Albino-Kaninchen

Primäre Reizung – Haut

Die Tiere, die häufig für den Nachweis der reizenden Eigenschaften von Chemikalien verwendet wurden, sind das Albino-Kaninchen, das Albino-Meerschweinchen und die weiße Maus. Wenn eine Chemikalie durch wiederholte dermale Anwendung appliziert wird, besteht das Ziel des Tests darin, sowohl topische als auch systemische Wirkungen festzustellen. Wenn Verbindungen in erheblichem Maße von der Haut absorbiert werden, kann die LD50 bestimmt werden. Bei der Verwendung von Kaninchen kann die Versuchsdauer von mindestens 3 Tagen, in denen der Wirkstoff einmalig aufgetragen wird, bis zu 2 Jahren variieren. Wenn es sich um eine Langzeitstudie handelt, werden die Tiere in ähnlicher Weise wie bei den zuvor beschriebenen allgemeinen Langzeitstudien beobachtet, d. h. die Tiere werden hämatologisch, klinisch-chemisch und urinologisch untersucht. Wenn karzinogene Wirkungen bewertet werden sollen, werden die Hauttests auf einen Zeitraum von 2 Jahren ausgedehnt, wobei der Wirkstoff während der Testdauer mindestens zweimal wöchentlich auf die Haut aufgetragen wird.

Der akute Hauttest ist in der Regel ein 3-Tage-Test. Er wird an einer begrenzten Anzahl von Albino-Kaninchen durchgeführt, die in zwei gleiche Gruppen aufgeteilt wurden. Der Bereich des Rückens jedes Tieres, der sich vom Halsansatz bis zum Hinterteil erstreckt, wird rasiert oder enthaart. Bei der einen Gruppe wird ein Bereich von etwa 1,5 cm der nackten Haut durch kleine Einschnitte in die oberste Zellschicht abgeschabt, d. h. die Einschnitte sind nicht tief genug, um die Lederhaut zu stören oder Blutungen zu verursachen. Handelt es sich bei dem Testmaterial um eine Flüssigkeit, so werden 0,5 ml oder weniger des Materials unter ein 1 × 1 Zoll großes Mullkissen gegeben, das über dem rasierten Bereich der Haut sowohl der abgeschabten als auch der nicht abgeschabten Tiere befestigt wird. Handelt es sich bei dem Mittel um einen Feststoff, so wird er in einem geeigneten Lösungsmittel wie Pflanzenöl oder Wasser aufgelöst, und 0,5 g der Substanz werden unter das Mullkissen gegeben. Wenn ein Lösungsmittel verwendet wird, wird eine Kontrollgruppe von Tieren, die nur dem Lösungsmittel ausgesetzt sind, in den Test einbezogen. Die Tiere werden dann in der Regel in Ruhesesseln fixiert, und der gesamte Rumpf jedes Tieres wird für die folgenden 24 Stunden in ein nicht saugfähiges Bindemittel eingewickelt. Nach dem 24-Stunden-Intervall werden die Binde und die Auflage entfernt, und der Bereich der Exposition wird bewertet und 48 Stunden später erneut bewertet.

