Validering af et ADCC-assay ved hjælp af humane primære naturlige dræberceller til evaluering af bioterapeutiske produkter med en Fc-region

Udviklingen af bioterapeutiske lægemidler kræver løbende forbedring af analysemetoderne til vurdering af deres kvalitetsegenskaber. En undergruppe af bioterapeutika er designet til at interagere med specifikke antigener, der er eksponeret på målcellers membraner eller cirkulerer i opløselig form, og effektorfunktioner opnås via genkendelse af deres Fc-region af effektorceller, der inducerer mekanismer som antistofafhængig cellemedieret cytotoksicitet (ADCC). ADCC-induktion er således en kritisk kvalitetsegenskab (CQA), som skal evalueres for at sikre bioterapeutisk effektivitet. Induktion af ADCC kan evalueres ved at anvende effektorceller fra forskellige kilder, f.eks. mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og genetisk modificerede cellelinjer (f.eks. transficerede NK’er eller Jurkat-celler), og der kan anvendes forskellige metoder til påvisning og fortolkning af resultaterne afhængigt af den type effektorceller, der anvendes. I den forbindelse er validering af analyserne relevant for at sikre resultaternes pålidelighed i forhold til det tilsigtede formål. Heri viser vi standardiseringen og valideringen af ADCC-assays til testning af tre bioterapeutiske proteiner ved hjælp af primære NK-celler fra frisk blod som effektorceller og påvisning af celledød ved hjælp af flowcytometri. Fordelen ved at anvende primære NK’er i stedet for modificerede celler er, at responsen er tættere på den respons, der forekommer in vivo, da cytotoksiciteten evalueres på en direkte måde. Vores resultater viser, at assaysene i alle tilfælde udviste en karakteristisk sigmoidal dosis/responskurve, der er i overensstemmelse med nøjagtige, præcise og specifikke parametre. Dermed er det validerede ADCC-assay et passende alternativ til at evaluere den biologiske aktivitet af denne type bioterapeutika.