Vettori retrovirali amfotropi e VSV-G-pseudotipati trasducono le cellule progenitrici ematopoietiche umane con efficienza simile

Una restrizione del trasferimento genico retrovirale nelle cellule staminali ematopoietiche è il basso livello di recettore virale amfotropo. Nel presente studio, abbiamo esaminato se i vettori retrovirali pseudotipati con la proteina G del virus della stomatite vescicolare (VSV) possono superare questa restrizione. Le cellule progenitrici umane purificate da perline magnetiche e cell sorting sono state trasdotte con un vettore retrovirale anfotropo o VSV-G-pseudotipato contenente il recettore troncato del fattore di crescita nervoso umano come gene marcatore. Le cellule sono state prestimolate con flt-3 ligando, fattore di cellule staminali e interleuchina-3 e trasdotte su fibronectina. L’espressione del gene marcatore è stata analizzata mediante citometria a flusso. Le efficienze di trasduzione del virus amphotropic e VSV-G-pseudotyped per le cellule CD34+ non differivano significativamente. Il trasferimento del gene nelle cellule CD34+CD38-, che sono arricchite in progenitori più immaturi, non è stato limitato e le efficienze di trasferimento per questo sottogruppo erano anche simili per entrambi gli pseudotipi. L’aggiunta di fibronectina ha migliorato notevolmente il trasferimento genico con il vettore anfotropo (da 5 a 19,3 volte, media 12,6), mentre l’effetto sullo pseudotipo VSV-G era molto meno pronunciato (da 1 a 3,9 volte, media 2,1, P = 0,04). In conclusione, alti livelli di trasferimento genico ai progenitori ematopoietici umani sono stati raggiunti con un protocollo di trasduzione ottimizzato, e l’efficienza della trasduzione non potrebbe essere migliorata ulteriormente dall’uso di VSV-G-pseudotipi. Trapianto di midollo osseo (2000) 25 , Suppl. 2, S75-S79.