Allozim variáció a Stryphnodendron adstringens természetes populációjában a Rio Preto Állami Parkban, Brazília délkeleti részén

BIOCHEMISTRY AND PHYSIOLOGY

Allozim variáció a Stryphnodendron adstringens természetes populációjában a Rio Preto Állami Parkban, Brazília délkeleti részén

Jacqueline Siqueira GlasenappI,*; Priscila Barros BarbosaI; Vicente Wagner Dias CasaliI; Ernane Ronie MartinsII; Cosme Damião CruzIII

IUniversidade Federal de Viçosa, Departamento de Fitotecnia, Av. PH Rolfs s/n, 36570-000 Viçosa, MG, Brazília
IIUniversidade Federal de Minas Gerais, Instituto de Ciências Agrárias, Avenida Universitária 1.000, Bairro Universitário, Montes Claros, 39404-547 MG, Brazília
IIIUniversidade Federal de Viçosa, Departamento de Biologia, Av. PH Rolfs s/n, 36570-000 Viçosa, MG, Brazília

ABSTRACT

A Rio Preto Állami Parkban 63 Stryphnodendron adstringens fától vettünk leveleket és gyümölcsöket, hogy elemezzük az allozim szegregációt, az allozim lókuszok szövetspecifikus kifejeződését és genetikai paramétereiket. Az ADH, EST, ACP, PGM, PGI, GDH, G6PDH, GOT, IDH, LAP, MDH, PER és SKDH enzimrendszereket keményítő-gélelektroforézissel vizsgáltuk. A polimorf rendszerek PGI, IDH, MDH és GOT dimer kvaterner szerkezetet mutattak, míg az EST és PER monomer volt. A teljes várható genetikai diverzitás (HE) a levelek és a magok esetében 0,325, illetve 0,244 volt. A lókuszonkénti effektív allélszám (AE) 1,58 volt a levelekben és 1,42 a vetőmagokban. A S. adstringensben megfigyelt HE és AE értékek viszonylag magasabbak voltak, mint a más fás növények allozim vizsgálataiban tapasztalt átlagos értékek. A populáció fixációs indexeinek értékei a leveleket (f = 0,070) és a magokat (f = 0,107) figyelembe véve nem voltak szignifikánsak. A genetikai diverzitás és a lókuszonkénti tényleges allélszám magas értékei, valamint a nem szignifikáns fixációs index és a Hardy-Weinberg-arányok nemzedékek közötti kiigazítása a pgi-1, mdh-2 és idh-1 lókuszok esetében véletlenszerű párosodásra utaltak ebben a populációban. Az EST és PER enzimrendszerek a levélszövetekben, míg az MDH, IDH, PGI és GOT rendszerek a magszövetekben mutatták a legjobb felbontást.

Kulcsszavak: allozim szegregáció, genetikai diverzitás, heterozigozitás, gyógynövények

BEVEZETÉS

A Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (Mimosoideae, Leguminosae) egy kis örökzöld fa (helyi nevén barbatimão), amely széles körben elterjedt a Cerrado (brazil szavanna) biomban (Ortiz et al. 2003). A hagyományos gyógyászati gyakorlatban olyan betegségek kezelésére használják, mint fekélyek, sebek, aranyér (Barros 1982), gyomorhurut, torokfájás (Hirschmann & Arias 1990), leukorrhea, sérv, hasmenés, vérzés, gyűrűféreg és szemgyulladás (Pio Correa 1926, Almeida et al. 1998). Fürtös, andromonoid virágzatának virágzata apró és sűrűn elhelyezkedő virágokkal rendelkezik. A keresztbeporzás létfontosságú a gyümölcstermeléshez ennél a fajnál, és úgy tűnik, hogy a fő viráglátogatók a Hymenoptera fajok; egyéb viráglátogatók a Diptera, Lepidoptera és Coleoptera fajok. A gyümölcstermést az erőforrások elérhetősége korlátozza (Ortiz et al. 2003).

