Confronto dell’effetto antifungino di Aloevera gel e Triphala: Uno studio in vitro Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A

ORIGINAL ARTICLE

Anno : 2017 | Volume : 29 | Issue : 2 | Page : 90-94

Confronto dell’effetto antifungino di Aloevera gel e Triphala: An in vitro study
Supreet Jain1, Sheetal Mujoo2, Minal Daga3, Salona Kalra4, Ravleen Nagi1, Afshan Laheji5
1 Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
2 Department of Oral Medicine and Radiology, College of Dentistry, Jazan University, Arabia Saudita
3 Dipartimento di Odontoiatria Conservativa ed Endodonzia, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
4 Dipartimento di Medicina Orale e Radiologia, Triveni Institute of Dental Sciences Hospital and Research Centre, Bilaspur, Chhattisgarh, India
5 Dipartimento di Patologia Orale e Maxillofacciale, Daswani Dental College, Kota, Rajasthan, India

Indirizzo di corrispondenza:
Supreet Jain
Dipartimento di Medicina Orale e Radiologia, New Horizon Dental College and Research Institute, Sakri, Bilaspur, Chhattisgarh
India

Fonte di sostegno: Nessuno, Conflitto di interessi: Nessuno

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DOI: 10.4103/jiaomr.JIAOMR_167_16

Abstract

Scopo: Lo scopo del presente studio era di determinare e confrontare le attività antifungine e inibitorie di varie concentrazioni di Aloevera gel e Triphala contro Candiada albicans orale. Materiali e metodi: I funghi (C. albicans) sono stati isolati da 10 pazienti con candidosi pseudomembranosa e pazienti con stomatite da dentiera e trasferiti in brodo di Sabouraud, che è stato poi incubato in Sabouraud’s dextrose agar (SDA). L’attività antimicotica del gel di Aloevera e della Triphala è stata testata con il metodo della diffusione dei dischi e la concentrazione minima inibitoria è stata determinata con il metodo della microdiluizione in brodo. Risultati: Il valore medio della zona di inibizione per l’Aloevera era 3,35 ± 0,59 mm e 1,06 ± 0,41 mm al 100% e al 50%, rispettivamente. Per Triphala, era 4,19 ± 0,57 mm e 1,79 ± 0,43 mm al 100% e al 50%, rispettivamente (P value < 0,001). La zona di inibizione del 100% di Triphala ha mostrato un valore più alto di quello di Aloevera alla stessa concentrazione (P = 0,004). Risultati simili sono stati ottenuti alla concentrazione del 50% di Triphala e Aloevera (P = 0,004). La concentrazione minima inibitoria di Aloevera gel e Triphala contro C. albicans era del 25% e del 12,5%, rispettivamente. Conclusioni: Aloevera gel e Triphala hanno entrambi mostrato proprietà antifungine a concentrazioni più elevate e possono essere utilizzati come un promettente complemento per gli agenti antifungini.

Parole chiave: Antifungino, cultura, naturale

Come citare questo articolo:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Confronto di effetto antifungino di Aloevera gel e Triphala: Uno studio in vitro. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017;29:90-4

Come citare questo URL:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparazione dell’effetto antifungino di Aloevera gel e Triphala: uno studio in vitro. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017 ;29:90-4. Disponibile da: https://www.jiaomr.in/text.asp?2017/29/2/90/217911

Introduzione

Candida è un genere di lieviti ed è la causa più comune di infezione fungina orale. La maggior parte delle specie di Candida sono commensali innocui o endosimbionti degli ospiti, compresi gli esseri umani; tuttavia, quando il sistema immunitario è compromesso o quando le barriere della mucosa sono interrotte, possono invadere e causare malattie. Candida albicans è la specie più comunemente isolata ed è responsabile del mughetto orale e della candidosi pseudomembranosa.
Il costo, gli effetti collaterali e l’aumento della resistenza ai farmaci antifungini disponibili in commercio hanno portato i ricercatori a esplorare i rimedi naturali a base di erbe contro le infezioni fungine, le piante medicinali tradizionalmente usate sono una ricca fonte di agenti antimicrobici e sono facilmente disponibili nelle zone rurali. Sono relativamente meno costose della medicina moderna. I prodotti dei metaboliti secondari, prodotti dalle piante medicinali, sono una fonte importante di molti farmaci farmaceutici.
L’Aloevera è una pianta simile al cactus che appartiene alla famiglia delle Liliacee. Il gel di Aloevera è un gel mucillaginoso incolore, secreto dalle cellule parenchimatose delle foglie fresche di Aloevera. Contiene 98-99% di acqua e 1-2% di composti attivi come aloina, aloe-emodina, aloemannano, flavonoidi, aloesina, steroli, aminoacidi e vitamine. Triphala significa tre frutti, è una formulazione ayurvedica indiana che comprende Terminali chebula, T. Belerica e Phyllantus embelica in proporzione 1:1:1. I suoi costituenti fitochimici sono tannino, acido gallico, acido ellagico, fenolo e glicosidi. Sia l’Aloevera che la Triphala hanno proprietà antibatteriche, antiossidanti, antimicotiche, antinfiammatorie e immunomodulatorie, Gli effetti degli estratti di Aloevera e Triphala sull’infezione orale da Candida sono stati studiati da pochissimi ricercatori in India. Lo scopo dello studio era di determinare le attività antifungine e inibitorie di varie concentrazioni di Aloevera gel e Triphala contro C. albicans.

