三龍平川煎じ薬のTh1/Th2バランス免疫応答誘導による抗喘息効果
- 要旨
- 2.材料と方法
- 2.1. 植物材料及び試薬
- 2.5. マウスへの感作、チャレンジ、治療
- 2.6. Lung Histopathology
- 2.7. 気管支肺胞洗浄液（BALF）の収集とフローサイトメトリー
- 2.8. 血清中の総IgE抗体の測定
- 2.10. Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR)
- 2.11. 統計解析
- 3.2. SLPCDは喘息マウスの気道炎症を抑制した
- 3.4. SLPCDによる喘息マウスの血清総IgE値の低下
- 3． SLPCDは喘息マウスのBALF中のサイトカインレベルを調節した
- 3.6. SLPCDは喘息マウスの肺組織におけるサイトカインのmRNA発現量を調節した
- 4.考察
- Conflicts of Interest
- Authors’ Contributions
- 謝辞
要旨
目的。 上龍平川煎じ薬（SLPCD）の抗喘息作用について検討し、その作用機序を探ること。 方法 OVA誘発アレルギー性喘息マウスの血清、気管支肺胞洗浄液（BALF）、肺組織を最終投与から24時間後に採取した。 肺の病理学的変化はH&E染色により観察した。 BALF中の炎症性細胞はフローサイトメトリーでカウントした。 血清中の総IgEとBALF中のサイトカインレベルをELISA法で測定した。 肺のサイトカインmRNAの発現量はqRT-PCRで測定した。 結果 SLPCDは、喘息マウスの気道炎症を有意に抑制し、BALFの炎症細胞を減少させ、血清中のtotal IgEとBALFのTh2サイトカイン（IL-10とIL-13）のレベルを低下させ、Th2サイトカイン（IL-4、IL-5、IL-10、IL-13）のmRNA発現レベルをダウンレギュレートすることができた。 しかし、SLPCDは、喘息マウスの肺において、BALF中のTh1サイトカインIFN-γのレベルを著しく上昇させ、Th1サイトカイン（IL-2およびIFN-γ）のmRNA発現レベルを上昇させた。 結論 SLPCDは、Th1/Th2反応をバランスよく誘導することにより、喘息マウスの気道炎症を抑制し、病態を緩和することができ、喘息の治療に有効な薬剤として作用する可能性がある。 はじめに
喘息は、気管支の過敏性、気道の炎症とリモデリング、気流閉塞、サイトカインや他のメディエーターによって誘導される異なる種類の炎症細胞の浸潤によって特徴づけられる複雑な慢性呼吸器疾患である 。 喘息は、遺伝的素因を持つ人がアレルゲン、ウイルス、職業的曝露などの環境要因によって引き起こされるが、その決定的な原因は不明である . 喘息の発症率は、特に幼児において世界的に著しく増加しており、最も一般的な呼吸器疾患の一つとなっています。 現在、喘息の治療には副腎皮質ホルモンが最も効果的な薬剤です。 これらの薬剤は喘息の症状を改善することができますが、この病気を治すことはできません。 また、これらの薬剤には、特に小児において、免疫抑制、二次感染、筋萎縮、骨減少、骨粗鬆症、白内障、緑内障などの深刻な副作用がある。 そのため、安全で有効な新薬を探し続けることが最も重要です。
多くの漢方薬は何世紀にもわたって喘息の治療に使われており、今でもアジア諸国では広く使用されています。 近年、アレルギー性喘息の治療に用いられる数多くの漢方製剤の作用機序が報告されています。 7579>
Sanglong pingchuan decoction (SLPCD) は、伝統的な中国医学の国家ベテラン医師であるスタジオメンター、紹興中医薬病院で教授Qing Changによって処方された病院製剤です。 SLPCDは、Shegan Mahuang Tangから足し算と引き算で導き出されたものです。 Shegan Mahuang Tang は Jin Kui Yao Lve で最初に述べられる有名な従来の中国の規定薬です。 散寒、外感、温肺、除痰、解喘の代表的処方として、喘息、小児気管支炎、気管支喘息、肺炎、高齢者の急性・慢性気管支炎、肺気腫、アレルギー性鼻炎の治療に広く使用されている。 SLPCDの処方は、表1に示す13種類の漢方薬から構成されています。 SLPCDは喘息の治療、特に増悪率の減少に有効であることが無作為化試験で証明されている。 しかし、SLPCDの有効性は対照実験によって証明されていない。