A korábban kiterjedt Cerrado területeket borító Stryphnodendron adstringens populációk az erdőirtás, a válogatás nélküli földhasználat és a városfejlesztés miatt mára kis töredékekben elszigetelődtek. Azon kevés területek egyike, ahol a Cerrado vegetáció még mindig jól megőrzött, a Rio Preto Állami Park (RPSP), amely São Gonçalo do Rio Preto településen található a Serra do Espinhaço rezervátum bioszférájában, 70 km-re Diamantina városától, Minas Gerais államban, Brazília délkeleti részén. A park 12 185 hektárnyi területet foglal magában, amelyet nagyrészt cerrado sensu stricto és campos de altitude növényzet borít. Az RPSP állat- és növényvilága nagyon gazdag, és számos veszélyeztetett faj, például a S. adstringens is megtalálható benne (IEF 2011). Az Espinhaço-hegység számos közép-keleti folyó, valamint a nagy São Francisco folyó vízgyűjtőjeként szolgál (Saadi 1995), és középső és déli részén két fontos biomot választ el: keleti lejtőin az atlanti esőerdőt, nyugati lejtőin pedig a cerrado biomot (Melo Júnior et al. 2001).

A gyógynövények (különösen az arboreális fajok) genetikai erőforrásai végesek, és sok Cerrado-növényt széles körben használtak anélkül, hogy törődtek volna megőrzésükkel vagy megújításukkal. Létfontosságú, hogy megmaradt erdei erőforrásainkat körültekintően használjuk – és a genetikai vizsgálatok alapvető fontosságúak ahhoz, hogy teljes mértékben megismerjük evolúciós folyamataikat, és hogy olyan természetvédelmi stratégiákat dolgozzunk ki, amelyek garantálják a kezelt fajok jövőjét. Az izoenzim technikák lehetőséget nyújtanak a trópusi erdei fák természetes populációiban a genetikai variációs szintek vizsgálatára és az ökológusok, természetvédők és erdőgazdálkodási személyzet számára fontos populációs folyamatok mérésére (Loveless 1992). A Cerrado fás szárú növények genetikai variációjának szintjéről azonban nagyon kevés tanulmány áll rendelkezésre. A S. adstringens genetikai diverzitásáról két tanulmányt publikáltak, az első mikroszatellita adatokon (Branco et al. 2010), a második RAPD markereken (Camillo et al. 2001) alapult, de izoenzim vizsgálatokról nem számoltak be.

Az izoenzimek kifejeződését szabályozó gének bizonyos fejlődési szakaszokban és meghatározott szervekben és szövetekben, illetve bizonyos ingerekre adott válaszként jelentkeznek (Ramírez és mtsai. 1991), a magokból, magoncokból és a kifejlett növények leveleiből származó kivonatok zimogramjai meglehetősen eltérőek lehetnek (Alfenas & Brune 1998). Számos enzim, például az észterázok, peroxidázok, foszfatázok és peptidázok is olyan fejlődési és környezeti változásokat mutattak, amelyek a mendeli szegregációt (Conckle 1971b, Kelley & Adamns 1977) és akár genetikai (Law 1967), akár környezeti poszttranszlációs módosításokat (Cullis 1977) utánoznak, így a nemspecifikus enzimvizsgálatokban a mendeli elemzések elengedhetetlenek (Hart & Langston 1977). Ezt a problémát úgy lehet a legjobban kezelni, ha Mendel-analízissel igazoljuk, hogy az izoenzimvariánsok adott halmaza valódi allozim, azaz ugyanazon a lókuszon különböző allélok kódolják őket (Broun & Moran 1979).

A jelen vizsgálat céljai az allozim lókuszok szövetspecifikus kifejeződésének és szegregációjának értékelése, genetikai paraméterek mérése, valamint a S. adstringens populációk genetikai szerkezetének jövőbeli értékeléséhez hasznos allozim variánsok leírása voltak.

ANYAG ÉS MÓDSZEREK

A RPSP rezervátum növényzete jól megőrzött, és a S. adstringens nagyon gyakori a parkon belül és kívül egyaránt, szinte folyamatosan előfordul Olhos D’Água és Diamantina településeken, Minas Gerais államban, Brazíliában. A S. adstringens 63 egyedének leveleiből és terméseiből (a végső érési stádiumban) vettek mintát. A mintázott fák közötti átlagos távolság 60 m volt. A gyümölcsöket papírzacskókban szállították, a leveleket pedig folyékony nitrogénbe áztatták, amíg a Viçosa Szövetségi Egyetem Növényi Szaporodási Laboratóriumában meg nem vizsgálták.

