Alpha-2-Adrenorezeptor-Agonisten blockieren die stressinduzierte Wiederaufnahme des Kokainkonsums

Experiment 1: Auswirkungen von Clonidin, Lofexidin und Guanabenz auf die fußschockinduzierte NE-Freisetzung

Versuchspersonen

Bei den Versuchspersonen handelte es sich um männliche Long-Evans-Ratten (Charles River, Quebec), die zu Beginn des Experiments 300-350 g wogen. Während des gesamten Versuchs wurden die Tiere in einem feuchtigkeits- und temperaturkontrollierten Kolonieraum mit umgekehrtem Licht-Dunkel-Schema (Licht an 1730-0530 Uhr) untergebracht und hatten freien Zugang zu Standard-Laborrattenfutter und Wasser. Die Versuchsverfahren folgten den CCAC-Richtlinien und wurden vom Tierschutzausschuss der Concordia University genehmigt.

Chirurgie

Vor der Operation wurden die Ratten mit Natrium-Pentobarbital (65 mg/kg, i.p.) betäubt und erhielten Atropinsulfat (0,6 mg/ml; 0,2 ml/Ratte, SC) und ein Antibiotikum (Penlong, Rogar/STB Inc.; 0,1 ml/Ratte, i.m.) injiziert. Für das anschließende Einführen der Dialysesonden wurden Führungskanülen (20 Gauge; Plastics One) implantiert; eine wurde im PFC und eine im AMG in den gegenüberliegenden Hemisphären platziert. Die Tiere, an denen die Auswirkungen von Guanabenz untersucht wurden, erhielten eine einzige Führungskanüle, die auf das PFC ausgerichtet war. Die Hemisphäre, in die die jeweiligen Führungskanülen implantiert wurden, war bei allen Behandlungen gleich. Die verwendeten stereotaktischen Koordinaten (relativ zum Bregma und zur Schädeloberfläche) waren wie folgt: AMG, AP -3,0 mm, ML ± 4,5 mm, DV -6,7 mm; PFC, AP + 3,2 mm, ML ± 0,5 mm, DV -1,5 mm (Paxinos und Watson 1997). Beim Einführen ragte der Schaft der Dialysesonde 1 mm aus den Führungskanülen heraus. Die implantierten Führungskanülen wurden mit Schrauben aus rostfreiem Stahl und Zahnzement am Schädel befestigt. Die Führungskanülen wurden mit einschraubbaren Obeduratoren verschlossen. Alle Tiere wurden vor den Tests für eine Erholungszeit von mindestens einer Woche in den Kolonieraum zurückgebracht.

Mikrodialyse

Die Mikrodialyse wurde in vier sechseckigen Testkammern (42 × 39 × 33,5 cm) aus Plexiglas mit Holzdecken und Böden aus Edelstahlstäben durchgeführt. Um jede Kammer waren dunkle Vorhänge gezogen, und die Beleuchtung erfolgte in einem umgekehrten Zyklus durch Deckenlampen (15 W). Die Dialysesonde bestand aus einer 1,8 mm (AMG) bzw. 3,5 mm (PFC) langen semipermeablen Dialysemembran (Spectra/Por; 240 μm o.d., 13000 M.W. cutoff), die an einem Ende verschlossen und am anderen Ende mit einem 19 mm langen Edelstahlrohr der Stärke 26 verbunden war. Ein 40 bis 50 cm langer PE-20-Schlauch verband das andere Ende der Edelstahlwelle mit einem über der Prüfkammer angebrachten Infusionsdrehgelenk, das wiederum über einen PE-20-Schlauch mit einer Infusionspumpe mit variabler Geschwindigkeit verbunden war. Ein Röhrchen aus Quarzglas mit kleinem Durchmesser verlief im Inneren der Sonde, wobei ein Ende 0,5 mm von der Sondenspitze entfernt lag und das andere Ende 35 cm unterhalb des Infusionswirbels aus dem PE-Schlauch austrat. Die äußere Länge des PE-20-Schlauchs wurde durch Stahlfederhülsen vor Beschädigungen geschützt. Die Sonden waren so konstruiert, dass die gesamte Länge der semipermeablen Membran unterhalb der Spitze der Führungskanüle verlief.