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植物名はそのHPのアクセスデータに触れてhttp://www.theplantlist.org確認済みです。
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本研究では、SLPCDの喘息治療への臨床応用のための実験的基盤を提供するため、OVA誘発アレルギー性喘息マウスモデルを用いて、その作用機序を探りました。 組織学的検査、気管支肺胞洗浄液（BALF）中の免疫細胞の計数、血清中の総IgE、BALF中のサイトカインの定量、および肺組織中のサイトカインのmRNA発現により、SLPCDの抗炎症作用を検討した。
2.材料と方法
2.1. 植物材料及び試薬
Cortex Mori（バッチ番号：140901）、Pheretima Aspergillum（バッチ番号：150406）、蜂蜜加工したHerba Ephedrae（バッチ番号：150302）、Rhizoma Belamcandae（バッチ番号: 141213）、Semen Armeniacae Amarum（バッチ番号：150312）、攪拌焼きFructus Perillae（バッチ番号：150115）、Scorpio（バッチ番号：150126）、Semen Descurainiae（バッチ番号: 150208）、Flos Farfarae（バッチ番号：150301）、Herba Houttyniae（バッチ番号：150327）、Rhizoma Fagopyri Dibotrydis（バッチ番号：150308）、Radix Angelicae Sinensis（バッチ番号: Radix et Rhizoma Glycyrrhizae（バッチ番号：140917）は、紹興中医薬病院から購入し、中国浙江省紹興市食品薬品管理研究所のYonghai Jiang教授によって認証されたものである。 クロロゲン酸とルチンの標準物質は、中国杭州の浙江食品薬物管理研究所から購入し、両方の化合物の純度は98％以上であった
Ovalbumin (OVA) は、米国ミズーリ州セントルイスのSigma-Aldrich Chemical Co. Ltd.、Hubei、China；マウスIgE ELISAキットはRayBiotech Inc.、Norcross、GA、USAから、牛胎児血清（FCS）はGibco, Grand Island, NY, USAから、それぞれ購入した。 精製抗マウスCD16／CD32（Fcレセプターブロック）、Ly-6G-FITC（クローン：RB6-8C5）、F4／80抗原PE-Cy5（クローン：BM8）、Ly-6C-APC（クローン：HK1．4）、Fcイプシロンレセプター1アルファ（FceR1）-APC（クローン：MAR-1）、CD117（c-Kit）-PE-Cy5（c-Kit、クローン：2B8）、及びsiglec-F-PE（クローン：E50-2440）抗体はeBioscience、Inc.から購入されたものである。 San Diego, CA, USAから購入した。 Trizol試薬はInvitrogen, Carlsbad, CA, USAから購入した；revert Aid™ M-MLV逆転写酵素はFermentas, Amherst, NY, USAから、ribonuclease inhibitorとOligo(dT)18はSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd., Chinaから、FastStart Universal SYBR Green Master (ROX) はRoche Diagnostics, Indianapolis, IN, USAから、入手した。 水酸化アルミニウムゲル（Alum）は中国、北京の中国畜産工業有限公司から購入した；デキサメタゾン（Dex）は中国、襄陽の湖北天洋医薬有限公司から購入した＜7579＞＜9599＞2.2． SLPCDの調製
