Validation of an ADCC assay using human primary natural killer cells to evaluate biotherapeutic products bearing an Fc region

Biolääkkeiden kehittäminen edellyttää jatkuvaa analyyttisten menetelmien parantamista niiden laatuominaisuuksien arvioimiseksi. Osa biolääkkeistä on suunniteltu toimimaan vuorovaikutuksessa erityisten antigeenien kanssa, jotka ovat alttiina kohdesolujen kalvoilla tai kiertävät liukoisessa muodossa, ja efektoritoiminnot saavutetaan siten, että efektorisolut tunnistavat niiden Fc-alueen ja käynnistävät mekanismeja, kuten vasta-aineesta riippuvaisen soluvälitteisen sytotoksisuuden (ADCC). Näin ollen ADCC-induktio on kriittinen laatuominaisuus (CQA), jota on arvioitava bioterapian tehon varmistamiseksi. ADCC:n induktiota voidaan arvioida käyttämällä eri lähteistä peräisin olevia efektorisoluja, kuten perifeerisen veren mononukleaarisia soluja (PBMC) ja geneettisesti muunnettuja solulinjoja (esim. transfektoituja NK-soluja tai Jurkat-soluja), ja havaitsemiseen ja tulosten tulkintaan voidaan käyttää erilaisia lähestymistapoja riippuen käytetyistä efektorisoluista. Tältä osin määritysten validointi on tärkeää, jotta voidaan varmistaa tulosten luotettavuus käyttötarkoituksen mukaisesti. Tässä esitämme ADCC-määritysten standardoinnin ja validoinnin kolmen bioterapeuttisen proteiinin tehon testaamiseksi käyttäen tuoreesta verestä saatuja primaarisia NK-soluja efektorisoluina ja havaitsemalla solukuolema virtaussytometrialla. Primääristen NK-solujen käytön etuna muunnettujen solujen sijaan on, että vaste on lähempänä in vivo tapahtuvaa vastetta, koska sytotoksisuutta arvioidaan suoraan. Tuloksemme osoittavat, että kaikissa tapauksissa määritykset osoittivat tyypillistä sigmoidista annos-vastekäyrää, joka noudatti tarkkoja, täsmällisiä ja spesifisiä parametreja. Näin ollen validoitu ADCC-määritys on sopiva vaihtoehto tämäntyyppisten bioterapioiden biologisen aktiivisuuden arvioimiseksi.