Agregación de la anfolina sobre la heparina y otros polisacáridos ácidos en el enfoque isoeléctrico

Se ha explorado el mecanismo de complejación de la Anfolina de rango pI 3,5–5 a la heparina en el enfoque isoeléctrico mediante la técnica de unión de colorantes a diferentes valores de pH en solución. No hay una interacción significativa entre la heparina y la Anfolina a pH 6,7. Se produce una unión débil, o selectiva, a pH 5,1, y una interacción muy fuerte a pH 3,5. En este último sistema, los componentes de la Anfolina parecen comportarse como policationes debido a su secuencia ordenada de cargas positivas, cada una de ellas con dos grupos de metileno, lo que favorece una fuerte unión a los polianiones. Además, parece haber estequiometrías variables para la fuerte unión entre la heparina y la Anfolina, dependiendo de sus cantidades relativas. Se propone que en una proporción baja de heparina a Anfolina (exceso de Anfolina), la agregación es perpendicular a la cadena de heparina, con la carga de amonio final de cada molécula de Anfolina neutralizando una carga negativa a lo largo de la molécula de heparina; en proporciones más altas (exceso de heparina), el segmento de Anfolina unido se alinea paralelamente a la molécula de heparina, de modo que en promedio un componente de Anfolina neutraliza aproximadamente tres cargas negativas. La formación de bandas de heparina en el enfoque isoeléctrico en el intervalo de pH de 3,0 a 4,5 puede explicarse por la agregación de los diversos componentes de la heparina en cantidades que dependen de la carga neta de las especies de Anfolina en el pH dado, y de las estequiometrías cambiantes en función de la variación de la relación entre la heparina y la Anfolina a lo largo del gradiente de pH. También se demostró la unión de la Anfolina al poligalacturonato en exceso de Anfolina en un rango de pH dependiente del grado de protonación de los grupos carboxilo de este polisacárido ácido, así como de la carga positiva neta de la Anfolina. La agregación observada a un pH de 4,2 a 4,5 condujo a la predicción y posterior demostración de que el poligalacturonato también presentaría unión al enfoque isoeléctrico. Esto apoya la hipótesis de que la agregación de la Anfolina en polianiones con suficiente densidad de carga es un fenómeno general que puede conducir a la formación de bandas espurias de ciertos polímeros en rangos de pH apropiados en el enfoque isoeléctrico. Sobre la base de su comportamiento en el enfoque isoeléctrico a pH 3,0–4,5, la fuerza de agregación de los polianiones estudiados parece ser heparina A = heparina B mayor que poliglutamato mayor que heparina B reducida en carboxilo mayor que ácido poligalacturónico.