SLPCDの処方薬（440g）を蒸留水8アリコートで30分間浸漬した後、1時間水煮し、最初の煎じ汁の後、かすを蒸留水6アリコートでさらに30分間水煮した。 回の煎じ薬から得られた上澄みを滅菌ガーゼで濾過し、65℃で減圧下にロタバポール（Buchi、スイス）により濃縮し、最終濃度が1.1g粗薬/mlとなるようにした。 濃縮煎じ薬は-20℃で保存し、その後蒸留水で数種類の濃度に希釈してから使用した＜7579＞＜9599＞2.3. SLPCDの高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析
HPLC 分析は、Water 600E HPLC 装置に Diamon C18 カラム（250 mm × 5 mm、5 μm）および Waters 2996 PDA 検出を使用して実施した。 移動相はアセトニトリル（A）と0.1%リン酸（B）の混合溶媒とした。 リニアグラジェント溶出は以下のように行った。 2%Aで0-8分、6%Aで8-35分、8%Aで35-40分、13%Aで40-45分、14%Aで45-70分、17%Aで70-80分、17-2%Aで80-90分であった。 カラム温度は常に30℃に保たれた。 標準品（クロロゲン酸、ルチン）および試料のHPLC分析は、上記のように設定した実験条件下で実施した。 実験動物
5週齢の雌のBALB/cマウスを中国上海の中国科学院上海実験動物センターから購入した（証明書番号SCXK 2007-0005）。 マウスは使用前に1週間馴化させた。 ネズミ用実験飼料と水道水をアドリブで提供し、温度24±1℃、湿度50±10％、明暗周期12/12hの制御された条件下で維持した。 すべての手順は、実験動物の使用とケアに関する中国の法律と浙江大学実験動物研究所によって確立されたガイドラインに厳密に準拠し、大学の動物実験委員会によって承認された
2.5. マウスへの感作、チャレンジ、治療
雌のBALB/cマウスは、正常対照群（NC）、モデル対照群（MC）、陽性対照群（Dex、2 mg/kgで治療）、SLPCD群（5.5、11、22 g/kg）の6群に分けられた。 各群は10匹のマウスで構成された。 マウスの気道炎症はOVAによって誘発された。 動物は、50μgのOVAと200μgの水酸化アルミニウムを含む溶液を3日間腹腔内注射することによって免疫された。 14日目にブースティング感作を行った。 最後の感作の1週間後、マウスをPARI TurboBOY N（1205）ネブライザー（PARI GmbH、ドイツ）を用いてエアロゾル化した2％OVAに1日1時間、8日間曝露した。 感作されたマウスは、曝露の4日前に、SLPCDを5.5、11、22g/kgの用量で経口投与するか、デキサメタゾン（Dex）を2mg/kgで12日間毎日腹腔内投与された。 モデル対照群には、同量の生理食塩水を投与した。 投与量は0.2ml/10g体重であった。 正常対照群としての10匹のマウスは、感作のみ行い、生理食塩水でチャレンジした。 OVA感作およびチャレンジに採用した手順、ならびにSLPCDによる治療を図1に示した。
2.6. Lung Histopathology
肺組織は最終投与から24時間後に採取し、4％パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに埋め込んで、5μmの厚さで切片を作成した。 一連の微小切片をヘマトキシリン・エオジン（H&E）で染色し、組織学的評価を行った
2.7. 気管支肺胞洗浄液（BALF）の収集とフローサイトメトリー
BALF は、最後の投与の 24 時間後に気管内カテーテルから供給されるリン酸緩衝液（PBS）で肺を洗浄することにより収集された。 BALFは5分間遠心分離し、細胞を2%FCSを含む氷冷PBSで洗浄した。 細胞を0.5μgの精製抗マウスCD16/CD32（FcRブロック）抗体で氷上10分間ブロックして非特異的染色を抑制した後、室温暗所で抗マウスLy-6G-FITC、F4/80抗原PE-Cy5およびLy-6C-APC、またはFceR1-APC、CD117-FITCおよびSiglec-F-PE抗体を組み合わせて30分着色した。 染色された細胞は氷冷したPBSで洗浄し、PBSに再懸濁した。 1処理あたり10万個の生細胞をBD FACScanフローサイトメーターでCellQuestソフトウェアを用いて解析した
