Kansas State University

Marts 2019

Rheumatoid faktor (RF) og anti-nukleært antistof (ANA) til diagnosticering af autoimmune lidelser hos veterinære patienter

Af Drs. Brandy Kastl og Nora Springer

Diagnosen af autoimmune lidelser inden for veterinærmedicin kan være en udfordring. Serum autoantistoftiter, især for reumatoid faktor (RF) og/eller anti-nukleært antistof (ANA), anvendes ofte, når der er mistanke om autoimmun sygdom. Begge disse test er imidlertid af størst diagnostisk værdi, når de fortolkes i sammenhæng med det samlede kliniske billede. Forståelse af både styrker og faldgruber ved påvisning af autoantistoffer vil forbedre den nøjagtige fortolkning af positive resultater. I denne artikel vil vi bruge den diagnostiske undersøgelse af polyarthritis som et eksempel på den kliniske anvendelighed af både RF og ANA.

Serum RF- og ANA-titere anvendes ofte i den diagnostiske undersøgelse af mistanke om immunmedieret polyarthritis hos hunde (se tabel 1 – Diagnostisk tilgang til hundepolyarthritis). Diagnostisk evaluering af polyarthritis, uanset art, bør først begynde med røntgenbilleder af de(t) angrebne led og samtidig analyse af synovialvæske. Ved røntgenfotografering bestemmes det, om de arthritiske læsioner er erosive (dvs. med knoglepåvirkning) eller ikke-erosive (dvs. uden knoglepåvirkning). I mellemtiden identificerer synovialvæskeanalysen betændelse og lejlighedsvis infektiøse organismer. Fravær af mikroskopisk synlige organismer i synovialvæske udelukker ikke en infektiøs ætiologi; derfor er det nødvendigt at foretage passende undersøgelser for infektionssygdomme. I sidste ende vil kombinationen af radiografiske læsionskarakteristika, synovialvæskefund og resultater af supplerende testresultater for infektionssygdomme indsnævre differencelisten (se tabel 1) i forbindelse med caninepolyartritis. Når læsionskarakteristika passer og infektionssygdomme er blevet udelukket, giver både RF- og ANA-titre yderligere støtte til en diagnose af henholdsvis reumatoid arthritis (RA) eller systemisk lupus erythematosus (SLE).

Figur 1: Skema over reumatoid faktor

Rheumatoid arthritis bør overvejes i tilfælde af erosiv, neutrofil polyartritis uden identificerbar infektiøs ætiologi. Yderligere oplysninger om diagnosen RA findes på www.rheumatology.org i ACR-EULAR-klassifikationskriterierne for reumatoid artrit fra 2010, som anses for at gælde for veterinærarter. Ved RA ophobes autoantistoffer, der er rettet mod den krystalliserbare (Fc) fragmentregion af IgG-antistoffer (figur 1). Disse IgM-, IgA- eller IgG-autoantistoffer betegnes under ét som reumatoid faktor (RF). Under normale omstændigheder letter RF fjernelsen af antistof-antigenkomplekser efter et immunologisk respons. På grund af denne normale immunologiske funktion er forhøjede serum RF-titre ikke patognomoniske for RA og kan være til stede hos en lille procentdel af normale personer eller personer med andre kroniske inflammatoriske tilstande. Hos patienter med RA forekommer overdreven RF-produktion efter den første begyndende ledbetændelse og forstærker efterfølgende arthritisdannelsen via aflejring af immunkomplekser i ledvæv. På grund af denne forsinkelse i RF-akkumulering vil en lille procentdel af patienter med RA have negative RF-titre. Uanset dette er bestemmelse af serum RF-titre fortsat en grundpille i diagnosen af RA.

I modsætning til RA forårsager sytemisk lupus erythematosus (SLE) en ikke-erosiv, inflammatorisk polyartritis. Hos hunde er diagnosen SLE ofte baseret på tilstedeværelsen af ≥ 2 kliniske tegn, der er associeret med autoimmunitet (Tabel 2. Foreslåede diagnostiske kriterier for SLE hos hunde) i kombination med en serum ANA-titer > 1:160. Antinukleært antistof (ANA) er en samlebetegnelse for autoantistoffer rettet mod forskellige nukleare antigener, såsom histoner og DNA. Som det er tilfældet med RF, er en positiv serum ANA-titer ikke patognomonisk for en diagnose af SLE. Positive ANA-titere kan observeres hos raske personer eller være forbundet med kronisk inflammation (f.eks. atopisk dermatitis, dobermannhepatitis), infektionssygdomme (f.eks. Ehrlichiose, Leishmaniasis), neoplasi eller medicinering (f.eks. sulfonamider, penicillin, tetracykliner). Påvisning af serum-ANA bør derfor forbeholdes kliniske tilfælde, hvor der er stærk mistanke om SLE. Da nukleare antigener er velkonserverede mellem pattedyrsarter, bestemmes ANA-titer hos hunde ved KSVDL ved indirekte flourescerende antistofdetektion ved hjælp af rottehepatocytter som substrat (figur 2). Flere serielle fortyndinger af patientens serum inkuberes med et tyndt præparat af rotteleverceller. ANA i serummet binder sig til kerner i rottehepatocytterne. Derefter tilsættes et sekundært flourescent-mærket antistof for at fremhæve patientens antistoffer (dvs. ANA’er), der er komplekseret med deres nukleare antigener (figur 2).

Figur 2A. Skematisk fremstilling af detektion af ANA-titre i serum hos hunde ved hjælp af indirekte fluorescerende antistoffer (ikke i målestoksforhold).	Figur 2B. Positivt testresultat med immunofluorescens lokaliseret til kerner.

Konklusionen er, at serum RF- og ANA-titre kan være nyttige ved diagnosticering af autoimmune sygdomme. Det er vigtigt, at både serum RF- og ANA-titre bør forbeholdes patienter med kliniske symptomer, der er forenelige med henholdsvis reumatoid arthritis og systemisk lupus erythematosus. Infektionssygdomme, andre autoimmune sygdomme og neoplastiske tilstande bør udelukkes effektivt, før disse tests udføres, og især før positive resultater fortolkes. KSVDL’s klinisk immunologiske laboratorium tilbyder i øjeblikket valideret kommerciel påvisning af serum RF- og ANA-titere for hunde. Der anmodes om ca. 1-3 mL serum, der er adskilt fra blodklumpen og anbragt i et frisk rødt toprør, til testning. Når serumet er adskilt, skal det opbevares i køleskab og sendes med en kølepakning inden for 1-2 dage efter indsamlingen. For yderligere spørgsmål vedrørende en af disse test bedes du kontakte KSVDL Client Care på 1-866-512-5650 eller 785-532-5650.

Tabel 1. Diagnostisk tilgang til polyartritis hos hunde	Tabel 2: Foreslåede diagnostiske kriterier for SLE hos hunde