Aggregazione di amfolina su eparina e altri polisaccaridi acidi nella focalizzazione isoelettrica

Il meccanismo di complessazione di pI range 3.5–5 Ampholine a eparina nella focalizzazione isoelettrica è stato esplorato dalla tecnica di legame del colorante a diversi valori di pH in soluzione. Non c’è un’interazione significativa tra eparina e amfolina a pH 6.7. Un legame debole, o selettivo, si verifica a pH 5.1, e un’interazione molto forte a pH 3.5. In quest’ultimo sistema, i componenti dell’Anfolina sembrano comportarsi come policazioni a causa della loro sequenza ordinata di cariche positive, ciascuna con due gruppi metilenici a parte, che favorisce un forte legame ai polianioni. Inoltre, sembrano esserci stechiometrie variabili per il forte legame tra eparina e Anfolina, a seconda delle loro quantità relative. Si propone che ad un basso rapporto tra eparina e Anfolina (eccesso di Anfolina), l’aggregazione è perpendicolare alla catena eparinica, con la carica di ammonio finale di ogni molecola di Anfolina che neutralizza una carica negativa lungo la molecola di eparina; a rapporti più alti (eccesso di eparina), il segmento di Anfolina legato è allineato parallelamente alla molecola di eparina, così che in media un componente di Anfolina neutralizza circa tre cariche negative. Il banding dell’eparina nella focalizzazione isoelettrica nell’intervallo di pH 3.0–4.5 può essere spiegato dall’aggregazione dei vari componenti sull’eparina in quantità dipendenti dalla carica netta sulle specie di Anfolina al dato pH, e dalle stechiometrie variabili in funzione della variazione del rapporto tra eparina e Anfolina lungo il gradiente di pH. Il legame dell’amfolina al poligalatturonato è stato dimostrato anche in eccesso di amfolina in un intervallo di pH dipendente dal grado di protonazione dei gruppi carbossilici di questo polisaccaride acido così come dalla carica positiva netta dell’amfolina. L’aggregazione vista a pH 4.2–4.5 ha portato alla previsione e alla successiva dimostrazione che il poligalatturonato avrebbe anche esibito un legame al momento della focalizzazione isoelettrica. Questo supporta l’ipotesi che l’aggregazione dell’amfolina su polianioni con sufficiente densità di carica sia un fenomeno generale che può portare alla formazione di bande spurie di alcuni polimeri a intervalli di pH appropriati nella focalizzazione isoelettrica. Sulla base del loro comportamento nella focalizzazione isoelettrica a pH 3.0–4.5, la forza di aggregazione dei polianioni studiati sembra essere eparina A = eparina B più grande del poliglutammato più grande dell’eparina B ridotta al carbossile più grande dell’acido poligalatturonico.