A jelen tanulmány a S. adstringens populációban jelen lévő izoenzimváltozatokra (allozimokra) összpontosított. Az elemzéseket keményítő-gélelektroforézis technikával végeztük, az allozimokat minden egyes mintavételezett fa leveléből és három magjából extraháltuk. Az Alfenas és munkatársai (2006) ajánlásának megfelelően 1 g levélszövetet vagy egy magot használtunk 3 ml 1. számú extrakciós oldathoz. A géleket 12 g szacharózzal és 60 g keményítővel készítettük 500 ml gélpufferoldathoz. Az alkalmazott pufferrendszerek Soltis et al. (1983) (A puffer) és Shaw & Prasad (1970) (B puffer) pufferét követték. Az A pufferrel 15 mA-en 30 percig, a B pufferrel pedig 1 órán át végeztünk előfutást. A kivonatfutásokat 35 mA-en végeztük, és kb. 5 órán át tartottak. Az elemzett allozimrendszereket és az elektród/gél pufferrendszerek összetételét az 1. táblázat tartalmazza.

A zimogramokat elemeztük, és az allozim lókuszokat az egyes enzimrendszerek jelölésére használt rövidítésekkel azonosítottuk (például PGI a foszfoglükóz-izomerázra), kisbetűkkel, dőlt betűvel, majd a lassabban vándorló lókusszal kezdve (például pgi-1), annak növekvő számsorrendje következett. A leggyorsabban vándorló allélt minden egyes lokuszon az a betűvel jelöltük, míg a lassabban vándorló allélok betűrendben következtek. Az allélfrekvenciákra vonatkozó statisztikai vizsgálatokat csak olyan lókuszok esetében végeztük el, amelyek egyszerű, könnyen azonosítható sávos mintázatot mutattak.

A mendeli öröklődés teszteléséhez és a zimogrammok helyes értelmezéséhez kontrollált keresztezési kísérletekre vagy haploid szöveteken (például pollen) végzett allozim vizsgálatokra van szükség (Hart & Langston 1977, Broun & Moran 1979, Alfenas & Brune 1998). Ezeket a vizsgálatokat a S. adstringens esetében nehéz elvégezni, mivel ez egy nem domesztikált, allogám és lassú növekedésű növény, és a legtöbb fürtje önbeporzás útján nem hozott termést (Rocha & Moraes 1997, Ortiz et al. 2003).

Brown & Moran (1979) megfigyelése szerint az izoenzimadatok félreértelmezésének elkerülésére a legjobb módszer, ha Mendel-analízissel ellenőrizzük, hogy az izoenzimvariánsok halmazai valóban allozimek-e, és hogy azokat egyetlen lókusz alléljai kódolják. Ezért az allozim öröklődési módok helyes azonosítása érdekében anélkül, hogy genetikai keresztezéseket vagy haploid szövetek vizsgálatát végeznénk, az allozimek generációk közötti genotípusos arányait elemeztük az ugyanabból a növényből származó levelek és magok allélfrekvenciáinak mérésével. A 63 fából származó levelekben megfigyelt allélfrekvenciákat felhasználva kiszámítottuk a Hardy-Weinberg-egyensúly (HWE) mellett várható genotípusfrekvenciákat az utódok azonos méretű mintájára (189 mag). Az egyes magok vagy magoncok az utódtömbök tagjaiként vizsgálhatók (Brown & Moran 1979). Az utódok várható allélfrekvenciáit ezután a chi-négyzet teszt (X2) segítségével hasonlítottuk össze a vizsgált utódok azonos méretű mintájával. Mivel ez a faj allogám és a hím szülők ismeretlenek, magukat a populáció egyedeit tekintettük a hím ivarsejtkészletet alkotó egyedeknek (Cruz 2005), ezért a hím allélfrekvenciákat a nőstényekével azonosnak tekintettük, HWE-t feltételezve.

Az effektív allélszám, a genetikai diverzitás (HE és HO) (Nei 1973) és a fixációs index (Wright 1951) genetikai paramétereit becsültük. A heterozigóta lokuszok egyedenkénti várható aránya (HE) egy összetett mérték, amely az allélszintű genetikai változatosságot foglalja össze. Ezt a paramétert, amelyet gyakran genetikai diverzitásnak neveznek, minden egyes lókuszra kiszámítottuk, és az összes lókuszra átlagoltuk (Berg & Hamrick 1997). A fixációs index (f) Li & Horvitz (1953) tesztjét végeztük el. Minden egyes lókuszt külön-külön vizsgáltunk, majd a χ2 értéket és a df-eket összesítettük az összes lókuszon, hogy egy átfogó tesztet kapjunk az átlagos multilókusz f-ről. A statisztikai elemzéseket a Genes genetikai és statisztikai szoftverrendszerrel végeztük. A levelekben és a magokban megfigyelt genotípusos elrendeződések valószínűségeinek kiszámításához Fisher egzakt és chi-négyzet (χ2 ) teszteket használtunk.

