アロエベラジェルとトリファラの抗真菌作用の比較。 An in vitro study Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A

ORIGINAL ARTICLE

年: 2017｜Volume：29｜Issue：2｜Page：90-94

アロエベラジェルとトリファラの抗真菌作用の比較。 An in vitro study
Supreet Jain1, Sheetal Mujoo2, Minal Daga3, Salona Kalra4, Ravleen Nagi1, Afshan Laheji5
1 Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
2 Department of Oral Medicine and Radiology.No.1, Dental College of Radiology, Chattisgarh, India1,2,3,4,6,7。 ジャザン大学歯学部（サウジアラビア）
3 歯科保存学および歯内療法学科（ニューホライズン歯科大学および研究所、インド、チャッティースガル州ビラスプル）
4 口腔医学および放射線学科（インド、チャッティースガル州ビラスプル）。 Triveni Institute of Dental Sciences Hospital and Research Centre, Bilaspur, Chhattisgarh, India
5 Department of Oral and Maxillofacial Pathology, Daswani Dental College, Kota, Rajasthan.The University of Dental Sciences, Inc, インド

通信先:
Supreet Jain
Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Sakri, Bilaspur, Chhattisgarh
India

Source of Support: なし、利益相反。 なし

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DOI: 10.4103/jiaomr.DI: 10.4103/jiaomr.DI: 10.4104/jiaomr.JIAOMR_167_16

Abstract

目的：本研究の目的は口腔内キャンディアダルビカンスに対して様々な濃度のAloeveraゲルとトリファラの抗真菌および阻害活性を決定し比較することであった。 材料と方法 偽膜性カンジダ症患者および義歯性口内炎患者10名から真菌（C. albicans）を分離し、Sabouraudのブロスに移し、その後Sabouraudのデキストロース寒天（SDA）中で培養を行った。 アロエベラジェルとトリファラの抗真菌活性をディスク拡散法で、最小発育阻止濃度をブロス微量希釈法で測定したところ、アロエベラジェルの方が高い発育阻止率を示した。 結果 アロエベラは100%で3.35 ± 0.59 mm、50%で1.06 ± 0.41 mmの阻止域を示した。 Triphalaは100%で4.19 ± 0.57 mm、50%で1.79 ± 0.43 mmであった（P値 < 0.001)。 100%トリファラのZone of Inhibitionは，同濃度のアロエベラより高い値を示した（P = 0.004）。 50％濃度のトリファラとアロエベラでも同様の結果が得られた（P = 0.004）。 C. albicansに対するアロエベラゲルとトリファラの最小阻害濃度は、それぞれ25％と12.5％であった。 結論 アロエベラジェルとトリファラは共に高濃度で抗真菌性を示し、抗真菌剤の補助剤として有望である。

Keywords 抗真菌、培養、天然

How to cite this article:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala:An in vitro study.Alloevera gelとTriphalaは高濃度の抗真菌効果を示した。 J Indian Acad Oral Med Radiol 2017;29:90-4

How to cite this URL:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala:An in vitro study.アロエラゲルとトリファラの抗真菌作用の比較。 J Indian Acad Oral Med Radiol 2017 ;29:90-4. Available from: https://www.jiaomr.in/text.asp?2017/29/2/90/217911

Introduction

Candida は酵母の属で口腔真菌症では最も多い原因である。 カンジダの多くは、ヒトを含む宿主の無害な常在菌または内生菌であるが、免疫系の低下や粘膜のバリアーが破壊されると、侵入して病気を引き起こすことがある。 カンジダ・アルビカンスは最もよく分離される菌種で、口腔鵞口瘡や偽膜性カンジダ症の原因となります。
市販の抗真菌薬のコスト、副作用、耐性の増加により、研究者は真菌感染に対する天然ハーブ療法を探求するようになりました。 また、現代医学に比べ比較的安価である。 薬用植物が生産する二次代謝産物は、多くの医薬品の重要な供給源です。

アロエベラは、ユリ科に属するサボテンに似た植物です。 アロエベラジェルは、アロエベラの生葉の柔細胞から分泌される粘液質の無色ゲルである。 98-99%が水分で、アロイン、アロエエモジン、アロエマンナン、フラボノイド、アロエシン、ステロール、アミノ酸、ビタミンなどの活性化合物が1-2%含まれています。 Triphalaは3つの果実という意味で、Terminali chebula, T. Belerica, Phyllantus embelicaを1：1：1の割合で配合したインドのアーユルヴェーダ製剤で、植物化学成分としてタンニン、没食子酸、エラグ酸、フェノール、配糖体などが含まれています。 アロエベラとトリファラは共に、抗菌、抗酸化、抗真菌、抗炎症、免疫調節の特性がある。 本研究の目的は、C. albicansに対する様々な濃度のAloeveraゲルとTriphalaの抗真菌および阻害活性を決定することである。

