Validación de un ensayo ADCC utilizando células asesinas naturales primarias humanas para evaluar productos bioterapéuticos con una región Fc

El desarrollo de productos bioterapéuticos requiere una mejora continua de las metodologías analíticas para la evaluación de sus atributos de calidad. Un subconjunto de productos bioterapéuticos está diseñado para interactuar con antígenos específicos que están expuestos en las membranas de las células diana o que circulan en forma soluble, y las funciones efectoras se logran mediante el reconocimiento de su región Fc por parte de las células efectoras que inducen mecanismos como la citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC). Así pues, la inducción de ADCC es un atributo de calidad crítico (CQA) que debe evaluarse para garantizar la eficacia bioterapéutica. La inducción de ADCC puede evaluarse empleando células efectoras de diferentes fuentes, como células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y líneas celulares modificadas genéticamente (por ejemplo, células NK transfectadas o células Jurkat), y pueden utilizarse diferentes enfoques para la detección e interpretación de los resultados en función del tipo de células efectoras utilizadas. En este sentido, la validación de los ensayos es relevante para asegurar la fiabilidad de los resultados de acuerdo con el propósito previsto. Aquí mostramos la estandarización y validación de ensayos ADCC para probar la potencia de tres proteínas bioterapéuticas utilizando células NK primarias obtenidas de sangre fresca como células efectoras y detectando la muerte celular por citometría de flujo. La ventaja de utilizar células NK primarias en lugar de células modificadas es que la respuesta es más cercana a la que se produce in vivo, ya que la citotoxicidad se evalúa de forma directa. Nuestros resultados indican que en todos los casos, los ensayos mostraron una curva sigmoidal característica de dosis/respuesta que cumple con parámetros exactos, precisos y específicos. Por lo tanto, el ensayo ADCC validado es una alternativa adecuada para evaluar las actividades biológicas de este tipo de bioterapéuticos.