Die Wirkungen der einzelnen getesteten Medikamente wurden in getrennten Gruppen untersucht. Innerhalb jeder Gruppe wurde jedes Tier nach dem Zufallsprinzip einer Behandlungsbedingung zugewiesen. Tiere, die Vehikelinjektionen erhielten, wurden in jeder Gruppe durchgeführt, aber für die statistische Analyse zu einer einzigen Gruppe zusammengefasst. Die endgültigen Gruppengrößen (PFC/ AMG) waren wie folgt: Vehikel (n = 15/17), Clonidin 20 μg/kg (n = 7/6), Clonidin 40 μg/kg (n = 9/5), Lofexidin 75 μg/kg (n = 6/6), Lofexidin 150 μg/kg (n = 5/6), Guanabenz 640μg/kg (n = 4, PFC). Mit Ausnahme der Tiere, die Guanabenz erhielten, wurden alle Probanden zweimal dialysiert, einmal in der PFC und einmal in der AMG mit einem Abstand von 3-4 Wochen zwischen den Tests.

Die Sonden wurden am Tag vor Beginn der Mikrodialysetests eingeführt. Um eine Okklusion zu verhindern, wurde künstlicher Liquor (145 mM Na+, 2,7 mM K+, 1,22 mM Ca2+, 1,0 mM Mg2+, 150 mM Cl-, 0,2 mM Ascorbat, 2 mM Na2HPO4, pH 7,4 ± 0,1) über Nacht mit einer Rate von 0,06 μl/min perfundiert. Die Dialysatprobenahme und die Aktivitätsüberwachung begannen am nächsten Morgen. Die Dialysatflussrate wurde auf 0,6 μl/min erhöht, und alle 20 Minuten wurden Dialysatproben (∼12 μl/Probe) entnommen. Die Proben wurden so lange entnommen, bis ein stabiler Ausgangswert erreicht war, der definiert war als ein Minimum von drei aufeinanderfolgenden Proben, bei denen die NE-Konzentrationen im Dialysat um ±10 % variierten. Nach Erreichen stabiler NE-Basisspiegel erhielten alle Tiere eine i.p.-Injektion (1 ml/kg) des entsprechenden Medikaments oder Vehikels, die 40 Minuten vor einem 10-minütigen Fußschock verabreicht wurde. Die Schocks wurden nach einem variablen Zeitplan in einem mittleren Intervall von 40 Sekunden (Bereich 10-70 Sekunden) verabreicht; jeder Schock (0,6 mA) dauerte 0,5 Sekunden. Die Proben wurden für weitere 120 Minuten (6 Proben) gesammelt. Die Proben wurden sofort mit einem von zwei ähnlichen Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesystemen mit elektrochemischer Detektion (HPLC-EC) analysiert. Die Proben (10 μl) wurden auf Umkehrphasensäulen geladen (15 × 0,46 cm; HAISIL C18, 5 μm; Sci. Products & Equipment, Concord, Ontario) durch manuelle Injektionsports (Reodyne 7125; 20 μl-Schleife) geladen; die Reduktions- und Oxidationsströme für NE, Dihydroxyphenylessigsäure (DOPAC), 5-Hydoxyindolessigsäure (5-HIAA) und Homovanillensäure (HVA) wurden mit coulometrischen Zweikanal-ESA-Detektoren (Coulochem 5100, mit einer Konditionierungszelle Modell 5021 und einer Analysezelle Modell 5011, Sci. Products & Equipment) gemessen. Die Ströme für NE wurden unabhängig von denen für DOPAC und HVA über getrennte Kanäle der Coulochem-Detektoren gemessen. Die mobilen Phasen (Natriumacetat 36 mM, SOS 3,1 mM, EDTA 100 μM, 5 % Acetonitril, mit Eisessig auf pH 3,7 eingestellt) wurden mit Waters 510 HPLC-Pumpen mit einer Flussrate von 1,4 ml/min durch jedes geschlossene System zirkuliert. Die für NE, DOPAC und HVA erhaltenen Peaks wurden mit dem EZChrom Chromatography Data System (Sci. Products & Equipment) integriert und quantifiziert. Die Dialysatproben der einzelnen Ratten wurden immer mit demselben HPLC-EC-System analysiert, und die Zuordnung der Tiere zu den einzelnen Systemen wurde für alle Behandlungsgruppen ausgeglichen. Vor der Probenahme wurde das Futter aus den Kammern entfernt, ein Trinkschlauch für Wasser war jedoch vorhanden. Nach Abschluss des Tests wurde die korrekte Platzierung der Sonde durch die Untersuchung von 30 μm langen Schnitten durch die mit Cresylviolett gefärbten Stellen der Sondenplatzierung bestätigt.