EREDMÉNYEK ÉS MEGJEGYZÉSEK

A malát-dehidrogenáz (MDH), foszfoglükóz-izomeráz (PGI), izocitrát-dehidrogenáz (IDH), glutamát-oxalacetát-transzamináz (GOT), peroxidáz (PER) és észteráz (EST) polimorf rendszereinek aktív régiói, valamint a lókuszok és allélok száma tekintetében különbségeket figyeltünk meg a levelek és a magok között; a PGI, IDH, EST és SKDH rendszerek viszont ugyanazon a lokuszon mutattak aktivitást. Az aktív régiókat, a lókuszok számát, az allélek számát, a polimorf rendszerekben megfigyelt kvaterner szerkezetet és az irodalomban rögzített kvaterner szerkezeteket a 2. táblázat tartalmazza. A statisztikai elemzésekben használt polimorf rendszerek (PGI, IDH, GOT és PER) variációjának diagramszerű ábrázolása az 1. ábrán látható.

A levelek (női szülők) géljeiben az MDH-aktivitás két régiója volt látható, míg a magok (utódok) géljeiben csak egy régió volt látható. A katodális régió aktivitása elsősorban a levelekben volt megfigyelhető, és úgy tűnt, hogy egyetlen lókusz (mdh-1) irányítja; monomer izoenzim mintázatot mutatott, ellentétben az általában megfigyelhető dimer vagy tetramer mintázattal (Brune et al. 2006). Az mdh-2 monomorf lókusz az anodális régióban csak a magokban volt kimutatható, az mdh-3 dimerikus lókusz pedig a levelekben és a magokban egybeesett, dimerikus mintázatot mutatott két alléllal, amelyek mindkét szervben egyértelműen és következetesen megfigyelhetőek voltak. Az MDH-t különböző forrásokból izolálták, többek között archaea, eubaktérium, gomba, növény és emlősökből, és úgy írták le, hogy két vagy négy alegységből áll (Musrati et al. 1998, Brune et al. 2006).

Két egybeeső aktív régiót figyeltek meg a PGI gélekben mind a levelekben, mind a magokban, amelyeket úgy tűnt, hogy egy-egy lókusz és két allél szabályoz. A pgi-1 lókusz dimer mintázatot mutatott heterozigóta egyedekre és két allélra jellemző hibrid sávokkal. Az anodális (pgi-2) lókusz a monomer enzimekre jellemző sávos mintázatot mutatott. Bár a PGI monomer mintázatát megfigyelték olyan mikroorganizmusokban, mint az Archaeoglobus fulgidus és a Methanosarcina mazei (Hansen et al. 2005), ez az enzim általában dimer (Cini et al. 1988, Tekamp-Olson et al. 1988, Sun et al. 1990, Brune et al. 2006). A levelek és magvak IDH-géljei egy három alléllal rendelkező lókusz (idh-1) által szabályozott aktivitási zónát mutattak ki. Az IDH enzimet jól tanulmányozták gombákban és állatokban, és általában dimer vagy oligomer (Brune et al. 2006); a dimer szerkezetet megerősítették növényekben, például a Cucumis sativusban (Watanabe et al. 2007) és a cseresznyefában (Granger et al. 1992). A GOT-gélek két aktív régiót mutattak ki a magokban és egy aktív régiót a levelekben. Az anódos régió két rögzített sávból álló mintázatot mutatott, amelyek mind a levelekben, mind a magokban (got-2 és got-3) nyilvánvalóak voltak. A magkivonatokból származó aktív katodális régió csak egyetlen lókuszt (got-1) mutatott két alléllal és dimer sávmintázattal. A GOT allozimekről ismert, hogy dimer mintázatúak a növényekben (Kephart 1990).

A levelek PER géljeiben három aktív régiót, a magok géljeiben pedig két aktív régiót figyeltünk meg. Bár az utódok (magok) sávozási mintázata megegyezett a fákéval (levelek), a levelek és a magok közötti összehasonlítás nem volt lehetséges a legtöbb utód egyed gyenge felbontása miatt. A levélkivonatok minden anodális és intermedier régiójában egy monomer mintázat volt megfigyelhető egy lókusszal (per-1 és per-2) és két alléllal, ami összhangban van Brune és munkatársai (2006) eredményeivel. A cseresznyefák dimer kvaterner szerkezetet mutattak (Granger et al. 1992), de monomereket figyeltek meg a Cucumis sativus, a Roystonea regia (Watanabe et al. 2007) és az Allium sativum (Marzouki et al. 2005) esetében.