2.8. 血清中の総IgE抗体の測定
最後の投与から24時間後に血清を採取した。 血清中のtotal IgE抗体はRayBio® mouse IgE ELISA kitで検出した。 1:1250 に希釈した血清検体または IgE 標準物質を、抗マウス IgE 抗体をコートした 96-well プレートに添加しました。 プレートは室温で 2.5 時間インキュベートした後、4 回洗浄した。 検出用抗体を各ウェルに添加した。 プレートを室温で1時間インキュベートした後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ABCを添加した。 45分間インキュベートした後、プレートを洗浄し、TMBで30分間室温で現像した。 反応は20μlの停止液の添加により停止した。 ELISAリーダー（BIO-RAD 680）にて450 nmの吸光度を測定した。 BALF中のサイトカイン測定
BALF中のTh2（IL-4、IL-5、IL-10、IL-13）およびTh1（IFN-γ、IL-2）サイトカイン濃度は、従来通り市販のELISAキットを用いて検出した
2.10. Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR)
肺組織におけるTh2 (IL-4, IL-5, IL-10, IL-13) およびTh1 (IFN-γ, IL-2) サイトカインのmRNA発現量をqRT-PCRを用いて測定した。 ホモジナイズした肺組織から、Trizol 試薬を用いて製造元のプロトコールに従って total RNA を単離し、前述と同様に逆転写を行った . その後、FastStart Universal SYBR Green Masterを用い、20μlの反応で増幅を行った。 Real-time PCRはABI 7400 Real-Time PCR Systemを使用して行った。 qRT-PCR 用プライマーは Sangon Biotech (Shanghai) Co, Ltd.で合成した。 (中国)で合成し、その配列を表2に示した。 qPCRサイクルは次のように行った：95℃での初期変性10分、95℃での変性10秒、60℃でのアニーリング1分を40サイクル。 GAPDHは内因性コントロールとして使用した。 プライマーの増幅効率と特異性は、各プライマーセットについて確認した。 GAPDHに対する被検遺伝子の発現量を、本法により測定し、fold inductionとした。
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2.11. 統計解析
データは平均値±標準偏差（SD）で表し、ANOVAとTukeyポストホックテストでその統計的差異の有意性を調べた。 -0.05未満を統計的に有意とした。 SLPCDのHPLCプロファイル
SLPCD中のクロロゲン酸およびルチンの含有量をHPLCで分析した結果、クロロゲン酸およびルチンの含有量が多いことがわかりました。 標準物質と比較し、クロロゲン酸およびルチンを同定・定量した（図2）。 標準物質の検量線からの回帰式はクロロゲン酸がA = 3719.7C – 102166 (R2=0.9999), ルチンがA = 9137.3C – 408038 (R2=0.9996) となりました。 SLPCD中のクロロゲン酸およびルチンの濃度は、それぞれ1.4 mg/gおよび0.15 mg/gであった。
(a)
(b)
(b)
3.2. SLPCDは喘息マウスの気道炎症を抑制した
OVA誘発喘息マウスの肺炎症に対するSLPCDの効果をH&E染色により観察し、その結果を図3に示した。 喘息モデルマウスは正常コントロールマウスと比較して、肺の間質性、気管支周囲、血管周囲の炎症細胞浸潤がより深刻であった。 ポジティブコントロールとして、Dexは喘息マウスの肺の間質性、気管支周囲、血管周囲の炎症細胞の浸潤を有意に緩和させた。 OVA チャレンジマウスの肺の炎症浸潤も、モデルコントロールと比較して、SLPCD によって有意に減弱された。