材料と方法

研究は、ニューホライズン歯科大学と研究所、ビラスプル、マイクロバイオロジー学科で行われました。 倫理委員会から倫理的な許可を得た。 すべての患者からインフォームドコンセントを取得した。 義歯性口内炎による偽膜性カンジダ症患者からCandida swabを採取し，Sabouraud’s brothに移し替えた． 分離されたCandidaはすべてgerm-tube testおよび胞子発芽試験により確認された． この分離されたカンジダ菌はSDA（HIMEDIA laboratories, Mumbai）寒天培地で4℃にて培養された．

Figure 1: Candida growth in Sabouraud’s broth Click here to view

アロエベラ抽出物の調製
アロエベラ生葉から表皮を取り除き、粘性の固いジェルを無菌容器に回収しました。 このゲル10mmを1％ジメチルスルホキシド（DMSO）100mlに混合し、4℃に保った。 DMSO（≦1％）は真菌の増殖に影響を与えないため、溶媒として使用した。

Figure 2: Aloevera gel from fresh leaves in sterile plate Click here to view

トリファラ抽出物の調製
トリファラチュルナ（ダブールトリファラチュルナ）100gを水100mlに混合して水溶液とした後、トリファラチュルナ（Dabur Triphala churna）1.2mlを加えて混合したものをトリファラ抽出物とした。 この溶液を45分間沸騰させた。 その後、冷却して濾過した。 この濾液を使用して抗真菌効果を確認した。 8967>

Andida albicansの活性化
ポテトデキストロース寒天（PDA）プレート上に真菌の芽を出し、試験の前に37℃で24時間インキュベーションしました。 ディスク拡散法
C. albicansを活性化した各プレート(n=10)に8mmのウェルを開け、アロエベラジェル抽出物を100%、50%、25%、12.5%入れた播種寒天を8mmのボーラーで播種した後、ディスク拡散法で拡散させた。 同様に、Triphalaについては、活性化したC. albicansを有する異なるプレート（Triphalaはn=10）に8mmのウェルを開け、Triphala抽出物を100%、50%、25%、12.5%添加した播種寒天培地を8mmボーラーで穿孔した。 室温に戻した後、37℃、24時間培養した。

Figure 4: (a) Triphala 100%濃度におけるZone of Inhibition. (b) トリファラ50％濃度における阻害率。 (c) アロエベラ100％濃度における阻害率。 (d) Aloevera 50%濃度におけるZone of Inhibition Click to view

Minimum inhibitory concentration
Minimum inhibitory concentration（MIC）はマイクロブロスダイリューション法により行われました。 真菌のコロニーが1つも生じなかった最高希釈率をMICとした。 アロエベラ抽出物を1％DMSOと混合し，100％，50％，25％，12.5％，6.25％の各濃度の原液を得た。 同様に、Triphalaは、抽出物と蒸留水を混合することにより、様々な濃度を得た。 等量の各抽出物をマイクロチューブ（Sabouraud dextrose broth）中で混合し、0.5 mlの溶液とした。 このチューブを37℃で24時間インキュベートした。 その後、試験希釈液をSDA上で継代培養し、24時間培養して菌の増殖を確認した。

Figure 5: TriphalaとAloeveraの最小阻害濃度

統計解析
データはMS Office Excelで編集されました。 統計分析は、SPSSバージョン21ソフトウェアパッケージ（SPSS Statistics for Windows, Version 21.0. Chicago: SPSS Inc.）を使用して行った。 分散分析（ANOVA）検定は、グループ内およびグループ間の比較のために実施した。 また、アロエベラ、トリファラ、およびその両方の異なる濃度を比較するために、ポストホックテスト（Tukey HSD）を実行した。 結果は、平均値±SDで測定した。 7272>

結果

収集したカンジダサンプルは、グラム染色によって分析し、偽陽性のクラスターが存在し、C. albicans種を示唆することが示された。 アロエベラは100%で3.35 ± 0.59 mm、50%で1.06 ± 0.41 mmのゾーンオブインヒビションがみられた。 トリファラでは、100%および50%でそれぞれ4.19 ± 0.57 mmおよび1.79 ± 0.43 mmであった。 TriphalaとAloeveraゲルともに高濃度（100%と50%濃度、P値< 0.001）において抗真菌性を示した。

Table 1: AloeveraとTriphalaの異なる濃度におけるゾーンオブインヒビションの平均値 Click here to view

Aloevera100%と50%の間に高い有意差が認められた（P< 0.001, t = 19.17)． また，トリファラ100%，50%においても同様の結果が得られた（P< 0.001, t = 31.58）。 ANOVAを行った結果、AloeveraとTriphalaの間の自由度は3、グループ内（100%対50%）では36であった。 Post hoc testでは、同濃度において100% TriphalaのZone of InhibitionがAloeveraより高い値を示した(P = 0.004)。 50％濃度のトリファラとアロエベラでも同様の結果が得られた（P = 0.000）。 低濃度（25%および12.5%）では、Candidaに対する効果は見られなかった。 C. albicansに対するアロエベラジェルとトリファラのMICは、それぞれ25％と12.5％であった。

