Albino Rat

In adult albino rats (Ortín-Martínez et al.2015; Salinas-Navarro et al.2010; Schnebelen et al.2009; Valiente-Soriano et al.2015b) as well in adult albino (Cuenca et al.2010; Salinas-Navarro et al.,2015。 2009c）及び色素性（Valiente-Sorianoら、2015a）マウスにおいて、OHTは、最初の2週間以内に、動物処理の1週間前に両方のSCiに逆行性トレーサーFG又はOHStを適用した左（レーザー照射）網膜で同定されるRGC集団の約80％の損失をもたらした。 これらの網膜には、逆行性標識RGCがほとんどなく、網膜周辺に基部、視蓋に頂点を持つパイ型セクターの形状をした領域があり、これらの領域は網膜背部に多く、大きさも小さなセクターから網膜1～数象限に及ぶものまで様々であった。 一方、右側の網膜（レーザー処理をしていない対照）では、既報の通り、視覚筋に最も高い密度を持つRGC（Brn3aで逆行性標識または免疫染色）が、網膜背部の鼻側頭軸に沿って、超側頭象限でピークを示す正常な分布を示していた（Nadal-Nicolás et al, 2009, 2012, 2014, 2015; Ortín-Martínez et al., 2010, 2014; Salinas-Navarro et al., 2009a,b)と同様である。 等密度マップの構築により、これらのOHT網膜における生存RGCのトポロジー分布を詳細に調べることができました（図2-4、6、8）。 網膜障害の重症度にはばらつきがあり、これは当研究所（Vidal-Sanz et al.、2012）や他の研究室（Fu and Sretavan、2010；Levkovitch-Verbin et al.、2002）からの過去の報告と一致する。 さらに、実験的緑内障の遺伝性色素性マウスモデルであるDBA/2Jマウスにおいても、変性の程度にばらつきがあることが報告されている（Filippopoulosら、2006；Howellら、2007；Jakobsら、2005；Pérez de Laraら、2014；Schlampら、2006；Sotoら、2008）。 このセクターごとの損失に加え、等密度マップでは、生存しているRGCを示す網膜領域内でも、びまん性の損失があることが明らかになった。 この網膜変性量は、動物処理の1週間前にSCiに塗布した逆行性トレーサーで標識したRGCの定量に基づくものであった。 デキストランテトラメチルローダミン（DTMR）（眼窩切断したONの眼球切片に塗布すると、細胞体に向かって受動的に拡散するトレーサー）またはBrn3a免疫染色でRGCの生存集団を確認したところ、同じ網膜で追跡したRGC数とDTMR+RGCまたはBrn3a+RGC数との間には明らかな不一致があった。 Brn3a+RGCの数は、LP後の初期には追跡したRGCの数より有意に多かったが、5週間以上の生存間隔ではそうではなかった。これは、OHT後の初期には、生存するRGCの大きな集団が、活発な逆行軸索輸送を失っていることを示す（Agudo-Barriuso et al, このような変化は、以前にも他のタイプの網膜またはON損傷後に観察されている（Lafuente López-Herrera et al, 2002; McKerracher et al, 1990）。 しかし、LP後1週間から5週間の間に、Brn3a+RGCの数は著しく減少し、LP後1週間から5週間の間にRGCの損失が進行していることが示された

Figure 2. 眼圧は同所的な網膜神経節細胞の喪失を誘発する。 逆行性に追跡した同所性（oRGC）（A、C、E）および変位した（dRGC）（A′、C′、E′）、ならびにBrn3a＋oRGC（B、D.）の分布を示す3つの代表的網膜の地図（1行につき1つ）。 ナイーブラット（1列目）または実験ラット（2列目、3列目）において、眼圧上昇を誘発するために辺縁と上強膜血管をレーザー光照射した3週間後にBrn3a+dRGC（B′, D′, F′）. 等密度マップ（C-F）とそれに対応する近傍マップ（C′-F′）は、oRGCとdRGC（FGトレースとBrn3a+）間の平行なトポロジー損失を示し、これは視神経頭部レベルで生じた軸索圧縮と一致している。 各マップの下部には、RGCまたはdRGCの数が表示されている。 (B)右下は等密度マップ、(A)は近傍マップのカラー（印刷版では異なるグレー）スケール。 右目、左目、背側、腹側、鼻側、側頭。 (A)のスケールバー＝1mm。

図3. OHT後の損失はGCLのRGCに選択的である。 レーザー光照射で近縁静脈と上強膜静脈の15日後にBrn3aを免疫反応させ（A），神経節細胞層のDAPIで染色した代表的な実験網膜からの等密度マップ（B）。 Brn3a等密度マップは、LP誘発OHTの15日後の実験網膜において、RGCを欠く典型的なパイ型の網膜セクターを示す。 同じ網膜では、Brn3a+RGCを欠く領域で多数のDAPI染色核を示し、DAPI等密度マップに反映されている(B)。 各マップの下：その網膜でカウントされた細胞数。 AとBの右下の密度色（印刷版では異なるグレーシェード）のスケールは、それぞれ0（紫（印刷版では黒））から3500RGC/mm2以上または5000DAPI+核（赤（印刷版ではグレー））以上である。 (C-E）Brn3+RGC（C）、カレチニン+ニューロン（D）、およびDAPI+核（E）を示すA、Bの挿入図からの高出力顕微鏡写真で、Brn3a+RGCの数が減少した網膜セクターでは、多数のDAPI+核（E）があり、その多くはGCL内のアマクリン細胞（カレチニン+ニューロン、D）の位置を変えたことが説明されている。 LEは左目、Dは背側、Vは腹側、Nは鼻側、Tは側頭。 (A)と(B)のスケールバー＝1mm。 4287>

図4. 眼圧の高い網膜における網膜血管の正常な外観。 (A, A′) 動物処理の1週間前に両上丘に塗布したフルオロゴールド（FG）で逆行性標識したナイーブ網膜とその対応する等密度マップ。 (B) RECA1抗体で免疫染色した網膜血管の白黒ホールマウント網膜再構成図。 (C、D）FG＋RGC（白）、Brn3a＋RGC（赤（印刷版では黒））、RECA1＋血管（緑（印刷版では灰））を示す背側（C）および頭側（D）象限から採取した網膜（A）の詳細。 ナイーブな網膜では、有能な逆行性軸索輸送（RAT）があり、免疫染色された網膜血管は正常に見える。 眼圧の高い網膜では、8時から5時までの広い範囲にわたって、網膜背部のRATが典型的に失われている（E-E′）。 網膜血管は、白黒表示（F）では正常で、コントロールのナイーブ網膜と形態的に類似しているように見える。 これらは、RATのない領域（G）またはRATのある領域（H）から採取した拡大図でも観察される。 Dは背側、Vは腹側、Tは側頭部、Nは鼻側である

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