(a)
(b)
(c)
を参照。
(d)
(e)
(f)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
OVA誘発喘息マウスの肺への炎症細胞の浸潤に対するSLPCDの効果を確認するために、SLPCDは喘息マウスの肺への炎症細胞を減少させた。 BALF中の好酸球（Sigilec F+）、好塩基球（CD117+）、好中球（Ly-6C+y-6）、マクロファージ（F4/）、単球（Ly6G-Ly6C+）およびマスト細胞（FcER1+）などの炎症細胞の数をフローサイトメーターで測定した。 図4に示すように、喘息マウスのBALF中の好酸球（1756倍）、マクロファージ（114倍）、好中球（110倍）、好塩基球（91.7倍）、単球（45.8倍）およびマスト細胞（6.9倍）は正常コントロールマウスと比較して顕著に上昇した。 Dexは、喘息マウスのBALFでテストした様々な炎症細胞の数を著しく減少させ（）、正常マウスのレベルにほぼ近づいた。 喘息マウスのBALF中のこれらの炎症細胞の数は、モデル対照群（、、、）と比較してSLPCDによって有意に用量依存的に減少した。
3.4. SLPCDによる喘息マウスの血清総IgE値の低下
SLPCDによる喘息マウスの血清総IgE値への影響を図5に示した。 喘息マウスの血清総IgE抗体量は正常対照マウスのそれよりも有意に高かった()。 陽性薬物として、DexはOVA誘発喘息マウスの血清総IgE抗体濃度を有意に低下させた()。 喘息マウスの血清総IgE抗体レベルは、モデルコントロール群と比較して、SLPCDによって有意に用量依存的に減少した()。
3． SLPCDは喘息マウスのBALF中のサイトカインレベルを調節した
BALF中のTh2サイトカイン（IL-4, IL-5, IL-10, IL-13）およびTh1サイトカイン（IFN-γおよびIL-2）レベルをELISA法により測定した。 図6に示すように、OVAチャレンジにより、喘息マウスのBALF中のIL-10およびIL-13のレベルは、正常対照群（または）と比較して有意に増加し、IFN-γのレベルが減少した。 しかし、モデルコントロールのマウスのBALF中のIL-4、IL-5、IL-2の含有量は非常に低く、検出限界に近いことが分かった。 SLPCDの3用量とDexの投与は、OVA誘発喘息マウスのBALF中のIL-13とIL-10を有意に減少させ、IFN-γのレベルをモデル対照マウス（または）と比較して顕著に上昇させた(図6)。
3.6. SLPCDは喘息マウスの肺組織におけるサイトカインのmRNA発現量を調節した
OVA誘発喘息マウスの肺組織におけるTh1およびTh2型サイトカインのmRNA発現量に対するSLPCDの効果をqRT-PCRを用いて検出し、その結果を表3に示す． 正常対照マウスと比較して、喘息マウスの肺組織では、Th2サイトカインmRNA（IL-4、IL-5、IL-10、IL-13）の発現量が著しく上昇し、Th1サイトカインmRNA（IL-2、IFN-γ）の発現量が著しく低下した（P＜6210＞0.001）。 SLPCDの3用量とDexの投与により，喘息モデルマウスと比較して，肺組織におけるTh2サイトカインIL-4，IL-5，IL-10，IL-13のmRNA発現量が有意に低下し，Th1サイトカインIL-2とIFN-γの発現量が上昇した（P < 0.05, P < 0.01, or P < 0.001）．
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最終投与24時間後に肺組織を採取し、GAPDHとサイトカインのmRNA発現量を特異プライマーでqRT-PCRにより検出した。 ハウスキーピング遺伝子GAPDHは内因性コントロールとして使用した。 数値は平均値±SD（）で示した。 喘息モデル対照群（MC）と比較して有意差があるものを、 、 、 、とした。 Dex：デキサメタゾン（陽性対照）、NC：正常対照群。
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4.考察