Materiali e metodi

Lo studio è stato condotto nel Dipartimento di Microbiologia, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur. L’autorizzazione etica è stata presa dal comitato etico istituzionale. Il consenso informato è stato preso da tutti i pazienti. Il tampone di Candida è stato prelevato dai pazienti affetti da candidosi pseudomembranosa con stomatite da dentiera e trasferito nel brodo di Sabouraud. Tutti gli isolati di Candida sono stati confermati dal test in provetta e dal test di germinazione delle spore. Il campione di Candida isolato è stato incubato in Sabouraud’s dextrose agar SDA (HIMEDIA laboratories, Mumbai) a 4°C.

Figura 1: Crescita della Candida nel brodo di Sabouraud Clicca qui per vedere

Preparazione dell’estratto di Aloevera
L’epidermide spessa della foglia fresca di Aloevera è stata rimossa e il gel mucillaginoso solido è stato raccolto in un contenitore sterile. Dieci millimetri del gel sono stati mescolati in 100 ml di dimetilsolfossido (DMSO) all’1% e tenuti a 4°C. Il DMSO (≤1%) ha un effetto insignificante sulla crescita dei funghi ed è stato quindi utilizzato come solvente.

Figura 2: Estrazione del gel di Aloevera da foglie fresche in piastra sterile Clicca qui per vedere

Preparazione dell’estratto di Triphala
Cento grammi di Triphala churna (Dabur Triphala churna) sono stati mescolati in 100 ml di acqua per fare una soluzione acquosa. Poi questa soluzione è stata bollita per 45 minuti. Successivamente, è stata raffreddata e filtrata. Questo filtrato è stato usato per verificare il suo effetto antifungino. La proprietà antifungina di Aloevera gel e Triphala è stata rilevata usando il metodo della diffusione del disco.

Figura 3: Triphala churna Clicca qui per vedere

Attivazione di Candida albicans
Le spore fungine sono state messe in strisce su una piastra di agar destrosio di patate (PDA) e incubate a 37°C per 24 ore prima del test. Tutte le piastre (n = 10) sono state mantenute a 4°C per un ulteriore utilizzo.
Metodo di diffusione a disco
In ogni piastra (n = 10 per Candida) sono stati forati pozzi di 8 millimetri che hanno attivato C. albicans, con una trivella di 8 mm in agar seminato in cui è stato versato il 100%, 50%, 25%, e 12,5% di estratto di Aloevera gel. Allo stesso modo, per Triphala, 8 mm pozzi sono stati forati in piastra diversa (n = 10 per Triphala) avendo attivato C. albicans, con 8 mm borer in agar seminato in cui 100%, 50%, 25%, e 12,5% di estratto Triphala è stato versato. Dopo aver normalizzato a temperatura ambiente, le piastre sono state incubate a 37°C per 24 ore. La zona di inibizione è stata misurata e registrata.

Figura 4: (a) Zona di inibizione alla concentrazione del 100% di Triphala. (b) Zona di inibizione alla concentrazione del 50% di Triphala. (c) Zona di inibizione alla concentrazione del 100% di Aloevera. (d) Zona di inibizione alla concentrazione del 50% di Aloevera Clicca qui per vedere

Concentrazione minima inibitoria
La concentrazione minima inibitoria (MIC) è stata fatta usando il metodo di diluizione in microbrodo. La diluizione più alta che non ha prodotto una singola colonia fungina è stata presa come MIC. Gli estratti di Aloevera sono stati mescolati con l’1% di DMSO per ottenere varie concentrazioni dello stock, cioè 100%, 50%, 25%, 12,5% e 6,25%. Allo stesso modo, varie concentrazioni di Triphala sono state ottenute mescolando l’estratto con acqua distillata. Un volume uguale delle varie concentrazioni di ogni estratto e sono stati mescolati in microprovette (Sabouraud dextrose broth) per fare 0,5 ml di soluzione. Le provette sono state incubate a 37°C per 24 ore. In seguito, la diluizione di prova è stata subcoltivata su SDA e incubata per 24 ore per controllare la crescita fungina.