Az EST-gélekben három aktív régió volt látható, és bár a lókuszok és allélek száma azonos volt a levelek és a magok esetében, a sávozási mintázat nem volt elég egyértelmű minden egyednél ahhoz, hogy statisztikai elemzéseket lehessen végezni. Monomer mintázat volt megfigyelhető egy-egy lókusszal és két alléllal az anodális és az intermedier régióban, míg a katodális régióban két rögzített lókuszt figyeltek meg. Az észteráz az egyik legpolymorfabb enzimrendszer a növényekben (Weeden & Wendel 1990) és a leginkább vizsgált rendszer rizsben (Endo & Morishma 1983), és ezen enzimek monomer vagy dimer változatai általában megtalálhatók a növényekben (Brune et al. 2006). Jelen vizsgálatban csak a got-1, idh-1, pgi1, mdh-2, per-1 és per-2 lokuszok sávozási mintázata volt egyértelműen és következetesen megfigyelhető a gélekben, és statisztikai célokra is fel lehetett használni. Az elemzett polimorf lókuszok mintaméretét és allélfrekvenciáit a 3. táblázat mutatja be.

A glükóz-dehidrogenáz (GDH), az alkohol-dehidrogenáz (ADH) és a glükóz-6-foszfát-dehidrogenáz (G6PDH) esetében kimutatható eloszlási mintázat nélküli akromatikus sávokat figyeltünk meg. Egy aktív régiót figyeltek meg a triplex sávok rögzített mintázatával az ADH utódgélekben; a sávok színintenzitása változott, és a lassabban vándorló sávok általában intenzívebb színűek voltak. A GDH utódgélekben egy aktív régiót figyeltünk meg, amely öt egymást követő sávból álló rögzített mintázattal rendelkezett, a harmadik és az ötödik sáv sokkal mélyebb színintenzitást mutatott. A leucinaminopeptidáz (LAP), a foszfoglükomutáz (PGM), a sikimát-dehidrogenáz (SKDH) és a savas foszfatáz (ACP) enzimrendszerek monomorfak voltak.

Meglepő módon a HWE arányokhoz való igazítás tesztjei, valamint a Fisher- és a χ2-tesztek nem voltak szignifikánsak a különböző szövettípusokban és a generációk között vizsgált allozimrendszerek mindegyikére (4., 5. táblázat). Meg kell azonban jegyezni, hogy a HWE-teszteknél (mint minden más statisztikai tesztnél) a nullhipotézis elutasításának képtelensége nem feltétlenül jelzi annak érvényességét. Lehetséges, hogy a genotípusfrekvenciák olyan populációkban, amelyekben nincsenek véletlenszerű párosodások, úgy oszlanak el, hogy multinomiális eloszlásokat utánoznak (Li 1988). Az is lehetséges, hogy a HWE elvárásoktól való eltérést okozó tényezők a genotípusfrekvenciákat ellentétes irányba vezetik, a megfigyelt és a várt genotípusok száma között nem szignifikáns végeredményt adva (Workman 1969, Cavalli-Sforza & Bodmer 1971).

A S. adstringens érett terméseit többféle rovar intenzíven támadja, és minden egyes hüvelyben kevés vagy egyáltalán nem marad mag (Branco et al. 2009), és nem ismert, hogy ebben a ragadozásban van-e szelektív környezeti tényező, vagy irányított. Mivel azonban a mintavételezett terméseket a végső érési stádiumban szedtük le, és az utódallél-gyakoriság becsléséhez használt magok nem voltak kitéve semmilyen feltételezett szelekciós nyomásnak, ez vezethetett nem szignifikáns eredményekhez. Feltételezhető, hogy ezek az eredmények eltérőek lennének, ha csak érett (természetes szelekciós nyomásnak kitett) magokat használtak volna. Egy másik szempont, amit figyelembe kell venni, hogy ebben a vizsgálatban a hímek és nőstények allélfrekvenciái között egyenlőséget feltételeztek. Így a generációk között megfigyelt HWE nem biztos, hogy valós, ha a hím és nőstény ivarsejtek közötti allélfrekvenciák valóban különböznek. Az alacsony effektív méretű populációkban az outcrossing a felesleges heterozigóták felhalmozódásának mechanizmusaként szolgálhat, a kis populációban a hímek és nőstények közötti allélfrekvenciák csak véletlenszerűen különböznek egymástól (Balloux 2004, Souza et al. 2004), olyan driftfolyamatok miatt, amelyek a különböző allélokat hordozó egyedek közötti gyakoribb kereszteződéseket eredményezik.