Versuch 2: Auswirkungen von Clonidin auf das durch Fußschock und Kokain induzierte Reinstatement

Versuchspersonen

Bei den Versuchspersonen handelte es sich um 25 männliche Long-Evans-Ratten (Charles River, Quebec), die zu Beginn des Versuchs 350-425 g wogen. Die Tiere wurden wie in Versuch 1 beschrieben gehalten.

Operation

Die Tiere wurden für die Operation wie in Versuch 1 beschrieben vorbereitet. Ein intravenöser Katheter (Dow Corning) wurde in die rechte Jugularvene implantiert. Ein 3 cm langer Silikonschlauch (Innendurchmesser 0,30 mm, Außendurchmesser 0,64 mm) wurde in die Vene eingeführt und mit einem Schrumpfschlauch mit einem 9 cm langen Silikonschlauch (Innendurchmesser 0,51 mm, Außendurchmesser 0,94 mm) verbunden, der subkutan zur Schädeldecke geführt wurde. Der Katheter wurde mit Seidennähten an der Vene befestigt und mündete in ein Verbindungsstück (eine modifizierte 22-Gauge-Kanüle; Plastics One, Roanoke, VA), das mit Juwelierschrauben und Zahnzement am Schädel befestigt wurde; über die Öffnung der Kanüle wurde eine Kunststoffkappe gesetzt. Die Tiere hatten 1-2 Wochen Zeit, sich von der Operation zu erholen.

Apparatur

Die in den Experimenten verwendeten Kammern zur Selbstverabreichung waren mit einem einziehbaren Hebel (Med Associates, St Albans, VT) und einem nicht einziehbaren „Dummy“-Hebel ausgestattet. Beide Hebel befanden sich 9 cm über dem Boden. Eine Infusionspumpe (Razel Scientific Instruments, Stamford, CT) wurde durch die Reaktionen auf den einziehbaren oder „aktiven“ Hebel aktiviert. Die Reaktionen auf den Dummy-Hebel wurden aufgezeichnet, führten aber nicht zur Aktivierung der Pumpe. Die Medikamentenlösung wurde über einen Zeitraum von 10 Sekunden in einem Volumen von 65 μl abgegeben. Während des gesamten Infusionszeitraums leuchtete ein weißes Stimuluslicht direkt über dem aktiven Hebel auf, und während dieser Zeit wurden zusätzliche Reaktionen aufgezeichnet, die jedoch nicht zu einer Reaktivierung der Pumpe führten. Jede Selbstverabreichungskammer war mit einem intermittierenden elektrischen Fußschock mit konstantem Strom ausgestattet, der über einen Scrambler an den Gitterboden abgegeben wurde (Grason-Stadler Generator #E1064GS oder Med Associates). Der Fußschock wurde 15 Minuten lang nach einem variablen Zeitplan in einem mittleren Intervall von 40 Sekunden (Bereich 10-70 Sekunden) verabreicht. Jeder Schock (0,6 mA) hatte eine Dauer von 0,5 Sekunden. Diese Intensität der Fußschocks hat sich in unserem Gerät als das Minimum erwiesen, das erforderlich ist, um ein zuverlässiges Reinstatement zu bewirken.

Medikamente

Cocain HCl wurde von BDH Chemicals (Toronto, Kanada) bezogen und in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst. Clonidin HCl wurde von Sigma (St. Louis, MO) bezogen, in physiologischer Kochsalzlösung gelöst und i.p. injiziert (0, 20 und 40 μg/kg).

