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Il servizio di analisi degli aminoacidi di AltaBioscience offre due tipi principali di analisi, “totale” e “libera”, per una vasta gamma di campioni.

Tipi di analisi: per aminoacidi legati nelle proteine o aminoacidi esistenti come entità libere.

L’analisi totale degli aminoacidi determina gli aminoacidi che sono legati nelle proteine così come quegli aminoacidi che possono essere presenti come singole unità non legate.

L’analisi degli aminoacidi liberi determina la quantità di ogni singolo aminoacido non legato, cioè non legato in una proteina.

Alcune applicazioni possono richiedere entrambe le analisi per determinare la differenza di aminoacidi legati e non legati.

Analisi totale degli aminoacidi

Dove la composizione in aminoacidi di una proteina o peptide è di interesse, o se è richiesta la concentrazione totale di proteine di un campione, allora questo è il metodo di scelta. Le proteine e/o i peptidi all’interno del campione vengono scomposti dall’idrolisi acida nei loro singoli amminoacidi, l’estratto è quindi una somma di amminoacidi che erano liberi in soluzione e quelli che erano precedentemente incorporati nelle proteine prima dell’idrolisi. Gli aminoacidi all’interno dell’idrolizzato vengono separati utilizzando un sistema tampone di citrato di sodio prima della rilevazione.

Questo metodo misura 18 dei 20 aminoacidi standard.

Figura 1. Esempio di cromatogramma di un aminoacido standard separato sul sistema dell’idrolizzato proteico (sodio)

Il triptofano e la cistina vengono solitamente persi durante l’idrolisi acida, tuttavia, possono essere fornite stime per questi aminoacidi quando la sequenza è nota. Per la quantificazione specifica del triptofano o della cistina, sono disponibili metodi di analisi supplementari separati.

Analisi degli aminoacidi liberi

Per l’analisi di campioni come i fluidi fisiologici, compresi il siero o i mezzi di crescita cellulare, gli aminoacidi incorporati nelle proteine o nei peptidi non sono di interesse, ed è la concentrazione dei singoli aminoacidi non legati che è richiesta.Pertanto le proteine e i composti interferenti vengono rimossi, lasciando gli aminoacidi liberi in soluzione. Gli aminoacidi liberi vengono poi separati utilizzando un sistema tampone litio-citrato prima della rilevazione. Questo metodo ad alta risoluzione quantifica fino a 40 componenti, compresi molti aminoacidi non standard.

Figura 2. Esempio di cromatogramma di un aminoacido standard separato sul sistema fisiologico (litio)

Per maggiori informazioni sul servizio di analisi degli aminoacidi che forniamo, contattateci.

E: [email protected] T: +44 (0)1527 584495

Autore: Sarah Hawker, Analista Senior