Häufig verwendete Apoptose-Assays in der Apoptose-Forschung
Frage:
Was sind die am häufigsten verwendeten Apoptose-Assays?
Der Proteinmann sagt:
Die Apoptoseforschung erfordert den Einsatz einer breiten Palette von Apoptose-Assays, da der Prozess selbst recht kompliziert ist. Darüber hinaus gibt es keinen einzigen Parameter, der den Zelltod in allen Systemen definieren kann, so dass Sie bei Ihrer Forschung mehrere Ansätze verwenden sollten.
Haupttypen von Apoptose-Assays
Es gibt fünf verschiedene Arten von Apoptose-Assays, die derzeit in der Apoptose-Forschung verwendet werden. Dazu gehören Caspase-Assays, DNA-Fragmentierungs-Assays, Zellpermeabilitäts-Assays und Mitochondrien-Assays. Darüber hinaus gibt es auch eine Art von Assay, der zur Analyse der Apoptose-Signalwege verwendet werden kann.
Caspase-Assays. Das Vorhandensein von Caspase-Enzymen in einer beliebigen Probe ist ein sicherer Indikator dafür, dass komplexe biochemische Vorgänge im Zusammenhang mit der Apoptose ablaufen. Daher können Caspase-Assays verwendet werden, um Apoptose in Zellpopulationen in ihren frühesten Stadien nachzuweisen. Diese Assays verwenden routinemäßig spezifische Substrate, die von Kaspasen verdaut werden, um kolorimetrische oder fluorometrische Substrate freizusetzen.
DNA-Fragmentierungstests. Apoptose und DNA-Spaltung gehen Hand in Hand, so dass Sie das Ausmaß der Apoptose durch Messung der in Ihrer Probe vorhandenen DNA-Fragmente bestimmen können. Die meisten Forscher verwenden zu diesem Zweck die Apoptose-DNA-Leiteranalyse, die ELISA-Quantifizierung und TUNEL-Tests (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling).
Zellpermeabilitätstests. Das mittlere Stadium der Apoptose kann mit Hilfe von Zellpermeabilitätstests bestimmt werden. Wie Sie wahrscheinlich wissen, haben gesunde Zellen starre Plasmamembranen, während tote Zellen sehr durchlässige Zellmembranen haben. Aufgrund ihrer stark geschädigten Membranen können Fluoreszenzfarbstoffe leicht durch apoptotische Zellen hindurchgehen. Wenn dies geschieht, werden Sie ein charakteristisches Fluoreszenz- oder Färbemuster beobachten, das auf das Vorhandensein apoptopischer Zellpopulationen in Ihrer Probe hinweist.
Die erhöhte Zellpermeabilität führt auch zum Verlust von zytosolischen Proteinen aus der Zelle. Laktatdehydrogenase (LDH) ist ein lösliches zytosolisches Enzym, das nach dem Verlust der Membranintegrität infolge von Apoptose oder Nekrose in das Kulturmedium abgegeben wird. Die LDH-Aktivität kann daher als Indikator für die Unversehrtheit der Zellmembran verwendet werden und dient als allgemeines Mittel zur Bewertung der Zytotoxizität, die von chemischen Verbindungen oder toxischen Umweltfaktoren ausgeht. Es gibt mehrere Tests zur Quantifizierung der freigesetzten LDH.
Mitochondrientests. Mitochondriale Assays können helfen, Apoptose im Frühstadium zu bestimmen, da ein kationischer Farbstoff verwendet wird, der bei gesunden und apoptotischen Zellpopulationen eine unterschiedliche Fluoreszenz abgibt.
Wissen, welche Apoptose-Assays zu verwenden sind und wann sie zu verwenden sind, kann Ihnen bei Ihrer Forschung sehr helfen, so dass Sie sie am besten auswendig lernen sollten.