Figura 5: Concentrazione minima inibitoria per Triphala e Aloevera Clicca qui per vedere

Analisi statistica
I dati sono stati compilati in MS Office Excel. L’analisi statistica è stata fatta usando il pacchetto software SPSS versione 21 (SPSS Statistics for Windows, Version 21.0. Chicago: SPSS Inc.). Il test di analisi della varianza (ANOVA) è stato eseguito per i confronti intra e intergruppo. Il test post hoc (Tukey HSD) è stato eseguito anche per confrontare le diverse concentrazioni di Aloevera, Triphala, ed entrambe. I risultati sono stati misurati come media ± SD. Il valore P inferiore a <0,05 è stato considerato statisticamente significativo e <0,001 altamente significativo.

Risultato

I campioni di Candida raccolti sono stati analizzati mediante colorazione di Gram, che ha mostrato la presenza di gruppi di pseudofae che suggeriscono la specie C. albicans. Il valore medio della zona di inibizione per l’Aloevera era 3,35 ± 0,59 mm e 1,06 ± 0,41 mm al 100% e al 50%, rispettivamente. Per Triphala, era 4,19 ± 0,57 mm e 1,79 ± 0,43 mm al 100% e al 50%, rispettivamente. Sia Triphala che Aloevera gel hanno mostrato proprietà antifungine a concentrazioni più elevate (concentrazione del 100% e del 50%, valore P < 0,001).

Tabella 1: Valore medio della zona di inibizione di Aloevera e Triphala a diverse concentrazioni Clicca qui per vedere

Si è osservata una differenza altamente significativa tra 100% e 50% di Aloevera (P< 0.001, t = 19.17). Risultati simili sono stati osservati per 100% e 50% Triphala (P< 0.001, t = 31.58). Quando è stata eseguita l’ANOVA, il grado di libertà tra Aloevera e Triphala era 3 e all’interno dei gruppi (100% v/s 50%) era 36. Su Post hoc test, la zona di inibizione di 100% Triphala ha mostrato un valore più alto di Aloevera alla stessa concentrazione (P = 0.004). Risultati simili sono stati ottenuti alla concentrazione del 50% di Triphala e Aloevera (P = 0.000). A concentrazioni inferiori (25% e 12,5%), non c’è stato alcun effetto contro la Candida. La MIC di Aloevera gel e Triphala contro C. albicans era del 25% e del 12,5%, rispettivamente.

Tabella 2: Test t di Student per mostrare il confronto all’interno del gruppo Clicca qui per vedere

Tabella 3: Test ANOVA che mostra i gradi di libertà tra i gruppi e all’interno del gruppo Clicca qui per vedere

Tabella 4: Post hoc Test (Tukey HSD) che mostra il confronto all’interno dei gruppi Clicca qui per vedere

Discussione

L’emergere di batteri e funghi multiresistenti (MDR) e l’alto costo dei farmaci farmaceutici hanno reso necessario lo sviluppo di farmaci alternativi da fonti naturali e non. Le piante medicinali, che vengono usate fin dall’antichità nell’Ayurveda, potrebbero essere una di queste alternative in quanto sono economiche, sicure ed efficaci contro molti microbi. Molti ricercatori hanno controllato l’effetto antibatterico di Aloevera e Triphala,,, Pochi studi sono stati condotti per controllare l’effetto antifungino di queste piante contro l’infezione candida orale.,,,,,, Il presente studio è stato condotto per determinare le attività antifungine e inibitorie di varie concentrazioni di Aloevera gel e Triphala contro C. albicans. Nel presente studio, sia il Triphala che l’Aloevera hanno mostrato proprietà anticandidali a concentrazioni del 100% e del 50%. Nessun cambiamento significativo è stato visto a concentrazioni inferiori (25% e 12,5%).
Sheta et al. hanno usato 0,5% DMSO e acqua distillata come solvente e mescolato Triphala (sospensione) per ottenere una concentrazione finale di 100 mg/ml. Hanno trovato che la zona di inibizione del Triphala contro la Candida era di 12 mm quando l’acqua era usata come solvente e di 20 mm quando il DMSO era usato come solvente. Gli autori hanno anche controllato la proprietà antifungina per DMSO e hanno trovato che non ha alcun effetto antifungino. Non hanno fatto bollire la sospensione d’acqua, che potrebbe essere la causa di risultati migliori del nostro studio. Randhawa ha suggerito che il DMSO aumenta la permeabilità delle cellule legandosi alla membrana cellulare, causando così un effetto sinergico con i farmaci anticandidali. Nel caso presentato, l’acqua è stata usata come solvente per il Triphala. El-Mekkawey et al. hanno trovato che T. chebula può inibire le specie di Candida (compresa C. albicans resistente al clotrimazolo). Malhotra et al. nel loro studio in vitro hanno trovato che le unità formanti colonie (CFU) di C. albicans sono scese a zero dopo 10 minuti con l’uso del 6% di collutorio Triphala.
Khaing ha trovato che l’estratto etanolico di Aloevera non ha effetti anticandidali. Uno studio simile di Kaur et al. ha mostrato che l’Aloevera è efficace contro C. albicans. Hanno suggerito che un risultato positivo nel loro studio potrebbe essere dovuto al cambiamento della procedura di estrazione del gel, cioè, hanno estratto il gel a temperatura ambiente mentre uno studio precedente aveva estratto il gel a 90°C. Quindi, il componente attivo potrebbe essere stato perso nell’estratto etanolico se l’estrazione è stata fatta ad una temperatura più alta.

