BiomedicalReports

Bevezetés

A hepatocelluláris karcinóma (HCC) a májsejtek elsődleges rosszindulatú daganata, amely az összes primer májrák 80%-át teszi ki. Világszerte a HCC a negyedik vezető oka a rák okozta haláleseteknek (1).A hepatitis B-vírus vagy hepatitis C-vírus fertőzéssel járó krónikus májbetegségben szenvedő betegeknél gyakran alakul ki HCC(2). A sebészeti technikák fejlődtek, és számos nem sebészeti kezelési módot fejlesztettek ki; a HCC-s betegek rendkívül rossz prognózisának javítása azonban továbbra is korlátozott (3).

Az apoptózis, más néven a programozott sejthalál kiterjedt vizsgálata az elmúlt évtizedekben kiemelte ezt a folyamatot, mint a rákterápia megfelelő módszerét (4,5). Azonban számos apoptotikus hatású gyógyszer jelenleg korlátozottan alkalmazható a rákterápiában a mellékhatások miatt. Ezért fontos az olyan új és megbízható terápiás szerek azonosítása, amelyek hatékonyan képesek a rákos sejtek apoptózisát kiváltani a HCC-s betegek kezelésében.

A hagyományos kínai orvoslásnak újabban fontos szerepe van a rosszindulatú daganatok kezelésében, mivel jelentősen javítja a hatásokat és csökkenti a mellékhatásokat (6). A gekkó, az egyik népszerű hagyományos kínai gyógyszer, amelyet a klinikai gyakorlatban nyers gyógyszerként alkalmaztak rosszindulatú daganatok kezelésére (7-9). A gekkó nyerspeptidek és a gekkó etanolos kivonata képes apoptózist indukálni a humán HCC sejtekben, és tumorellenes hatást fejt ki H22 ascites H22-t hordozó egerekben, amit korábbi vizsgálataink is bizonyítottak (10,11). A jelen tanulmány célja az volt, hogy megvizsgáljuk a gekkó peptidek keverékének (GPM) apoptotikus hatását és a mögöttes mechanizmust humán májkarcinóma HepG2 sejtvonalakban in vitro.

Anyagok és módszerek

Kórházi anyagok és reagensek

A gekkó japonicus-t a BozhouYonggang Medicinal Herbs Factory Co., Ltd.-től vásároltuk. (Anhui, Kína). A HepG2 humán HCC sejtvonalat a Medical Science Research Institute of Henan (Henan, Kína) mutatta be.

Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide (MTT) és Hoechst 33258 a Sigmától (St. Louis, MΟ, USA).A Caspase Activity Assay Kit-et a Beyotime Institute of Biotechnology-tól (Peking, Kína) vásároltuk. Az apoptózist indukáló faktor (AIF) elleni primer antitestet a BosterInc-től vásároltuk. (Wuhan, Hubei, Kína), a β-aktin antitestet pedig a Proteintech-től (Wuhan, Hubei, Kína) vásároltuk. A citokróm c (Cyt c) elleni elsődleges antitestet és az egér vagy nyúl ellen konjugált másodlagos antitestet a Zhongshan GoldenBridge Biotechnology Co., Ltd.-től vásároltuk. (Peking, Kína).

A mikrolemez olvasó a BioTekInstruments, Inc. terméke volt. (Winooski, VT, USA) terméke volt. A BX41 fluoreszcens és inverz mikroszkópok az Olympus (Tokió, Japán) termékei voltak.

GPM előállítása

A gekkóporokat (100 g) 400 m kétszer desztillált vízzel kevertük össze és homogenizáltuk. Az 5 600 × g-n 5 percig tartó centrifugálást követően a csapadékot összegyűjtöttük és 400 ml 55%-os etanolos oldatban áztattuk. A felülúszót 5 600 × g-n 5 percig tartó centrifugálást követően nyertük, és csökkentett nyomáson, 55 °C-on bepároltuk, majd a visszamaradt folyadék fagyasztva szárítását követően sárga porokat gyűjtöttünk. A sárga porok tisztítására gélszűréses kromatográfiát (SephadexG-25) alkalmaztunk, és végül a GPM-et gyűjtöttük.