A mért polimorf lókuszok genetikai diverzitását (HE), a lókuszonkénti effektív allélszámot (AE), a megfigyelt heterozigozitást (HO) és a fixációs indexet (f) a 6. táblázat vázolja. Az idh-1 lókusz mutatta a legmagasabb HE-értékeket a levelekben (0,535) és a magokban (0,532). Ez az eredmény az idh-1-ben található allélok nagyobb száma miatt várható volt, mint a többi polimorf lókuszban. A legkisebb értékeket az mdh-2 (HE = 0,106) és a got-1 (HE = 0,125) esetében figyeltük meg a levelekben és a magokban. A teljes várható genetikai diverzitás az összes lókusz figyelembevételével 0,325 volt a levelekben és 0,244 a vetőmagokban. A populációban az egy lókuszra jutó allélek effektív száma (AE) 1,58 volt a levelekben és 1,42 a vetőmagokban. A S. adstringensben megfigyelt AE értékek magasabbak, a HE értékek pedig kisebbek voltak, mint a Hamrick et al. (1992) által összeállított, fásszárú növényfajokat értékelő allozim vizsgálatokban közölt átlagos értékek. A hosszú életű fásszárú fajoknál átlagosan magasabb az egy lókuszra jutó allélok effektív száma (AE = 1,24) és nagyobb a genetikai diverzitás (HE = 0,177), mint más élőlényeknél. A S. adstringensben mért f-értékek a leveleket (f = 0,070) és a magokat (f = 0,107) figyelembe véve minden lókusz esetében nem voltak szignifikánsak. Mindazonáltal a magok fixációs indexének nem szignifikancia valószínűsége (P = 0,0918) viszonylag kisebb volt, mint a leveleké (P = 0,8653). A levelek és a magvak esetében megfigyelt teljes fixációs index lényegesen kisebb volt, mint a mikroszatellita adatok alapján megfigyelt (f = 0,3529) (Branco et al. 2009). Ezek a különbségek a mikroszatellita markerek lókuszonkénti magasabb allélszámának voltak köszönhetőek, ami növelte a várható heterozigóta lókuszok számát, és következésképpen növelte az f genetikai paraméter pozitív értékeit.

A pgi-1, mdh-2 és idh-1 lókuszok esetében megfigyelt magasabb genetikai diverzitás és lókuszonkénti tényleges allélszám, a nem szignifikáns fixációs index, valamint a HWE arányok generációk közötti kiigazítása mind a S. adstringens ezen populációjának véletlenszerű párosodására utal. Az EST és PER allozimrendszerek a levélszövetben, míg az MDH, IDH, PGI és GOT rendszerek a magszövetben voltak egyértelműbben meghatározhatók.

Köszönet – A szerzők köszönetet mondanak a Fundação de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais (Fapemig) és a Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pénzügyi támogatásáért, valamint a doktori és tudományos ösztöndíjért; az Instituto Estadual de Florestas (IEF); és az Instituto de Ciências Agronômicas (ICA) az Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG).

Adams WT, Joly EJ. 1980. Az allozim variánsok genetikája loblolly fenyőben. Journal of Heredity 71:33-40.

Alfenas AC, Brune W. 1998. Eletroforese em gel de amido. In Eletroforese de isoenzimas e proteínas afins: fundamentos e aplicaçőes em plantas e microorganismos (AC Alfenas, ed.). Editora Universidade Federal de Viçosa – UFV, Viçosa, p.47-63.

Alfenas AC, Dusi A, Zerbini Júnior FM, Robinson IP, Micales JA, Oliveira JR, Dias LAS, Scortichini M, Pereira MCB, Bonde RB, Alonso SK, Junghans TG, Brune W. 2006. Eletroforese e marcadores bioquímicos em plantas e microorganismos. 2 ed., Editora Universidade Federal de Viçosa – UFV, Viçosa, p.85-148.

