NanoHybrids – Antibody Conjugation for Gold Nanoparticles

Antibody conjugated gold nanoparticle probes allows study and visualization of cellular and molecular processes in vitro and in vivo; a critical tool for both basic science researchers and clinicians.
多くの研究者が、これらの結合を自分で合成するのに、成功の程度はさまざまでも結果が一定でなく、過度の時間やエネルギーを使っています。 多くの研究者は、独自にコンジュゲーションを行う際に、抗体と粒子の接着が一定せず、細胞の標識効率が再現できないことに悩んでいます。
(1) 粒子と抗体の間に安定した結合を形成すること、および
(2) 抗体結合の適切な特性評価の両方が必要です。 以下のスキームは、抗体コンジュゲーションのいくつかの異なる方法を示しています。

How to conjugate antibodies to gold nanoparticles - Methods
物理吸着法は、最も安定性に欠ける方法です。 これは、アミンやチオールなどのタンパク質上の特定の官能基が、非共有結合相互作用を介して粒子表面に引き寄せられる親和性に依存するものである。 生体内環境、あるいは細胞培地中では、物理吸着された抗体は簡単に移動してしまう。
したがって、共有結合法は最も広く用いられている方法である。 金ナノ粒子と抗体の間に安定した結合をもたらし、N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)と1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)の結合など、いくつかの異なる化学物質を採用することが可能である。 しかし、この方法では安定した付着が得られるものの、特性評価を行う必要があります。

Directional Conjugation for Better Efficiency

抗体結合金ナノ粒子の特性評価では通常、蛍光標識した抗体結合粒子の蛍光測定値を既知の蛍光標識抗体標準と比較し、粒子に対する抗体の割合を推定することが必要です。 しかし、金属ナノ粒子表面で蛍光色素が消光するため、測定自体が複雑化する可能性がある。 さらに、研究者は、フルオロフォア結合抗体とその標準物質を準備しなければなりません。
ナノハイブリッドでは、これらの問題の多くを軽減する方向性結合法を採用することができます。 もう一方の端は金ナノ粒子表面に直接結合し、抗体と粒子の間に方向性のある結合を与える。
方向性を持った結合により、抗体と粒子の比率がより安定化し、細胞の標識効率や分子標的性も向上します。 方向性のある付着方法を用いると、非方向性の付着方法と比較して、標識効率が7~10倍向上する可能性があります。

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