Cellakultúra és morfológiai megfigyelés

A HepG2 sejteket 10% magzati szarvasmarha szérummal, 100 U/mlpenicillinnel és streptomicinnel kiegészített Dulbecco’s modifiedEagle’s mediumban tenyésztettük 37°C-on, párásított 5%CO2 inkubátorban. A táptalajt 2 naponta cseréltük, és a logaritmikus növekedési fázisban lévő sejteket használtuk fel a következő kísérletekhez. A HepG2 sejteket (3,0×104 sejt/ml) különböző koncentrációjú GPM-mel inkubáltuk 24 órán keresztül. A sejteket megfigyeltük, és a morfológiai változások kimutatására inverz fáziskontrasztmikroszkóppal készítettünk képeket.

MTT vizsgálat

A HepG2 sejteket 96 lyukú lemezbe vetettük 6,0×103 sejt/lyuk sűrűséggel. Minden lyukba különböző koncentrációjú GPM-et és 0,003 mg/ml fluorouracilt (5-Fu) adtunk. 20, 44 és 68 órás inkubáció után 20 µl MTT-reagens (5 mg/l) adtunk lyukanként, és további 4 órán át inkubáltuk. A felülúszót 200 µl dimetil-szulfoxidra cseréltük, és a 490 nm-en mért abszorbanciát (A) ELX800 UniversalMicroplate readerrel mértük. A sejtproliferáció gátlási aránya (IR) a következő volt: Az egy éjszakán át tartó, 6 lyukú lemezen történő tenyésztést követően a HepG2 sejteket különböző koncentrációjú GPM-mel kezeltük (0,0,06 vagy 0,06 vagy 0,0 GPM-koncentrációval).08 mg/ml) és 0,003 mg/ml 5-Fu friss táptalajban37°C-on 24 órán keresztül. A sejteket kétszer mostuk foszfát-pufferedszalinnal (PBS) és Hoechst 33258 festőoldattal (10µg/ml) festettük. 15 perc sötétben történő inkubáció után a sejteket kétszer mostuk hideg PBS-szel, majd fluoreszcens mikroszkóppal vizsgáltuk.

Kaszpáz aktivitás analízis

A kaszpáz-3 és kaszpáz-9 aktivitás meghatározását a Caspase Activity Assay kit segítségével végeztük, a gyártó protokollját követve. A GPM különböző koncentrációinak (0, 0,06 vagy 0,08 mg/ml) és 0,003 mg/ml 5-Fu-nak 24 órán keresztül történő expozíció után a sejteket leszedtük és lízispufferben reszuszpendáltuk. Ezt követően a sejteket 20 percig lízispufferben inkubáltuk, majd 4°C-on 16 000 × g-nél 3 percig centrifugáltuk. A felülúszót összegyűjtöttük, és a fehérjeszintet a Bradford-módszerrel határoztuk meg, a kaszpáz-3 és kaszpáz-9 aktivitást pedig (ditiotreitolt tartalmazó) reakciópufferrel és Ac-DEVD-pNA, illetve Ac-LEHD-pNA kaszpáz-szubsztrátpeptidekkel mértük. A kapott értékeket a 405 nm-en mért optikai sűrűségben kifejeztük:AGPM/AControl.

Western blot analízis

A HepG2 sejteket 24 órán keresztül GPM-mel (0, 0,06 vagy 0,08 mg/ml), illetve 0,003 mg/ml 5-Fu-val kezeltük. Röviden, a sejteket 30 percig jégen lízispufferrel kezeltük, majd 13 000 × g-n 30 percig 4°C-on centrifugáltuk. A fehérjekoncentrációt Bradford-módszerrel határoztuk meg. A fehérjéket 12%-os SDS-PAGE segítségével választottuk szét, és PVDF-membránra vittük át.A PVDF-membránt 5% zsírmentes száraz tejjel blokkoltuk PBS-ben 1 órán keresztül 37°C-on, majd háromszor mostuk 0,1% TBST-t tartalmazó Tris-pufferelt sóoldattal 15 percig, majd a primer antitestekkel inkubáltuk: kaszpáz-3 (kat. sz. sc-7148; 1:200, poliklonális nyúl anti-humán), kaszpáz-9 (kat. sz. sc-8355; 1:200, poliklonális nyúl anti-humán), Cyt c (kat. sz. sc-13156; 1:500, monoklonális egér anti-human), AIF (kat. sz. PB0388; 1:200, poliklonális nyúl anti-human) és β-aktin (kat. sz. 66009-1-Ig; 1:5 000, monoklonális egér anti-human) egy éjszakán át 4°C-on.Ezt követően a mintákat 30 percig TBST-vel mostuk, majd a membránt a megfelelő másodlagos antitestekkel inkubáltuk 1 órán keresztül. A kemilumineszcenciát ECL Plus (Beyotime Institute of Biotechnology) segítségével detektáltuk.

