Amphotrope und VSV-G-pseudotypisierte retrovirale Vektoren transduzieren humane hämatopoetische Vorläuferzellen mit ähnlicher Effizienz

Eine Einschränkung des retroviralen Gentransfers in hämatopoetische Stammzellen ist der geringe Gehalt an amphotropen Virusrezeptoren. In der vorliegenden Studie haben wir untersucht, ob retrovirale Vektoren, die mit dem G-Protein des vesikulären Stomatitis-Virus (VSV) pseudotypisiert sind, diese Beschränkung überwinden können. Menschliche Vorläuferzellen, die durch magnetische Beads und Zellsortierung gereinigt wurden, wurden mit einem amphotropen oder VSV-G-pseudotypisierten retroviralen Vektor transduziert, der den verkürzten menschlichen Nervenwachstumsfaktor-Rezeptor als Markergen enthält. Die Zellen wurden mit flt-3-Ligand, Stammzellfaktor und Interleukin-3 vorstimuliert und auf Fibronektin transduziert. Die Expression der Markergene wurde durchflusszytometrisch analysiert. Die Transduktionseffizienz von amphotropen und VSV-G-pseudotypisierten Viren für CD34+ Zellen unterschied sich nicht signifikant. Der Gentransfer in CD34+CD38- Zellen, die mit unreifen Vorläuferzellen angereichert sind, war nicht eingeschränkt, und die Transfereffizienz für diese Untergruppe war für beide Pseudotypen ähnlich. Die Zugabe von Fibronektin verbesserte den Gentransfer mit dem amphotropen Vektor beträchtlich (5- bis 19,3-fach, Mittelwert 12,6), während die Wirkung auf den VSV-G-Pseudotyp weit weniger ausgeprägt war (1- bis 3,9-fach, Mittelwert 2,1, P = 0,04). Zusammenfassend lässt sich sagen, dass mit einem optimierten Transduktionsprotokoll ein hoher Gentransfer auf humane hämatopoetische Progenitoren erreicht wurde und die Transduktionseffizienz durch die Verwendung von VSV-G-Pseudotypen nicht weiter verbessert werden konnte. Bone Marrow Transplantation (2000) 25 , Suppl. 2, S75-S79.