Almeida SP, Proença CEB, Sano SM, Ribeiro JF. 1998. Cerrado: hasznos növényfajok. Embrapa-CPAC, Planaltina.

Balloux F. 2004. Heterozigóta-túlsúly kis populációkban és heterozigóta-túlsúlyos effektív populációméret. Evolution 58:1891-1900.

Barros MAG. 1982. A szövetségi körzet gyógyászati flórája. Brasil Florestal 12:35-45.

Berg EE, Hamrick JL. 1997. A genetikai diverzitás kvantitatív meghatározása allozim lókuszokon. Canadian Journal of Forest Research 27:215-424.

Branco EA, Zimback L, Lima AB, Mori ES, Aoki H. 2009. A Stryphnodendron astringens (Mart.) populációinak genetikai szerkezete. 4º Seminário de Iniciação Científica do Instituto florestal, 2010. június 24. Szövetségi Intézet – IF Records Series 42-37.

Brown AHD, Moran GF. 1979. Az izoenzimek és az erdei fák genetikai erőforrásai. In Proceedings of the Symposium on Isozymes of North American Forest Trees and Forest Insects (MT Conkle, Technical Coord.). Pacific Southwest Forest and Range Experiment Station, Berkeley, 1-10. o.

Brune W, Alfenas AC, Junghan, TG. 2006. Enzimek specifikus azonosítása gélekben. In Elektroforézis és biokémiai markerek növényekben és mikroorganizmusokban (AC Alfenas, szerk.). Editora Universidade Federal de Viçosa – UFV, Viçosa, p.202-328.

Camillo J, Ciampi A, Vieira RF. 2001. A barbatimão (Stryphnodendron astringens) genetikai variabilitásának elemzése RAPD markerek segítségével. In Anais do Encontro do Talento Estudantil da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 6, Brasília, DF. Embrapa Genetic Resources and Biotechnology, Brasilia, 50. o.

Cavalli-Sforza LL, Bodmer WF. 1971. Az emberi populációk genetikája. W.H. Freeman and Company, San Francisco.

Cini JK, Cook PF, Gracy RW. 1988. A szarvasmarha glükóz-6-foszfát izomeráz allozimjainak molekuláris alapja. Archives of Biochemistry and Biophysics 263:96-106.

Cruz CD. 2005. Princípios de genética quantitativa. Editora Universidade Federal de Viçosa – UFV, Viçosa, p.252-254.

Cullis CA. 1977. Az örökletes változások környezeti indukciójának molekuláris aspektusai a lenben. Heredity 38:129-154.

Endo T, Morishma, H. 1983. Rizs. In Isozimek a növénygenetikában és -nemesítésben (SD Tanksley, TJ Ortton, szerk.). Elsevier, Amsterdam, B. rész, 129-146. o.

Granger AR, Clarke GR, Jacson JF. 1993. Cseresznye azonosítása levélallozim-polimorfizmus alapján. Theoretical and Applied Genetics 86:458-464.

Hamrick JL, Godt MJW, Sherman-Broyles S. 1992. A genetikai diverzitás szintjét befolyásoló tényezők a fásszárú növényfajokban. New Forest 6:95-124.

Hansen T, Schlichting B, Felgendreher M, Schonheit PJ. 2005. A cupin-típusú foszfoglükóz izomerázok (Cupin-PGI-k) egy új fémfüggő PGI családot alkotnak, amely a PGI evolúció konvergens vonalát képviseli. Journal of Bacteriology 187:1621-1631.

Har GE, Langston PJ. 1977. Az izoenzim szerkezeti gének kromoszómális elhelyezkedése és evolúciója hexaploid búzában. Heredity 39:263-277.

Hirschmann GS, Arias AR. 1990. A brazíliai Minas Gerais gyógynövényeinek felmérése. Journal of Ethnopharmacology 29:159-172.

Kelley WA, Adams RP. 1977. Az allozimek szezonális változása a Juniperius scopulorumban: szisztematikus jelentőség. American Journal of Botany 64:1092-1096.

Kephart SR. 1990. Növényi allozimek keményítő-gélelektroforézise a technikák összehasonlító elemzése. American Journal of Botany 77:693-712.

Law GRJ. 1967. Alkalikus foszfatáz és leucin aminopeptidáz társulás a csirke plazmájában. Science 156:1106-1107.

Li CC, Horvitz DG. 1953. A beltenyésztési együttható becslésének néhány módszere. American Journal of Human Genetics 5:107-117.