Statisztikai elemzés

A kísérleti adatokat átlag ± standard eltérésként ábrázoltuk. A csoportok közötti különbségeket egyirányú varianciaanalízissel vizsgáltuk az SPSS 19.0 rendszer (IBM Corp., Armonk, NY, USA) segítségével. A P<0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikáns különbségnek.

Eredmények

A GPM gátolja a HepG2 sejtek proliferációját

A GPM hatását a HepG2 sejtek növekedésére MTT-teszttel vizsgáltuk. Az eredmények azt mutatták, hogy a GPM jelentősen gátolta a HepG2 sejtek proliferációját dózis- és időfüggő módon (1. ábra). A 24, 48 vagy 72 órás GPM-kezelés után azIC50 értékek 0,154, 0,133 és 0,051 mg/ml voltak.A GPM-mel kezelt sejtek kerekded morfológiát, zsugorodást és kötődésvesztést mutattak (2. ábra).

A GPM hatása a sejtmagmorfológiára

A sejtek apoptotikus morfológiáját Hoechst 33258 festéssel azonosítottuk. Amint az a 3. ábrán látható, az apoptotikus jellemzők morfológiai változásait, mint például a nukleáris kondenzációt, a kromoszóma kondenzációt és a szemcsés apoptotikus testeket a GPM-kezelt sejtekben fluoreszcens mikroszkópiával is megfigyelték.

A GPM hatása a kaszpázaktivitásra

A sejtpusztulás kezdeményezőiként és végrehajtóiként a cisztein-proteázok fontos szerepet játszanak az apoptotikus folyamatban(12). Amint a 4. ábrán látható, a GPM-kezelés a kaszpáz-3 és kaszpáz-9 aktivitás jelentős dózisfüggő növekedését okozta,ami a GPM apoptotikus hatására utal a HepG2 sejtekben.

A GPM hatása az apoptotikus fehérjék expressziós szintjére

Amint az az ábrán látható. 5. ábrán látható, a western blotting kimutatta, hogy a Cyt c és azAIF felszabadulása a mitokondriumból a citoszolba megnövekedett, míg a kaszpáz-3 és a kaszpáz-9 expressziós szintjét a GPM kezelés dózisfüggő módon szabályozta fel. A fehérjék változásai szignifikánsan különböztek a kontrollcsoporttal összehasonlítva (6. ábra) (P<0,05).

Diszkusszió

Az elmúlt évtizedekben a rák előfordulása jelentősen megnőtt, ami súlyos károkat okoz az emberi egészségnek(13). Bár a kortárs terápiás stratégiák nyilvánvaló rákellenes képességet mutattak, a súlyos mellékhatások továbbra is elkerülhetetlenek. A hatékonyabb, de kevésbé toxikus új daganatellenes szerek keresése egyre nagyobb figyelmet kapott (14).A természetes gyógyszerekből származó peptidek kivonása a rákterápiában világszerte széles körben jelent meg, és ígéretes a rákkezelésben. A peptidek különböző módon játszhatnak szerepet, például gátolhatják a tumorok proliferációját, megállíthatják a sejtciklust, elnyomhatják a tumor angiogenezisét és apoptózist indukálhatnak (15). A gekkót évszázadok óta széles körben használják a hagyományos kínai orvoslásban. Korábbi vizsgálatainkban a gecko nyers peptidek hatékony tumorellenes hatást mutattak H22-t hordozó egereken és a HepG2 sejtvonalon (16,17), azonban a GPM humán hepatocitákra gyakorolt hatásait még nem sikerült tisztázni. Ezért a jelen vizsgálat célja az volt, hogy továbbfejtse a mögöttes molekuláris mechanizmust, amellyel a GPM apoptózist indukál a HepG2 humán HCC sejtvonalban.