Uno studio di Stanley et al. ha trovato che la zona di inibizione dell’Aloevera contro C. albicans era di 4 mm e il MIC era del 50%, che era simile al presente studio. Shireen et al. hanno scoperto che la proprietà antifungina dell’Aloevera è dose dipendente. Hanno preso il succo di Aloevera (1000, 500, 250, 100 μg) dalle foglie fresche e lo hanno mescolato con 10 ml di etanolo. La zona di inibizione era di 14 mm contro C. albicans alla concentrazione di 1000 μg, che era paragonabile all’amfotericina B. Chainani et al. hanno usato l’estratto etanolico di Triphala e hanno scoperto che ha mostrato un effetto anticandidale alla concentrazione del 5% e oltre. Il Triphala ha mostrato risultati migliori rispetto all’Aloevera, con una maggiore zona di inibizione sia alla concentrazione del 100% che del 50%. Inoltre, il Triphala inibisce la crescita della Candida a una concentrazione inferiore (12,5%) rispetto all’Aloevera (50%).
L’effetto antimicrobico dell’Aloevera è attribuito al componente naturale chiamato antrachinoni (emodina, acido aloetico, aloina, antracene, anthranol, barbaloin, acido crisofanico, olio eterico, estere di acido cinnamico, isobarbaloin, e resistannol).La proteina purificata dell’aloe di 14 kDa dal gel della foglia di Aloevera ha esibito una potente attività antifungina contro C. albicans.L’effetto antifungino di Triphala è dovuto ai suoi due componenti.
Abbiamo trovato che sia Triphala che Aloevera hanno mostrato attività antifungina contro C. albicans. Tuttavia, il meccanismo d’azione di questi agenti a base di erbe sui microbi deve ancora essere compreso. Inoltre, sono necessari ulteriori studi su vari carichi fungini e varie concentrazioni sia di Triphala che di Aloevera per verificarne la potenza contro varie specie di Candida.

Conclusione

L’aumento dei patogeni fungini, le limitate opzioni terapeutiche, gli effetti collaterali dei farmaci terapeutici e l’emergere di MDR rappresentano un peso per i pazienti con un’immunità compromessa. C. albicans è l’infezione opportunistica più comune del cavo orale, frequentemente isolata da campioni di tessuto di pazienti affetti. Le medicine tradizionali utilizzano prodotti vegetali da secoli. A causa della loro facilità di disponibilità e dell’effetto meno tossico, sono stati fatti sforzi per sviluppare opzioni terapeutiche utilizzando molecole di origine vegetale. Questo studio è anche uno sforzo simile per verificare gli effetti antifungini di Triphala e Aloevera. In questo studio, Aloevera e Triphala hanno mostrato un’attività antifungina.

Limitazioni
Il presente studio è stato condotto in vitro e ha coinvolto un piccolo campione. In futuro, ulteriori studi dovrebbero essere condotti su una popolazione più grande (in vivo) per dimostrare l’efficacia antifungina di Aloevera e Triphala contro C. albicans per caratterizzare il meccanismo d’azione per l’ulteriore traduzione in uso clinico e superare le sfide della terapia fungina.
Sostegno finanziario e sponsorizzazione
Nullo.
Conflitti di interesse
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