アンスリウム属のマイクロプロパゲーション

テーブル1.1.A.

Anthuriumtissue cultureで使用する殺菌方法

Culture medium

植物組織培養アプリケーションにおいて増殖効率に影響を与えるのは培養液である。 有機化合物、ビタミン、植物成長調整剤は、健全な成長を促すために使用されます。 組織の成長速度や形態形成反応は、含まれる栄養素の特徴に大きく影響されます。

基礎培地には、Chu 、GamborgのB5 、Murashige and Skoog 、Murashige and Tucker 、Nitsch and Nitsch などの種類があります。 これらの培地は、さまざまな植物のさまざまな摘出物の組織培養の確立にうまく使用されています。

植物組織培養の研究では、効率的なプロトコルを開発するために、マクロおよびマイクロ栄養素の異なる濃度に基づくあらゆる培地の異なる組み合わせが使用されてきました。 アンスリウムも他の植物と同様に、迅速かつ効率的な組織培養プロトコルが重要である。 窒素、カリウム、カルシウム、リン、マグネシウム、硫黄などの多量栄養素と鉄、ニッケル、塩素、マンガナーゼ、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデンなどの微量栄養素の組み合わせによって、培地の性質が変化する。

MS培地はアンスリウムの組織培養に頻繁に適用され、いくつかの変更を加えています。

窒素は植物に不可欠な栄養素であり、植物成長調整剤とMS培地を組み合わせて使用することにより、目的の組織を得ることができます。 タンパク質や核酸の重要な構成要素である。 硝酸塩は窒素の主な供給源です。 NO3-は取り込まれた後、アンモニウムに還元される。 植物は還元された窒素を代謝に利用する能力を持っている。 硝酸塩の取り込みは、pHが酸性であれば効果的に行われる。 しかし、硝酸塩の取り込み後、培地は弱酸性になる。 アンモニウムを取り込むと、培地はより酸性に傾く。 植物培地のpHが重要なのは、緩衝培地では両イオンの存在が窒素の効率的な取り込みに影響するからである。 培地中の窒素の形態や量は、細胞の増殖や分化に大きな影響を与えるが、両イオンを使用する理由は培地のpH制御だけではなく、過剰なアンモニウムイオンは植物にとって毒である。 また、NH4+を多く含む培地はクロロフィル合成を阻害する。

根の成長はNO3-で誘導され、NH4+で減少することが知られている。 しかし、形態形成は培地中の全窒素量によって制御されており、NO3-とNH4+の両方が必要である。 最適なNH4+を使用するため。 NO3-は形態形成に重要な役割を果たすので、NO3-とNH4+のバランスは植物や培養の種類によって異なります。 このことから、この比率は植物種ごと、目的ごとに調整する必要があります。 NO3-とNH4+の比率をわずかな変化で変えることは、分化や成長に影響を与える。

根

葉

Leaf

+0.1mg/l 2,4-D+1.0mg/l BA

MS+4.0μM

A.5mg/l BAP+60mg/l adenine sulphate

A.andreanum Hort

Shoot induction

Leaf

MS+0.46μM Kin

Callus

カルス誘導

NAA

Anthurium species

Explant source

Medium components

Aim

Reference

A.A.andreanum

葉

MS+2.2-4.4μM BA+0.9μM 2,4-D

新芽

修正MS+2.0μM

Mediated BA+2.4μM

Root

Mediated BA+2.4μM

MS+2.4.4μM

Mediated Ba

Reaf

Reaf

マルチシュート

リーフ

修正ニッチ+1mg/l BA+0.1mg/l 2,4-D

カルス開始

Nitsch +0.5mg/l BA

シュート発生

Nitsch +1.0mg/l IBA+0.04% AC

根

192%MS+0.05mg/l BA+1.0% AC

1.05mg/l IBA+1.0% AC

192%MS+0.04% AC

Leaf

Leaf

カルス誘導

1/250mg/l NH4NO3+0.1mg/l 2,4-D+1mg/l BA

シュート再生

半製品+1mg/l IBA+0.1mg/l BA

根

葉, spadix

¼MS+1mg/l BAP

多芽

¼MS+1mg/l IBA

根

種子

MS+2mg/l BA+0.5mg/l。5mg/l NAA

カルス増殖

Petiol

MS+0.5mg/lBA+0.5mg/lBA

カルス増殖

MS+0.1mg/l 2,4-D+0.5mg/l BA

Callus

Shoot

1+0.2mg/l MFS+0.1mg/l、

Shoot+2,4-D+0.0mg/l、

Callus

Root

Anthuriumssp.

Leaf

1mg/l BA+0.08mg/l 2,4-D

カルス誘導

1mg/l BA

カルス増殖

1mg/lカルスMS +1mg/l BA

シュート再生

¼MS+1g/l AC

根

A．andreanumAndré cv.

葉、葉柄

修正ピエトリック培地+0.36μM 2,4-D+4.4μM BA

カルス

Anthurium andreaumcv Rubun

マイクロカット 発芽種子

MS+4.0μM

Calu+4.0μM

Calu+4.0μM

Microcut4μM BA+0.05μM NAA

マルチシュート

A.andreanumLind.