A jelen vizsgálatban az MTT-teszt kimutatta, hogy a GPM dózis- és időfüggő módon képes gátolni a HepG2 sejtek növekedését. További kísérletek kimutatták, hogy ez a gátlás a GPM kezelésnek köszönhető, amely dózisfüggő sejthalált idézett elő tipikus morfológiai változásokkal. Ezek az adatok azt sugallják, hogy a GPM potenciálisan hatékony szer lehet a rák kezelésére.Hoechst 33258 festéssel kimutatták, hogy a GPM által kiváltott sejtpusztulás a HepG2 sejtekben, amely az apoptózishoz tartozik, a kaszpáz-3 és a kaszpáz-9 expressziós szintje a GPM kezelést követően megnövekedett. A Western blotting elemzés azt is kimutatta, hogy a GPM serkentheti a Cyt c és az AIF felszabadulását a citokondriumokból a citoszolba, ami arra utal, hogy a GPM által indukált apoptózist a HepG2 sejtekben a mitokondriális apoptotikus útvonal közvetíti.

Az apoptózis a fő ellenőrzési mechanizmus, amellyel a sejtek számos körülmények között, például aDNS-károsodás helytelen javítása esetén elhalnak (18). Ez az önpusztító sejtfolyamat kritikus fontosságú a szervfejlődés, a szöveti átalakulás, az immunrendszer szabályozása és számos betegség esetében (19). Számos daganatellenes szer terápiás hatását az apoptózis indukálásával fejti ki (20-24). A mitokondriumok alapvető szerepet játszanak a sejt apoptózis szabályozásában, és vannak bizonyos fehérjék, amelyek szorosan kapcsolódnak a sejt apoptózishoz az intermembránban (25).

A mitokondriumok ultrastruktúrája normális a sejt apoptózis során, de a funkciója jelentősen megváltozott.A mitokondriumok diszfunkciója a mitokondriális permeabilitási átmeneti pórusok megnyitását indukálja, és mitokondriális apoptogén fehérjéket, például AIF-et (26) és Cyt c-t (27) szabadít fel. Normális esetben az AIF és a Cyt c fehérjék a mitokondriumok intermembrán terében helyezkednek el, míg a különböző AIF-ek hatására a mitokondriumokból a citoplazmába szabadulnak fel. Az AIF végül a sejtmagba kerül, az apoptózis jellegzetes elváltozásait okozva. Az AIF volt az első felfedezett fehérje, amely a kaszpáz-független sejtpusztulást közvetítette (28). A cyt c felszabadul a citoszolba, és kaszpáz-függő apoptózist indukál, ami a kaszpázok aktiválódásához és az apoptózishoz vezet (29,30). Bár az AIF által indukált apoptózis nem függ a kaszpázoktól, az AIF, a kaszpáz és a Cyt c között kereszthatás, szinergia, sőt antagonizmus is van. A különböző haláljelek és sejttípusok miatt a sejtek apoptózisának szabályozása valójában különböző kölcsönhatásokon és a teljes jelhálózaton keresztül valósul meg, ami további tanulmányozást igényel.

A kaszpáz, a cisztein-proteázok családja, az apoptotikus útvonal integrális része. Az apoptózis indukciója a kaszpáz aktiválásához kapcsolódik (31). A kaszpáz-3 a sejtapoptózis downstream szakaszában, a kaszpáz-9 pedig az apikális kaszpáz a titokondrium által kezdeményezett apoptózisútvonalban (32). A kaszpáz-3 aktiválása korrelál a kaszpáz-9 aktiválásával (33).A Cyt c felszabadulása az apoptoszóma kialakulásával kiváltja a kaszpáz-9 aktiválását. Az iniciátor kaszpáz-9 ezt követő aktiválása az effektor kaszpáz-3 hasítását okozza, amely ezt követően aktiválja a DNázt és DNS-fragmentációt okoz a sejtmagban (34). Összefoglalva, a kaszpáz-3 egy végrehajtó kaszpáz, amely a következő mitokondriális útvonalon aktiválódhat, amely magában foglalja a kaszpáz-9 aktiválódását a Cyt c citoszolba történő felszabadulása miatt (35), végül programozott sejthalált okozva.

Összefoglalva, a GPM valószínűleg a mitokondriális apoptotikus útvonal aktiválásával apoptotikus sejthalált indukált a HepG2 sejtekben. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a GPM potenciális terápiás szer lehet a HCC kezelésében.

Köszönet

A jelen tanulmányt a HenanProvincia Tudományos és Technológiai Fejlesztési Kulcsprogramjainak támogatása támogatta (no. 142102310031).

