla (sort i den trykte udgave)) til henholdsvis ≥ 3500 RGC’er/mm2 eller ≥ 5000 DAPI+kerner (rød (grå i den trykte udgave)). (C-E) Højere effektmikrografer fra indsatsen i A, B, der viser Brn3+RGC’er (C), calretinin+neuroner (D) og DAPI+kerner (E) for at illustrere, at der i de retinale sektorer med nedsat antal Brn3a+RGC’er var et stort antal DAPI+kerner (E), hvoraf mange er forskudte amacrine celler (calretinin+neuroner, D) i GCL. LE, venstre øje; D, dorsalt; V, ventral; N, nasalt; T, temporalt. Skalaen for (A) og (B) = 1 mm. Skala for (C-D) = 50 μm.
Figur 4. Normalt udseende af retinale kar i okulær hypertensiv nethinde. (A, A′) Naiv nethinde retrograduelt mærket med fluoroguld (FG) påført på begge superior colliculi 1 uge før dyrenes behandling og det tilsvarende isodensitetskort. (B) De retinale kar immunfarvet med RECA1-antistoffer i en sort/hvid rekonstruktion af hele nethinden i en sort/hvid rekonstruktion af nethinden. (C, D) Detaljer af nethinden (A), taget fra den dorsotemporale (C) og inferotemporale (D) kvadrant, der viser FG+RGC’er (hvidt), Brn3a+RGC’er (rødt (sort i den trykte udgave)) og RECA1+kar (grønt (gråt i den trykte udgave)). I den naive nethinde er der kompetent retrograd axonal transport (RAT), og de immunfarvede retinale kar ser normale ud. To uger efter laserfotocauterisering af de perilimbal- og episklerale kar viser en øjenhypertensiv nethinde et typisk tab af RAT i den dorsale nethinde langs en stor sektor, der strækker sig fra klokken 8 til 5 (E-E′). De retinale kar i den sort-hvide gengivelse (F) ser normale ud og ligner morfologisk set den naive kontrolnetina. De ses også i forstørrelsen taget fra et område uden RAT (G) eller med RAT (H). D, dorsalt; V, ventral; T, temporalt; N, nasalt.