喘息は世界的に、特に先進国で公衆衛生上の問題になっている 。 グルココルチコイドは喘息の治療とコントロールのための第一線の治療法である。 これらの薬剤は喘息症状を改善することができるが、重大な副作用があるため、持続的な使用は厳しく制限されていた . したがって、新しい喘息治療アプローチが必要である。 多くの漢方薬は、抗菌作用、抗真菌作用、抗炎症作用、抗アナフィラキシー作用、免疫調節作用など様々な生物活性を示し、喘息治療への可能性を持っています。 実験用マウスにおけるアレルギー性気管支肺炎の様々なモデルが報告されている。 OVA誘発アレルギー性喘息マウスモデルは、ヒトの喘息の多くの特徴を再現しており、広く受け入れられています 。 そこで、このモデルを用いて、SLPCDの抗喘息作用を調べ、その分子メカニズムを探りました。 Cortex Mori、Pheretima Aspergillum、Herba Ephedraeが主成分で、肺を分散させ喘息を緩和させる。 Semen Armeniacae Amarum, stir-baked Fructus Perillae, Semen Descurainiae, and honey-fried Flos Farfaraeは、痰を減らし、咳を止め、喘息を改善する補助的な成分である。 補助成分として、熱邪を払い、表邪を追い出すRhizoma Belamcandae, Herba Houttyniae, Rhizoma Fagopyri Dibotrydisや、瘀血を散らし、副子を浚い、痙攣させ、喘息を止めるSculopioやRadix Angelicae Sinensisがある。 Radix et Rhizoma Glycyrrhizaeはすべての薬物を調和させる。 このように、すべての成分が互いに補い合い、肺を分散させ、気を下降させ、咳や喘息を緩和させるという成果を上げているのです。 本研究で使用したSLPCDの品質管理はHPLCを用いて行われ、2つの参照化学物質（クロロゲン酸とルチン）が主要な指標成分として同定された（図2）。
アレルギー性喘息は、好酸球の動員、杯細胞の過形成、粘液の過剰分泌、コラーゲン堆積、平滑筋細胞の過度増殖、上皮下の線維化といった特徴を持つ気道急性・慢性炎症疾患と定義されます . 本研究では、OVA チャレンジ喘息マウスの肺の炎症に対する SLPCD 処置の効果を、H&E 染色により評価した。 喘息モデルマウスの肺組織では、典型的なアレルギー性の蓄積と炎症細胞の浸潤が観察された。 SLPCDの投与により、喘息モデルマウスの肺組織における炎症性浸潤が減少したことから（図3）、SLPCDが気道炎症を顕著に緩和することが示唆されました。
喘息の発症と重症化には、炎症性免疫細胞が重要な役割を担っています。 局所リンパ節から気道に動員された炎症性細胞は、サイトカインやケモカインを分泌して、気道の過敏性をもたらす可能性があります。 気道の炎症細胞を減少させることは、喘息の治療に有効である。 SLPCDが炎症細胞の浸潤を抑制することを確認するため、さらにBALF中の好酸球、マクロファージ、好中球、好塩基球、単球、マスト細胞の数をカウントしたところ、SLPCDは炎症細胞の浸潤を抑制していた。 OVA吸入により、BALF中のこれら6種類の炎症細胞の数は有意に増加した（図4）。 増加倍率は、好酸球、マクロファージ、好中球、好塩基球、単球、マスト細胞でそれぞれ1756、114、110、91.7、45.8、6.9倍で、この試験で増悪喘息モデルが十分に構築されたことが示されました。 SLPCDを投与すると、喘息マウスと比較して、BALF中のこれらの炎症細胞、特に好酸球の数が有意に、かつ用量依存的に減少した（図4）。 これらの結果は、SLPCDがOVA誘発喘息マウスの肺への炎症細胞の浸潤を抑制していることを示唆しており、病理組織学的観察結果とも一致している。 Coyleらは、抗IgE抗体が喘息モデルマウスの好酸球性気道炎症と気管支過敏症を減弱させることを報告した。 アレルゲンによって誘導されたIgEは、好酸球、好塩基球、マスト細胞にサイトカインIL-4, IL-5, IL-10, IL-13を分泌させる。 そこで、血清総 IgE 濃度を評価したところ、SLPCD は OVA チャレンジ喘息マウスの血清総 IgE 濃度を有意に低下させることがわかりました（図 5）。