Glosszárium

Rövidítések

Rövidítések:

GPM	gecko peptidek keveréke
Cyt. c	cytochrome c

	Abrams P és Marsh JW: Current approach tohepatocellular carcinoma. Surg Clin North Am. 90:803-816. 2010.Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	But DY, Lai CL és Yuen MF: Naturalhistory of hepatitis-related hepatocellular carcinoma. World JGastroenterol. 14:1652-1656. 2008. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Faivre S, Bouattour M és Raymond E: Új molekuláris terápiák a hepatocelluláris karcinómában. Liver Int. 31(Suppl 1): 151-160. 2011. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kang TH, Bang JY, Kim MH, Kang IC, Kim HMés Jeong HJ: Atractylenolide III, a sesquiterpenoid, inducesapoptosis in human lung carcinoma A549 cells viamitochondria-mediated death pathway. Food Chem Toxicol. 49:514-519.2011. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Liao N, Ao M, Zhang P and Yu L: Extractsof Lycoris aurea induce apoptosis in murine sarcoma S180 cells.Molecules. 17:3723-3735. 2012. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wang YX, Gu XX, Geng D, Sun HY, Wang CM,Jiang GX, Hou XN and Ma CH: Differentiation of bel-7402 humanhepatocarcinoma cells induced by aqueous extract of fresh gecko(AG) and its anti-tumor activity in vivo. J Ethnopharmacol.155:1583–1588. 2014. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Song P: Wang XM és Xie S: Kísérleti tanulmány a H22 hepatokarcinóma angiogenezisét gátló friss gekko chinenisin liofilizált porának mechanizmusairól. Zhongguo Zhong XiYi Jie He Za Zhi. 26:58-62. 2006.(Kínaiul). PubMed/NCBI
	Yang JX és Wang XM: Progress study andresearch on treating tumor of Gecko. Chinese Journal of Digestion.14:2428-2431. 2006.
	Wu BD: 105 nyelőcsőtumoros eset kezelése a Gecko összetett receptjével. Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Za Zhi.19:5021999.(In Chinese).
	Song Y, Wang JG, Li RF, Li Y, Cui ZC, DuanLX és Lu F: Gecko nyers peptidek in vitro apoptózist indukálnak emberi májcarcinoma sejtekben és tumorellenes hatást fejtenek ki egérascites H22 xenograft modellben. J Biomed Biotechnol. 2012:7435732012.Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Cui CC: Research of antitumor effect ofGecko etanol extract II. Henan University of Science andTechnology. 2013.(In Chinese).
	Jiang CP, Ding H, Shi DH, Wang YR, Li EGand Wu JH: Pro-apoptotic effects of tectorigenin on humanhepatocellular carcinoma HepG2 cells. World J Gastroenterol.18:1753-1764. 2012. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Olefson S and Moss SF: Obesity and relatedrisk factors in gastric cardia adenocarcinoma. Gastric Cancer.18:23-32. 2015. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Wang N, Tan HY, Li L, Yuen MF és Feng Y: Berberine and Coptidis Rhizoma as potential anticanceragents: A legújabb frissítések és jövőbeli perspektívák. J Ethnopharmacol.176:35-48. 2015. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Costantino VV, Lobos-Gonzalez L, Ibañez J,Fernandez D, Cuello-Carrión FD, Valenzuela MA, Barbieri MA, SeminoSN, Jahn GA, Quest AF és Lopez LA: Dehidroleucodine inhibits tumorgrowth in a preclinical melanoma model by induducing cell cycleclearrest, senescence and apoptosis. Cancer Lett. 372:10-23. 2016.Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Xu XL, Wang JG, Li RF, Li SP, Qiu XJ andDuan LX: Gecko peptidek keverékének gátló hatása az EC109 emberi nyelőcső laphámrák sejtvonal EC109 sejtjeinek növekedésére. ZhongguoLin Chuang Yao Li Li Xue Za Zhi. 29:602-604. 2013.
	Song Y, Wang JG, Cui CC, Qian X, Li RF,Duan LX, Liu L és Xi SM: Apoptotic mechanism of gecko crudepeptides on human liver carcinoma cell line HepG2. Zhong Yao Cai.35:863-866. 2012.(Kínaiul). PubMed/NCBI
	Lowe SW és Lin AW: Apoptosis in cancer.Carcinogenesis. 21:485-495. 2000. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Bhatia D, Mandal A, Nevo E és Bishayee A:Apoptosis-inducing effects of extcts from desert plants in HepG2human hepatocarcinoma cells. Asian Pac J Trop Biomed. 5:87-92.2015. Cikk megtekintése : Google Scholar