頂芽

MS+0.1mg/l NAA+0.25mg/l BAP

頂芽

MS+0.5mg/LBAP+0.5mg/LBAP

頂芽,多発芽

多芽

MS+0.5mg/l IAA+2g/l AC

根

半促成栽培

NWT+0.25mg/l 2,4-D +0.02mg/l NAA+1.5mg/l TDZ + 0.75mg/l BAP

Callus Shoot regeneration

NWT+ 0.2mg/l NAA+1.0mg/lKIN

Roots

A．andreanumLindl.cv.

Nodal segments

MS+4.44mM BAP+2.89mM GA3

Shoot induction

Lamina

1.11μM+BA+1.14μM IAA+0.46μM Kin

Shoot induction

MS+0.14μM IAA+0.46μM金

MS+0.16μM IAA+0.46μM Kin

多芽

MS+0.54μM+NAA+0.93μM Kin

根

¼MS+0.97μm KIN+0.93μm BA

Leaf

Callus

Callus+1.88μM BA+0.54μM NAA+0.46μM Kin

マルチプルシュート

½MS+0.54μM NAA

ルート

½MS+0.46μM Kin

ダブルシュート

80025mg/l 2,4-D+1mg/l BAP

出芽

葉、葉柄

1/23 MS+0.90μM 2,4-D+8.88μM BA

カルス誘導

MS+0.90μM 2,4-D+4.44μM BA

カルス増殖

MS+5.0μM

カルス増殖

カルス増殖

MS+5.71mM NAA

Roots

A.scherzerianum

Leaf

MS+0.1M

Loots/MS+1M

Leef+1M08mg/l 2,4-D+1mg/l BAP+1mg/l 2-iP

Callus

MS+0.5mg/l BAP

Shoots

A.scherzerianumSchott

Leaf

Modified MS+2.5 mM NH4NO3+18μM 2,4-D+6% sucrose

Embryo induction

表2.Schot(Schot)葉(Leef)・葉(Leaf)

アンスリウム品種の体外培養用培地成分(改変元)

アンスリウムの組織培養によく用いられるMS培地で、この培地のNO3-とNH4+は66：34であり、この比率は高い。 このため、Anthuriumの組織培養には一般的に改良されたMS培地が使用されている。 硝酸アンモニウム濃度の変更は、これまでにも多くの研究者によって研究されてきた。 Hamidah らは、2.5 mM の硝酸アンモニウムを含む半強度 MS 培地を試験管内ストック培養に使用した。 Puchooaはカルス培養に200 mg/Lの還元硝酸アンモニウム濃度を用いたが、再生には720 mg/Lに増量した。 Dufour と Guérin は異なる組成の NO3 と NH4 を用いて発育の結果を評価した。 彼らの結果によると、比率が 0.37 の場合、植物の成長および発育がより良好であった。 AtakとÇelikは、シュート再生にNH4NO3を250 mg/Lに下げた半強度MS塩を用いることを好んだ。 Winartoらはカルス誘導と植物再生のプロトコルを改良し、750 mg/l NH4NO3を含むNWT-3培地を用いた。

培養条件において、植物ホルモンと同様の生理活性を持つ合成化学物質を使用すると、植物の成長を望むように誘導することができる。 オーキシンとサイトカイニンは、植物組織培養において生長と形態形成を制御する最も重要なホルモンである。 これらのホルモンの併用により、カリー、細胞懸濁液の成長、根やシュートの発生が促進され、形態形成の制御が可能となる。 天然物以外に合成のオーキシンやサイトカイニンもある。 2,4-ジクロロフェノキシ酢酸、ナフタレン酢酸、ベンジルアミノプリン、カイネチンなどの植物成長調整剤の異なる組み合わせと濃度で、アンスリウム品種のさまざまな種類の摘出物からカルス形成を誘導することが可能であった。 予備的研究では、カルス誘導と再生、それに続くシュートと根の再生が全植物の組織培養の主要なステップである。 表2に示すように、アンスリウムの異なる品種の葉からカルスを誘導するために、2,4-DとBAを組み合わせた培地が頻繁に使用されている。 また，BAPや2-iPのカルス培地への添加についても，さまざまな研究者によって評価されている。 2,4-Dは0.08 mg/lから1 mg/lの濃度で使用されている。 BA濃度は0.08 mg/lから1 mg/lの間で変化している。1mg/lと1mg/lです。

微細化された植物は、外部の環境条件に抵抗するために発達した根系を必要とします。 新芽の発根はin vitroで行われる。 そのため、発根を促進するために必要な培地中の適切なオーキシンの種類と量を決定します。

活性炭は発根を促進するために培地に添加されます。 活性炭は炭素で構成され、ガスや溶存固形物を吸収するため、植物組織培養によく使用される。 成長調整剤ではありませんが、培地組成を修正する能力があります。

培養の種類によって、木炭の有利な使い方がいくつかあります。 培養組織から分泌された化合物の吸着、フェノール酸化の減少、形態形成に最適な培地のpH変化、不要なカルス成長の防止、根の形成を促進する能力から土壌条件のシミュレーション、培養条件での植物二次産物の生産に使用する能力である.

培地にACを使うことの最も大きな効果は植物成長調節剤と他の有機サプリメントの濃度を厳密に減少させることです。 ACは傷ついた組織でよく作られるフェノール類、IAA、NAA、IBA、BA、カイネチン、ゼアチンなどの植物ホルモンに対して大きな吸着能力を示す。 ACの吸着特性は，純度，pHおよび密度によって変化する。 図1