Verfahren

Phase 1: Training. Die Ratten wurden darauf trainiert, Kokain HCl (0,5 mg/kg/Infusion, i.v.) nach einem festen Verhältnis-1-Schema der Verstärkung während einer täglichen 3-stündigen Selbstverabreichungssitzung selbst zu verabreichen. Jeden Tag wurde die Hälfte der Tiere morgens, etwa drei Stunden nach dem Ausschalten des Lichts, für die Selbstverabreichungssitzung in die Operantenkammern gebracht, die andere Hälfte der Tiere wurde nachmittags, etwa sieben Stunden nach dem Ausschalten des Lichts, in die Kammern gebracht. Die Gruppe der Tiere, die für die morgendlichen und nachmittäglichen Sitzungen eingeteilt wurden, wechselte täglich, so dass am Ende des Trainings alle Tiere zu beiden Zeiten die gleiche Anzahl von Selbstverabreichungssitzungen erhalten hatten. Es war wichtig, dass alle Tiere ähnliche Erfahrungen mit der Selbstverabreichung am frühen und späten Tag machten, da in Phase 2 alle Tiere morgens eine Extinktionssitzung erhielten, gefolgt von einer Testsitzung, die normalerweise am Nachmittag stattfand. Zu Beginn jeder Sitzung wurde ein rotes Hauslicht für 10 Sekunden eingeschaltet, bevor der einziehbare Hebel in den Käfig eingeführt wurde. Das Licht direkt über dem aktiven Hebel leuchtete in den ersten 30 Sekunden nach der Präsentation des Hebels. Das Hauslicht blieb während der gesamten Sitzung eingeschaltet. Wie bereits erwähnt, führte die Betätigung des aktiven Hebels zur Aktivierung der Infusionspumpe und zum Aufleuchten des Lichts über dem Hebel während der 10 Sekunden der Medikamentenabgabe. Zusätzliche Hebelbewegungen während der Medikamentenabgabe wurden aufgezeichnet, führten aber nicht zur Reaktivierung der Pumpe. Die Trainingsbedingungen galten für 10 bis 12 Tage. Am Ende des Trainings wurden die Tiere 7 bis 13 Tage lang ungestört im Kolonieraum gelassen. Anschließend erfolgten die Extinktion und die Tests. In diesem Versuch und in Versuch 3B wurden Tiergruppen mit unterschiedlichen Dosen der Testdrogen zusammengestellt. Alle Tiere in jeder Gruppe wurden dann drei Testbedingungen unterzogen: Kochsalzlösung, Kokain und Fußschock.

Phase 2: Extinktion und Testung. Während der Extinktion und der Tests, die an vier aufeinanderfolgenden Tagen stattfanden, waren die Tiere 24 Stunden pro Tag in den Selbstverabreichungskammern untergebracht. Futter und Wasser standen den Tieren frei zur Verfügung, außer während der täglichen Extinktions- und Testsitzungen. Die Tiere wurden am Abend vor dem ersten Tag der Extinktion und der Tests in die Kammern gebracht. Da während der Trainingsphase täglich zwei getrennte Gruppen von Ratten getestet wurden, wurde eine Gruppe von Tieren in den ersten vier Tagen von Phase 2 und die andere Gruppe von Tieren in den folgenden vier Tagen getestet. Während der Extinktion und der Tests wurden alle Bedingungen beibehalten, die während des Trainings herrschten, mit der Ausnahme, dass das Betätigen des Hebels nicht zu einer Kokaininfusion führte.

In diesem und allen folgenden Reinstatement-Experimenten erhielten die Tiere mehrere tägliche 1-stündige Extinktionssitzungen, die durch dazwischen liegende Zeiträume, in denen der Hebel zurückgezogen wurde, getrennt waren. An Tag 1 erhielten die Tiere vier Extinktionssitzungen; an den Tagen 2 bis 4 erhielten die Tiere zwei bis drei Extinktionssitzungen, die ausreichten, um ein Ausgangsniveau der Reaktion von 15 oder weniger Reaktionen in einer Stunde zu erreichen, gefolgt von einer 180-minütigen Testsitzung. Die Dauer der dazwischen liegenden Zeiträume wurde für jeden Versuch konstant gehalten und entsprach der für die Absorption des Medikaments erforderlichen Zeitspanne zwischen der Injektion der Vorbehandlung und dem Beginn des Tests. Im vorliegenden Experiment betrug die Dauer der Zwischenphasen 40 Minuten.

Beim Test wurden getrennte Tiergruppen entweder mit 0, 20 oder 40 μg/kg Clonidin (i.p.) vor jedem der drei Wiederherstellungstests (Kochsalzlösung, Kokain und Fußschock) vorbehandelt, die an aufeinanderfolgenden Tagen und in einer gegensätzlichen Reihenfolge durchgeführt wurden. Clonidin wurde 40 Minuten vor dem Einsetzen des Hebels injiziert. Für die Kochsalz- und Kokain-Priming-Tests erhielten die Tiere 5 Minuten vor dem Einsetzen des Hebels eine unkontrollierte i.p.-Injektion von Kochsalzlösung oder Kokain (20 mg/kg). Bei den Fußschocktests wurden die Tiere unmittelbar vor dem Einsetzen des Hebels einer 15-minütigen kurzen intermittierenden Fußschockbelastung ausgesetzt. Die Testsitzungen dauerten 3 Stunden. Die Kokain-Dosis und die Fußschock-Parameter wurden auf der Grundlage früherer Arbeiten dieses Labors gewählt (Erb et al. 1996; Erb et al. 1998; Shaham et al. 1998). Die Dosen von Clonidin wurden auf der Grundlage von Reinstatement-Experimenten gewählt, die wir mit heroinerfahrenen Ratten durchgeführt haben (Shaham et al. 2000).