	Li CJ, Huang SY, Wu MY, Chen YC, Tsang SF,Chyuan JH és Hsu HY: Induction of apoptosis by ethanolic extractof Corchorus olitorius leafof human hepatocellularcarcinoma (HepG2) cells via a mitochondria-dependent pathway.Molecules. 17:9348-9360. 2012. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Yang B, Wang YQ, Cheng RB, Chen JL, ChenJ, Jia LT és Zhang RS: A citotoxicitás és az apoptózis indukciója az SGC-7901 humán gyomorráksejtekben a Patrinia heterophylla bunge-ból származó izovaltrát acetoxyhydrinisolátummal egy mitokondriális útvonalat és a G2/M fázisú sejtciklus-megállást foglal magában. Asian Pac J Cancer Prev.14:6481-6486. 2013. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kim TM, Shin SK, Kim TW, Youm SY, Kim DJés Ahn B: Elm tree bark extract inhibits HepG2 hepatic cancer cellgrowth via pro-apoptotic activity. J Vet Sci. 13:7-13. 2012.Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Nho KJ, Chun JM és Kim HK: EthanolExtract of Dianthus chinensis L. induces apoptosis in humanhepatocellular carcinoma HepG2 cells in vitro. Evid BasedComplement Alternat Med. 2012:5735272012. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Li L, Chen GG, Lu YN, Liu Y, Wu KF, GongXL, Gou ZP, Li MY és Liang NC:Ent-11α-Hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid inhibits growth ofhuman lung cancer A549 cells by arresting cell cycle and triggeringapoptosis. Chin J Cancer Res. 24:109-115. 2012. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Cao MR, Li Q, Liu ZL, Liu HH, Wang W, LiaoXL, Pan YL és Jiang JW: Harmine induces apoptosis in HepG2 cellsvia mitochondrial signaling pathway. Hepatobiliáris Pancreat DisInt. 10:599-604. 2011. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Susin SA, Lorenzo HK, Zamzami N, Marzo I,Snow BE, Brothers GM, Mangion J, Jacotot E, Costantini P, LoefflerM, et al: Molecular characterization of mitochondrialapoptosis-inducing factor. Nature. 397:441-446. 1999. Cikk megtekintése : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Liu X, Kim CN, Yang J, Jemmerson R andWang X: Induction of apoptotic program in cell-free extracts:Requirement for dATP and cytochrome c. Cell. 86:147-157. 1996.View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Norberg E, Orrenius S és Zhivotovsky B:Mitochondrial regulation of cell death: Az apoptózist kiváltó faktor (AIF) feldolgozása. Biochem Biophys Res Commun.396:95-100. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Chandra D, Liu JW és Tang DG: Earlymitochondrial activation and cytochrome c up-regulation duringapoptosis. J Biol Chem. 277:50842-50854. 2002. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Zhang P, Xu Y, Li L, Jiang Q, Wang M andJin L: In vitro protective effects of pyrroloquinoline quinone onmethylmercury-induced neurotoxicity. Environ Toxicol Pharmacol.27:103-110. 2009. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Li LK, Rola AS, Kaid FA, Ali AM és AlabsiAM: Goniothalamin sejtciklus-megállást és apoptózist indukál H400humán szájüregi laphámsejtes karcinómában: kaszpáz-függőmitokondriális közvetítésű útvonal az NF-κβ downregulációjával. ArchOral Biol. 64:28-38. 2016. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Li Y, Hu J, Huang H és He Y: Effect ofJinlong capsule on proliferation and apoptosis of human pancreaticcancer cells BxPC-3. J Tradit Chin Med. 33:205-210. 2013.View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Du RH, Cui JT, Wang T, Zhang AH és TanRX: Trichothecin induces apoptosis of HepG2 cells via caspase-9 mediated activation of the mitochondrial death pathway. Toxicon.59:143-150. 2012. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Kang MH és Reynolds CP: Bcl-2 Inhibitors:targeting mitochondrial apoptotic pathways in cancer therapy. ClinCancer Res. 15:1126-1132. 2009. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI
	Jin Q, Nan JX és Lian LH: Potentilla discolor leveleinek tumorellenes hatása a HepG-2 humán hepatocelluláris karcinóma sejtvonalra. Chin J Nat Med. 9:61-64. 2011.