喘息は Th1/Th2 細胞のアンバランスが免疫学的原因であると考えられています． 喘息では、Th1細胞の活性が低下し、Th2細胞の活性が活性化するため、Th2型サイトカインが増加し、Th1型サイトカインが減少する． 肺に移動したTh2細胞は、代表的なTh2型サイトカインであるIL-4、IL-5、IL-13を分泌し、気道の杯細胞過形成、気管支収縮、好酸球増多を引き起こす . In vitroでは、IL-13はIgEの産生を仲介し、IgEを介したアレルギー疾患の発症に重要な役割を果たすと考えられている . また、IL-13は好酸球の生存を促進し、喘息における好酸球の病的活動に寄与することができる。 IL-13 を過剰発現させたマウスは、肺好酸球増多、上皮過形成、気道閉塞、コリン作動性物質への過敏反応など、喘息のいくつかの特徴を再現する。
Th2 サイトカインの生産を抑制することは、アレルゲン免疫療法に有用であることがわかった。 一方、Th1活性化細胞は、喘息性気道の炎症を抑制することができる。 IFN-γなどのTh1サイトカインは、喘息モデルの肺組織において、GATA-3、IL-4、IL-5の発現を低下させることにより、アレルゲンによる好酸球の動員やIgEの放出を抑制する 。 本研究では、SLPCDが喘息マウスのBALF中のサイトカインレベルに及ぼす影響を評価した。 その結果、SLPCD は用量依存的に IL-13 と IL-10 のレベルを低下させるだけでなく、喘息マウスの BALF 中の IFN-γ のレベルを上昇させることがわかった（図 6）。 SLPCDのTh2サイトカイン産生抑制作用は、血清中の総IgE量に対する作用と一致した。
IL-5は好酸球の増殖、分化、成熟、組織部位への移動に重要な役割を果たすと報告された。 喘息患者の気管支生検におけるIL-5 mRNAの発現レベルは、非喘息患者のコントロールと比較して上昇した。 IL-5 の mRNA 発現レベルは、喘息の臨床的重症度と相関していた。 累積的なアレルゲン誘発は、BALF細胞、末梢CD4+およびCD8+ T細胞におけるIL-4 mRNAの発現を上昇させた。 IL-10 もまた、喘息に関与することが示唆されている。 低用量アレルゲン暴露後の軽症喘息患者のBAL細胞におけるIL-13転写物のアップレギュレーションは、気管支粘膜におけるIL-13 mRNAの高い発現レベルと一致する。 さらに、喘息マウスの肺組織におけるサイトカインのmRNA発現量に対するSLPCD処理の影響をqRT-PCRを用いて検討したところ、SLPCD処理により、喘息マウスの肺組織におけるサイトカインのmRNA発現量は減少した。 SLPCDは、喘息マウスの肺組織において、Th2サイトカイン（IL-4、IL-5、IL-10、IL-13）のmRNA発現レベルを有意に低下させ、Th1サイトカイン（IL-2、IFN-γ）の発現レベルを上昇させることが明らかとなった。 これらの結果は、喘息マウスの肺組織におけるTh1およびTh2サイトカイン反応に対するSLPCD処理の調節効果をさらに確認した。
結論として、SLPCDは気道炎症を著しく抑制し、BALFの炎症細胞を減らし、血清総IgEレベルを低下させ、BALF中のサイトカインの内容および喘息マウスの肺のサイトカインのmRNA発現を調節する可能性があった。 これらの結果は、SLPCDが喘息モデルマウスにおいて、バランスのとれたTh1/Th2反応を誘導することにより、気道の炎症を抑制し、病態を緩和することを示唆し、喘息治療における有効な薬剤として臨床利用することを検証するものです。 7579>
Conflicts of Interest
The authors declare that is no conflicts of interest.
Authors’ Contributions
Binnian Zhu and Jun Dong is equally contributed to this research work.この研究は、Binnian ZhuとJun Dongの二人が同等に貢献したものである。
謝辞
この研究は、紹興科学技術プロジェクトの科研費（番号2014B700722）の支援を受けたものである。