Li CC. 1988. Pszeudo-véletlen párosítású populációk. A Hardy-Weinberg-törvény 80. évfordulója alkalmából. Genetics 119:731-737.

Loveless MD. 1992. Izozimvariáció trópusi fákban: a genetikai szerveződés mintái. New Forests 6:67-94.

Marzouki SM, Limam F, Smaali MI, Ulber R, Marzouki MN. 2005. Egy új termostabil peroxidáz a fokhagymából Allium sativum: tisztítás, biokémiai tulajdonságok, immobilizáció és felhasználás H2O2 kimutatására tejben. Alkalmazott biokémia és biotechnológia 127:201-214.

Melo Júnior TA, Vasconcelos MF, Fernandes GW, Marini MA. 2001. Madárfajok elterjedése és megőrzése Serra do Cipóban, Minas Gerais, Brazília. Bird Conservation International 11:189-204.

Minas Gerais. Secretaria de Estado de Meio Ambiente e Desenvolvimento Sustentável. Instituto Estadual de Florestas. http://www.ief.mg.gov.br/component/content/196?task=view (hozzáférés 2011. febr. 12.).

Musrati RA, Kollárová M, Mernik N, Mikulásová D. 1998. Malát-dehidrogenáz: eloszlás, funkció és tulajdonságok. Általános élettan és biofizika 17:193-210.

Nei M. 1973. A géndiverzitás elemzése felosztott populációkban. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 70:3321-3323.

Ortiz PL, Arista M, Oliveira PE, Talavera S. 2003. A virág- és gyümölcstermés mintázata a Stryphnodendron astringens, egy közép-brazíliai andromonoid hüvelyes fa esetében. Növénybiológia 5:592-599.

Pio Corrêa M. 1926. Dicionário de plantas úteis do Brasil e das exóticas cultivadas. Imprensa Oficial, Rio de Janeiro, v.1.

Ramirez H, Calderon A, RoccaW. 1991. Técnicas moleculares para evaluar y mejorar el germoplasma vegetal. In Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones (W Rocca, L Mroginski, szerk.). Nemzetközi Trópusi Mezőgazdasági Központ – CIAT, Cali, p.825-856.

Rocha AMS, Moraes JAPV. 1997. A vízstressz hatása a Stryphnodendron astringens (Mart.) Coville fiatal cserepes növényeinek gázcseréjére. Brazilian Journal of Plant Physiology 9:41-46.

Saadi A. 1995. Az Espinhaço-hegység geomorfológiája Minas Geraisban és peremvidékén. Geonomos 3:41-63.

Shaw CR, Prasad R. 1970. Enzimek keményítő gélelektroforézise: receptek összeállítása. Biokémiai genetika 4:297-320.

Soltis DE, Haufler CH, Darrow DC, Gastony GJ. 1983. Páfrányok keményítő gélelektroforézise: őrlési pufferek, gél- és elektródpufferek, valamint festési ütemtervek összeállítása. American Fern Journal 73:9-27.

Sousa VA, Robinson IP, Hattemer HH. 2004. Variáció és populációszerkezet az Araucaria angustifolia (Bert.) O. Ktze enzim génlociban. Silvae Genetica 53:12-19.

Sun AQ, Yuksel K, Jacobson TM, Grac RW. 1990. Két különböző méretű alegységet tartalmazó humán glükóz-6-foszfát izomeráz izoformák izolálása és jellemzése. Archives of Biochemistry and Biophysics 283:120-129.

Tekamp-Olson P, Najarian R, Burke RL. 1988. A Saccharomyces cerevisiae foszfoglucoizomeráz génjének izolálása, jellemzése és nukleotidszekvenciája. Gene 73:153-161.

Watanabe L, Nascimento AS, Zamorano LS, Shnyrov VL, Polikarpov I. 2007. A királypálma (Roystonea regia) peroxidáz tisztítása, kristályosítása és előzetes röntgendiffrakciós elemzése. Acta Crystallographica, Section F, Structural Biology and Crystallization Communications 63:780-783.

Weeden NF, Wendel JF. 1990. A növényi allozimek genetikája. In Allozimek a növénybiológiában (DE Soltis, PS Soltis, szerk.). Chapman and Hall, London, p.46-72.

Workman PL. 1969. Az egyszerű genetikai polimorfizmus elemzése. Human Biology 41:97-114.

Wright S. 1951. A populációk általános szerkezete. Annals of Eugenics 15:323-354.