表2：グループ内の比較を示すスチューデントのt検定 クリックして表示

表3：グループ内の比較を示すスチューデントのT検定。 群間および群内の自由度を示すANOVA検定 こちらをクリック

表4: グループ内の比較を示すポストホックテスト（Tukey HSD） Click to view

Discussion

多剤耐性菌や真菌の出現、医薬品の高コスト化により、天然物などからの代替薬開発が必要になっている。 アーユルヴェーダで古くから利用されている薬用植物は、安価で安全、かつ多くの微生物に有効であることから、その代替薬のひとつになり得るだろう。 多くの研究者がアロエベラやトリファラの抗菌効果を確認しているが、口腔カンジダ症に対するこれらの植物の抗真菌効果を確認する研究はほとんど行われていない。 本研究では、TriphalaとAloeveraはともに100%と50%の濃度で抗カンジダルの特性を示した。 低濃度（25％、12.5％）では有意な変化は見られなかった。
Shetaらは、溶媒として0.5％DMSOと蒸留水を用い、最終濃度100mg/mlとなるようにトリファラ（サスペンション）を混合している。 彼らは、TriphalaのCandidaに対する阻害域は、溶媒として水を使用した場合12mm、DMSOを使用した場合20mmであることを見いだした。 また、著者らはDMSOの抗真菌性を確認した結果、抗真菌作用はないことを明らかにした。 彼らは水懸濁液を煮沸していないため、我々の研究よりも良い結果が得られたと思われる。 Randhawaは、DMSOが細胞膜と結合することで細胞の透過性を高め、抗カンジダール薬との相乗効果をもたらすと示唆した。 今回のケースでは、Triphalaの溶媒として水が使用された。 El-Mekkawey らは、T. chebula がカンジダ種（クロトリマゾール耐性 C. albicans を含む）を抑制する可能性があることを見出した。 Malhotraらのin vitro研究では、6％Triphalaマウスウォッシュの使用により、10分後にC. albicansのコロニー形成単位（CFUs）がゼロになることがわかりました。
Khaingは、Aloeveraのエタノール抽出物に抗カンドール効果がないことを発見しました。 Kaurらによる同様の研究では、アロエベラがC. albicansに対して有効であることが示されました。 彼らは、先行研究では90℃でゲルを抽出したのに対し、彼らは室温でゲルを抽出するなど、ゲル抽出の手順を変更したことが肯定的な結果をもたらした可能性を示唆した。 Stanleyらの研究では、C. albicansに対するAloeveraの阻害域は4mm、MICは50％であり、本研究と同様であった。 Shireenらの研究では、アロエベラの抗真菌作用は用量依存的であることを明らかにした。 彼らは、生葉からアロエベラ汁（1000、500、250、100μg）をとり、10mlのエタノールと混ぜた。 ChainaniらはTriphalaのエタノール抽出物を用い、5％以上の濃度で抗カンジダルの効果があることを見出した。 TriphalaはAloeveraと比較した場合、100％、50％濃度ともに大きな阻止域を示し、より良い結果を示した。 さらに、TriphalaはAloevera（50%）と比較して、より低い濃度（12.5%）でCandidaの増殖を抑制しました。
Aloeveraの抗菌効果は、アントラキノン（エモジン、アロエ酸、アロイン、アントラセン、アントラノール、バルバロイン、クリソファン酸、エチルオイル、ケイ皮酸エステル、イソバルバロイン、レジスタンノール）という天然成分によるものと考えられています。Triphalaの抗真菌作用は、その2つの成分によるものであることがわかった。 しかし、これらの生薬の微生物に対する作用機序は、まだ解明されていない。 さらに、様々なカンジダ種に対する効力を確認するために、様々な真菌負荷とTriphalaとAloeveraの両方の様々な濃度に関するさらなる研究が必要である。

結論

真菌病原体の増加、治療法の制限、治療薬の副作用、MDRの出現は免疫低下患者に負担をかけている。 C. albicansは口腔内における最も一般的な日和見感染症であり，患者の組織検体から頻繁に分離される。 伝統的な薬物療法では、古くから植物製品が使用されてきました。 その入手のしやすさと毒性の低さから、植物由来の分子を用いた治療法の開発が進められています。 本研究は、TriphalaとAloeveraの抗真菌効果を確認するための類似の試みである。 本研究では、AloeveraとTriphalaが抗真菌作用を示すことが判明した。 今後、C. albicansに対するAloeveraとTriphalaの抗真菌効果を証明するために、より大きな集団（in vivo）でより多くの試験を実施し、作用メカニズムを明らかにし、臨床使用へのさらなる変換と真菌治療薬の課題を克服する必要があります。

利益相反
利益相反はありません。

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