Experiment 3A: Auswirkungen von Lofexidin auf hohe Reaktionsraten bei Saccharose

Da das pharmakologische Profil von Lofexidin nicht so gut charakterisiert ist wie das von Clonidin, wurde ein Experiment durchgeführt, um festzustellen, ob und in welchen Dosen Lofexidin Leistungsdefizite hervorruft. Die Dosen in den Wiederherstellungstests wurden auf der Grundlage der Ergebnisse dieses Experiments gewählt.

Versuchspersonen

Die Versuchspersonen waren 8 männliche Long-Evans-Ratten (Charles River, Quebec), die zu Beginn des Experiments 400-550 g wogen. Die Ratten wurden zuvor in einem Experiment zur Untersuchung der durch Fußschock induzierten Wiederaufnahme der Saccharose-Suche verwendet (Buczek et al. 1999). Die Tiere wurden unter ähnlichen Bedingungen gehalten, wie sie in Experiment 1 beschrieben wurden.

Apparat

Jede Selbstverabreichungskammer war mit zwei stationären Hebeln ausgestattet, die symmetrisch auf einer Seitenwand, 5 cm über dem Boden, zentriert waren. Antworten auf einen Hebel, den „aktiven“ Hebel, aktivierten eine Pumpe (Razel Sci. Stamford, CT). Die Reaktionen auf den anderen Hebel, den „Dummy“-Hebel, wurden aufgezeichnet, blieben aber ohne Folgen. Die Aktivierung der Pumpe führte zu einer 20-sekündigen Abgabe von 0,18 ml Saccharoselösung in einen Flüssigkeitstropfenbehälter, der sich zwischen den beiden Hebeln befand. Während des gesamten Zeitraums der Saccharoseabgabe leuchtete ein weißes Stimuluslicht direkt über dem aktiven Hebel, und während dieser Zeit wurden zusätzliche Reaktionen aufgezeichnet, die jedoch nicht zu einer Reaktivierung der Pumpe führten.

Medikamente

Lofexidin HCl wurde großzügig von Keith Davies, Britannia Pharmaceuticals Ltd., UK, zur Verfügung gestellt. Das Medikament wurde in physiologischer Kochsalzlösung aufgelöst und i.p. injiziert (0, 80, 120, 160 oder 200 μg/kg).

Verfahren

Tiere, die zuvor in einer anderen Studie (Buczek et al. 1999) gelernt hatten, sich Saccharose selbst zu verabreichen, erhielten anschließend fünf Sitzungen an fünf aufeinanderfolgenden Tagen, in denen sie sich eine 30%ige Saccharoselösung nach einem FR-1-Schema selbst verabreichten. In den folgenden täglichen Sitzungen wurde den Tieren 60 Minuten vor Beginn der Selbstverabreichung entweder Vehikel (0 μg/kg) oder Lofexidin (80, 120, 160 oder 200 μg/kg, i.p.) injiziert. Alle Tiere erhielten alle Lofexidin-Dosen in ausgewogener Reihenfolge; die höchste Lofexidin-Dosis wurde zweimal getestet. Auf jede Sitzung, in der die Tiere mit Lofexidin behandelt wurden, folgte eine Sitzung mit Kochsalzlösung als Vorbehandlung, um die Möglichkeit von Verschleppungseffekten des Arzneimittels zu minimieren.

Versuch 3B: Auswirkungen von Lofexidin auf das durch Fußschock und Kokain induzierte Reinstatement

Versuchspersonen

Bei den Versuchspersonen handelte es sich um 49 männliche Long-Evans-Ratten (34 von Charles River, Quebec; 15 von Harlan Sprague Dawley, USA), die zu Beginn des Versuchs 350-400 g wogen. Die Tiere wurden wie in Versuch 1 beschrieben gehalten. Es gab in keiner Phase des Experiments offensichtliche Unterschiede in der Reaktion zwischen den Tieren der beiden Anbieter.

Ablauf

Phase 1: Training. Die Tiere wurden darauf trainiert, sich unter den in Versuch 2 beschriebenen Bedingungen selbst Kokain zu verabreichen.

