Tests d’apoptose couramment utilisés dans la recherche sur l’apoptose
Question:
Quels sont les tests d’apoptose les plus couramment utilisés ?
L’homme protéine dit:
La recherche sur l’apoptose nécessite l’utilisation d’une large gamme de tests d’apoptose puisque le processus lui-même est assez compliqué. En outre, il n’y a pas de paramètre unique qui peut définir la mort cellulaire dans tous les systèmes, de sorte que vous devriez utiliser plusieurs approches dans le cadre de votre recherche.
Principaux types d’essais d’apoptose
Il existe cinq types distincts d’essais d’apoptose qui sont actuellement utilisés dans la recherche sur l’apoptose. Il s’agit des tests de caspase, des tests de fragmentation de l’ADN, des tests de perméabilité cellulaire et des tests mitochondriaux. En outre, il existe également un type de test qui peut être utilisé pour faciliter l’analyse des voies de signalisation de l’apoptose.
Tests caspase. La présence d’enzymes caspases dans tout échantillon donné est un indicateur sûr que des événements biochimiques complexes associés à l’apoptose ont lieu. Ainsi, les tests de caspase peuvent être utilisés pour détecter l’apoptose dans les populations cellulaires dès les premiers stades. Ces tests utilisent systématiquement des substrats spécifiques qui sont digérés par les caspases pour libérer des substrats colorimétriques ou fluorométriques.
Tests de fragmentation de l’ADN. L’apoptose et le clivage de l’ADN vont de pair, vous pouvez donc déterminer l’étendue de l’apoptose en mesurant les fragments d’ADN présents dans votre échantillon. La plupart des chercheurs utilisent à cette fin l’analyse en échelle de l’ADN apoptoïque, la quantification ELISA et les tests TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling).
Tests de perméabilité cellulaire. L’apoptose de stade intermédiaire peut être déterminée en utilisant des tests de perméabilité cellulaire. Comme vous le savez probablement, les cellules saines ont des membranes plasmatiques rigides tandis que les cellules mortes ont des membranes cellulaires hautement perméables. Avec leurs membranes hautement compromises, les colorants fluorescents peuvent facilement passer à travers les cellules apoptopiques. Lorsque cela se produit, vous observerez une fluorescence ou une coloration caractéristique qui indique la présence de populations de cellules apoptopiques dans votre échantillon.
L’augmentation de la perméabilité cellulaire entraîne également la perte de protéines cytosoliques de la cellule. La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme cytosolique soluble qui est libérée dans le milieu de culture après la perte d’intégrité de la membrane résultant soit de l’apoptose, soit de la nécrose. L’activité LDH peut donc être utilisée comme un indicateur de l’intégrité de la membrane cellulaire et sert de moyen général pour évaluer la cytotoxicité résultant de composés chimiques ou de facteurs toxiques environnementaux. Plusieurs dosages existent pour la quantification de la LDH libérée.
Dosages mitochondriaux. Les tests mitochondriaux peuvent aider à déterminer l’apoptose à un stade précoce puisqu’il utilise un colorant cationique qui émet une fluorescence différente lorsqu’il est utilisé dans des populations de cellules saines et des populations de cellules apoptopiques.
Savoir quels tests d’apoptose utiliser et quand les utiliser peut grandement vous aider dans votre recherche, donc vous feriez mieux de commencer à les connaître par cœur.