Validazione di un test ADCC utilizzando cellule killer naturali primarie umane per valutare i prodotti bioterapeutici con una regione Fc

Lo sviluppo di bioterapeutici richiede un continuo miglioramento delle metodologie analitiche per la valutazione dei loro attributi di qualità. Un sottogruppo di bioterapeutici è progettato per interagire con antigeni specifici che sono esposti sulle membrane delle cellule bersaglio o che circolano in forma solubile, e le funzioni effettrici sono ottenute attraverso il riconoscimento della loro regione Fc da parte delle cellule effettrici che inducono meccanismi come la citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente (ADCC). Quindi, l’induzione ADCC è un attributo critico di qualità (CQA) che deve essere valutato per garantire l’efficacia bioterapeutica. L’induzione di ADCC può essere valutata impiegando cellule effettrici da diverse fonti, come le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) e linee cellulari geneticamente modificate (ad esempio, cellule NK o Jurkat trasfettate), e diversi approcci possono essere utilizzati per il rilevamento e l’interpretazione dei risultati a seconda del tipo di cellule effettrici utilizzate. A questo proposito, la convalida dei saggi è rilevante per garantire l’affidabilità dei risultati secondo lo scopo previsto. Qui, mostriamo la standardizzazione e la convalida dei saggi ADCC per testare la potenza di tre proteine bioterapeutiche utilizzando cellule NK primarie ottenute da sangue fresco come cellule effettrici e rilevando la morte cellulare tramite citometria a flusso. Il vantaggio di usare NK primarie invece di cellule modificate è che la risposta è più vicina a quella che si verifica in vivo poiché la citotossicità è valutata in modo diretto. I nostri risultati indicano che in tutti i casi, i saggi hanno esibito una caratteristica curva sigmoidale dose/risposta conforme a parametri accurati, precisi e specifici. Pertanto, il test ADCC convalidato è un’alternativa appropriata per valutare le attività biologiche di questo tipo di bioterapeutici.