Phase 2: Extinktion und Prüfung. In diesem Versuch betrugen die dazwischen liegenden Perioden, wie oben beschrieben, 60 Minuten. Beim Test wurden getrennte Gruppen von Tieren vor jedem der drei Wiederherstellungstests (Kochsalzlösung, Kokain und Fußschockstress), die an aufeinanderfolgenden Tagen und in gegensätzlicher Reihenfolge durchgeführt wurden, entweder mit 0, 50, 100, 150 oder 200 μg/kg Lofexidin i.p. vorbehandelt (siehe Versuch 2). Lofexidin wurde 60 Minuten vor dem Einsetzen des Hebels injiziert. Die Testsitzungen dauerten 3 Stunden. Die Lofexidin-Dosen wurden auf der Grundlage der in Versuch 3A erzielten Ergebnisse ausgewählt.

Versuch 4: Auswirkungen von Guanabenz auf das durch Fußschock und Kokain induzierte Reinstatement

Versuchspersonen

Bei den Versuchspersonen handelte es sich um 18 männliche Long-Evans-Ratten (Charles River, Quebec), die zu Beginn des Versuchs 350-400 g wogen. Die Tiere wurden wie in Versuch 1 beschrieben gehalten.

Droge

Guanabenz wurde von Sigma (St. Louis, MO) gekauft und in physiologischer Kochsalzlösung gelöst und i.p. injiziert (0 und 640 μg/kg).

Verfahren

Phase 1: Training. Die Tiere wurden unter den in Versuch 2 beschriebenen Bedingungen auf die Selbstverabreichung von Kokain trainiert.

Phase 2: Extinktion und Prüfung. In diesem Versuch betrugen die dazwischen liegenden Perioden, wie oben beschrieben, 60 Minuten. Bei der Prüfung wurden die Tiere mit 0 oder 640 μg/kg Guanabenz i.p. vorbehandelt, und zwar vor jedem der beiden Wiederherstellungstests (kein Fußschock, Fußschock oder Kochsalzlösung, Kokain), die an aufeinanderfolgenden Tagen durchgeführt wurden (siehe Versuch 2). Guanabenz wurde 60 Minuten vor dem Einsetzen des Hebels injiziert. Die Testsitzungen dauerten 3 Stunden. Die Guanabenz-Dosis wurde auf der Grundlage der Substituierbarkeit von 40 μg/kg Clonidin in einem Drogenunterscheidungsverfahren gewählt (Bennett und Lal 1982).

Statistische Analysen

Die Mikrodialysedaten wurden mit einer gemischtfaktoriellen ANOVA für die Konzentration von extrazellulärem NE in 20-minütigen Dialysatproben analysiert; der Faktor zwischen den Versuchspersonen war die Dosis von Clonidin (0, 20, 40 μg/kg), Lofexidin (0, 75 oder 150 μg/kg) oder Guanabenz (0 oder 640 μg/kg) und die wiederholte Messung war die Zeit. Signifikante Wechselwirkungen zwischen Zeit und Dosis wurden zu bestimmten Zeitpunkten einer einseitigen ANOVA für den Faktor Dosis unterzogen. Gegebenenfalls wurden Post-hoc-Tests (Fisher’s LSD, p < .05) durchgeführt, um die Vehikel- (0 μg/kg) mit den Medikamentenbedingungen zu vergleichen.

Die beiden abhängigen Maße in den Tests zur Wiederherstellung waren die Anzahl der Reaktionen auf den aktiven Hebel (Infusionen + Time-out-Reaktionen) und die Anzahl der Reaktionen auf den inaktiven Hebel innerhalb von drei Stunden. Alle Verhaltensdaten sind als Mittelwerte ± SEM angegeben. Aufgrund der beträchtlichen Variabilität bei der Anzahl der Reaktionen in den verschiedenen Tests zur Wiederherstellung wurden gegebenenfalls nichtparametrische Statistiken für verwandte (Friedman und Wilcoxon) und nicht verwandte (Kruskal-Wallis und Mann-Whiney) Stichproben verwendet.

Für die Saccharose-Studie (Experiment 3A) waren die abhängigen Maße die Anzahl der Reaktionen am aktiven (verstärkte + Timeout-Reaktionen) und inaktiven Hebel sowie die Anzahl der erhaltenen Verstärkungen. Es wurden ANOVAs mit wiederholten Messungen durchgeführt, wobei die Dosis als Faktor innerhalb des Subjekts verwendet wurde. Gegebenenfalls wurden Post-hoc-Tests (Fisher’s LSD, p < .05) durchgeführt, um die Vehikel- (0 μg/kg) mit den Drogenbedingungen zu vergleichen.