Validierung eines ADCC-Tests unter Verwendung menschlicher primärer natürlicher Killerzellen zur Bewertung biotherapeutischer Produkte mit einer Fc-Region

Die Entwicklung von Biotherapeutika erfordert eine kontinuierliche Verbesserung der Analysemethoden für die Bewertung ihrer Qualitätsmerkmale. Eine Untergruppe von Biotherapeutika ist so konzipiert, dass sie mit spezifischen Antigenen interagiert, die auf den Membranen der Zielzellen exponiert sind oder in löslicher Form zirkulieren. Die Effektorfunktionen werden durch die Erkennung ihrer Fc-Region durch Effektorzellen erreicht, die Mechanismen wie die antikörperabhängige zellvermittelte Zytotoxizität (ADCC) induzieren. Daher ist die ADCC-Induktion ein kritisches Qualitätsmerkmal (CQA), das bewertet werden muss, um die Wirksamkeit von Biotherapeutika zu gewährleisten. Die Induktion von ADCC kann durch den Einsatz von Effektorzellen aus verschiedenen Quellen, wie mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMC) und genetisch veränderten Zelllinien (z. B. transfizierte NKs oder Jurkat-Zellen), bewertet werden, und je nach Art der verwendeten Effektorzellen können unterschiedliche Ansätze für den Nachweis und die Interpretation der Ergebnisse verwendet werden. In diesem Zusammenhang ist eine Validierung der Assays wichtig, um die Zuverlässigkeit der Ergebnisse entsprechend dem beabsichtigten Zweck zu gewährleisten. In diesem Artikel zeigen wir die Standardisierung und Validierung von ADCC-Assays zur Prüfung der Wirksamkeit von drei biotherapeutischen Proteinen unter Verwendung von primären NK-Zellen aus frischem Blut als Effektorzellen und zum Nachweis des Zelltods mittels Durchflusszytometrie. Der Vorteil der Verwendung von primären NK-Zellen anstelle von modifizierten Zellen besteht darin, dass die Reaktion näher an der in vivo auftretenden Reaktion liegt, da die Zytotoxizität auf direktem Wege bewertet wird. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Assays in allen Fällen eine charakteristische sigmoide Dosis-Wirkungs-Kurve aufwiesen, die mit genauen, präzisen und spezifischen Parametern übereinstimmt. Damit ist der validierte ADCC-Assay eine geeignete Alternative zur Bewertung der biologischen Aktivitäten dieser Art von Biotherapeutika.