Zur Bewertung der Auswirkungen auf die Haut wird ein Punktesystem für den Grad der Rötung und das Ausmaß des Ödems an der Stelle, an der die Gazeauflage angebracht wurde, verwendet. Das verwendete Punktesystem ist in der Regel dasjenige, das im Federal Register in Abschnitt 191.11 des Federal Hazardous Substances Act der Vereinigten Staaten veröffentlicht wurde. Bei der Bewertung werden für den Grad des Erythems und den Grad der Ödembildung getrennte Zahlen wie folgt vergeben: kein Erythem, 0; leichtes, kaum wahrnehmbares Erythem, 1; gut definiertes Erythem, 2; mäßiges bis schweres Erythem, 3; und schweres, rötliches Erythem mit Verletzungen in der Tiefe, 4; kein Ödem, 0; leichtes, kaum wahrnehmbares Ödem mit erhabenen Rändern, 2; mäßiges Ödem mit erhabener Oberfläche von ca. 1 mm, 3; schweres Ödem mit erhabener Fläche, die sich über den Expositionsbereich hinaus erstreckt, 4. Die für Erythem und Ödem in jedem Bewertungszeitraum und sowohl für die abgeschürfte als auch für die intakte Haut erzielten Werte werden aufgelistet und der Mittelwert für jede Gruppe und für jede Art von Auswirkung berechnet. Alle acht Mittelwerte werden dann addiert und durch 4 geteilt, da es für jede Wirkung (Erythem und Ödem) vier Mittelwerte gibt, was eine endgültige numerische Zahl ergibt, die den primären Reizungswert darstellt. Wenn neben der lokalen Toxizität auch die systemische Toxizität bestimmt werden soll, werden die Tiere einmalig wie oben beschrieben behandelt, mit der Ausnahme, dass die exponierte Stelle nach dem Entfernen der Mullbinde gewaschen wird und die Tiere in den darauffolgenden 14 Tagen auf Anzeichen lokaler und systemischer Wirkungen beobachtet werden.

In Langzeitstudien mit wiederholter Verabreichung über einen Zeitraum von drei Monaten werden junge Albino-Kaninchen beiderlei Geschlechts nach dem Zufallsprinzip in drei Gruppen mit jeweils drei bis sechs Tieren plus einer gleichen Anzahl von Kontrolltieren aufgeteilt. Die Expositionsstelle auf der Haut von mindestens zwei Tieren jeder Gruppe wird abgeschabt. Das Testmaterial wird an 5 Tagen/Woche für insgesamt 60 Anwendungen direkt auf die Haut aufgetragen. Der gesamte Rumpf jedes Tieres wird wie im vorherigen Test eingewickelt und mit Klebeband gesichert. Den Tieren werden Halsbänder angelegt, um ein Verschlucken des Testmaterials zu verhindern. Während des Tests werden die beobachteten topischen Wirkungen in regelmäßigen Abständen bewertet und die Tiere auf systemische Wirkungen beobachtet. Am Ende der Expositionssequenz werden die Tiere getötet und vollständig seziert. Histologische Schnitte des Hautareals, dem die Tiere ausgesetzt waren, sowie aller abnormalen Gewebe werden ausgewertet.

Die Untersuchung möglicher karzinogener Wirkungen bei wiederholter topischer Verabreichung chemischer Stoffe umfasst Studien mit einer Dauer von 3 Monaten bis zu 2 Jahren. Die üblicherweise verwendeten Tiere sind weiße Mäuse, und der Test umfasst sowohl Positiv- und Negativkontrollgruppen als auch mindestens zwei Testgruppen, die hohen und niedrigen Konzentrationen des Wirkstoffs zugeordnet werden. Jede Gruppe besteht aus 25 bis 50 männlichen und ebenso vielen weiblichen Tieren, die alle einzeln untergebracht sind. Die Haut jedes Tieres wird über dem Nackenansatz und zwischen den Schulterblättern rasiert. Das Mittel wird auf die freiliegende Haut gestrichen oder aus einer Pipette aufgetropft. Bei jeder Anwendung wird ein Volumen von 0,1 ml aufgetragen, und die Tiere werden während der Dauer des Versuchs zweimal wöchentlich behandelt. Die Tiere, die den Versuch überleben, sowie die Tiere, die während des Versuchs erkranken, werden seziert. Die histopathologische Untersuchung aller Gewebe erfolgt wie bei den herkömmlichen chronischen Toxizitätstests. Besonderes Augenmerk wird darauf gelegt, die Tiere während des Versuchsverlaufs auf das Auftreten und die Art von Hauttumoren zu untersuchen. Diese Tests werden üblicherweise so modifiziert, dass sie Verfahren umfassen, mit denen festgestellt werden kann, ob die getestete Chemikalie das Auftreten von Tumoren auslöst oder fördert.