Saggi di apoptosi comunemente usati nella ricerca sull’apoptosi
Domanda:
Quali sono i saggi di apoptosi più comunemente usati?
L’uomo delle proteine dice:
La ricerca sull’apoptosi richiede l’uso di una vasta gamma di saggi di apoptosi poiché il processo stesso è abbastanza complicato. Inoltre, non c’è un singolo parametro che può definire la morte cellulare in tutti i sistemi, quindi è necessario utilizzare diversi approcci nel corso della ricerca.
Tipi principali di saggi di apoptosi
Ci sono cinque tipi distinti di saggi di apoptosi che sono attualmente utilizzati nella ricerca sull’apoptosi. Questi includono i test delle caspasi, i test di frammentazione del DNA, i test di permeabilità cellulare e i test mitocondriali. Inoltre, c’è anche un tipo di test che può essere utilizzato per facilitare l’analisi delle vie di segnalazione dell’apoptosi.
Saggi caspasi. La presenza di enzimi caspasi in qualsiasi campione è un indicatore sicuro che si stanno verificando eventi biochimici complessi associati all’apoptosi. Come tale, i saggi delle caspasi possono essere utilizzati per rilevare l’apoptosi in popolazioni di cellule durante le sue prime fasi. Questi saggi utilizzano abitualmente substrati specifici che vengono digeriti dalle caspasi per rilasciare substrati colorimetrici o fluorometrici.
Saggi di frammentazione del DNA. L’apoptosi e la scissione del DNA vanno di pari passo, quindi è possibile determinare il grado di apoptosi misurando i frammenti di DNA presenti nel campione. La maggior parte dei ricercatori usa l’analisi ladder del DNA apoptopico, la quantificazione ELISA e i saggi TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) per questo scopo.
Saggi di permeabilità cellulare. L’apoptosi della fase intermedia può essere determinata usando i test di permeabilità cellulare. Come probabilmente sapete, le cellule sane hanno membrane plasmatiche rigide mentre le cellule morte hanno membrane cellulari altamente permeabili. Con le loro membrane altamente compromesse, i coloranti fluorescenti possono facilmente passare attraverso le cellule apoptopiche. Quando questo accade, osserverai una fluorescenza caratteristica o un modello di colorazione che indica la presenza di popolazioni di cellule apoptopiche nel tuo campione.
L’aumento della permeabilità cellulare provoca anche la perdita di proteine citosoliche dalla cellula. La lattato deidrogenasi (LDH) è un enzima citosolico solubile che viene rilasciato nel mezzo di coltura in seguito alla perdita di integrità della membrana derivante da apoptosi o necrosi. L’attività della LDH, quindi, può essere usata come indicatore dell’integrità della membrana cellulare e serve come mezzo generale per valutare la citotossicità derivante da composti chimici o fattori tossici ambientali. Esistono diversi saggi per la quantificazione della LDH rilasciata.
Saggi mitocondriali. I saggi mitocondriali possono aiutare a determinare l’apoptosi allo stadio iniziale poiché utilizzano un colorante cationico che emette una fluorescenza diversa quando viene usato in popolazioni di cellule sane e in popolazioni di cellule apoptopiche.
Sapere quali saggi di apoptosi usare e quando usarli può aiutare molto nella tua ricerca, quindi è meglio iniziare a conoscerli a memoria.
Sapere quali saggi di apoptosi usare e quando usarli può aiutare molto la tua ricerca.