alchemilla vulgaris の血管弛緩作用と血圧降下作用。 メタノール抽出物と水抽出物の比較検討 | RegTech

DISCUSSION

近年、薬物の無効性、有効性、耐性、副作用などの問題から、代替療法に関心が高まっている。 その中で、特にポリフェノールや血管作動性フラボノイドを豊富に含む薬用植物の疾患に対する有効性に注目が集まっている。 その結果、ポリフェノール化合物やフラボノイドを食事に取り入れると、心臓血管系疾患のリスクが減少することが明らかになりました。 さらに、いくつかの実験的研究において、抗酸化作用、抗炎症作用、血管弛緩作用、血圧低下作用の観点から、ポリフェノール化合物およびフラボノイドの好ましい効果が実証されています。 薬用植物の薬理効果を調べる研究では、一般的に異なる抽出方法で調製された液体エキスが使用されています。 植物抽出物中に含まれる血管作動性化合物の成分やその量は、抽出方法によって異なる可能性があるため、同じ薬草の抽出物でも処理方法の異なる2つの抽出物の薬理作用を正確に評価することが重要である。 本研究では、A. vulgaris paralellyのメタノールおよび水性抽出物の効果について、ラットを用いたin vitroおよびin vivo実験（分離微小血管および収縮期血圧への影響）により検討した。 我々は、A. vulgarisのメタノール抽出物は、PGF2αまたはK+で前収縮したラット腸間膜動脈に顕著な血管弛緩反応を引き起こすが、水性抽出物は血管緊張を高めるために使用した収縮剤によって対照的な効果を引き起こすことを見いだした（2）PGF2α前収縮腸間膜動脈では、A. vulgarisのメタノールおよび水性抽出物で得られた緩和反応は、血管の緊張を高めるために使用した収縮剤によって対照的な効果を引き起こす。 3）メタノールおよび水性抽出物のスパスモゲンに対する収縮反応性に対する試験管内前処理効果は、ラット腸間膜動脈に対する直接的な影響を補強するものであった（4）メタノール抽出物（10 mg/ml）の2週間の経口投与はL-NAME高血圧ラットの血圧上昇を抑制したが、水性抽出物（10 mg/ml）は目立った効果を有さないことが明らかになった。

PGF2αとK+は異なる細胞メカニズムで作用するスパストーゲンである。 PGF2αは主に受容体作動型カルシウムチャネルの活性化により動脈を収縮させるが、K+は血管平滑筋細胞膜の脱分極によりCa+2の流入をもたらし収縮を誘導する。 その結果、A. vulgarisのメタノール抽出物と水抽出物は、受容体作動型スパスモーゲンを介した収縮に対して、同様の弛緩反応を示すことが明らかとなった。 しかし，受容体非依存性のスパスモーゲンを用いて単離腸間膜動脈を収縮させた場合には，弛緩と収縮という点で対照的な効果が得られた． 実際、この抽出物の多様な直接的効果は、前処理実験で得られた知見と裏付けされていた。 このように、急性血管作用と並行して、ラット腸間膜動脈をメタノールまたは水性抽出物（10 mg/ml、20分）で前処理すると、PGF2αに対する最大収縮反応が著しく減少したが、K+に対する血管反応に対しては反対の効果が観察された。 3077>

ラット腸間膜動脈におけるA. vulgarisのメタノールおよび水性抽出物による反応の違いは，抽出物のフェノール組成の違いと関連している可能性がある． A. vulgarisの液体抽出物には，ケルセチン誘導体と没食子酸からなるフラボノイド配糖体が含まれていることが以前に示されている。 それを裏付けるように、我々の最近の研究でも、A. vulgarisのフラボノイド量は水性抽出物よりもメタノール抽出物の方がはるかに多く、HPLC-DADで分析したところ、どちらの抽出物にも主要な血管作動性成分としてケルセチンと没食子酸が含まれていることが判明した。 これらの成分のうち、ケルセチンは弛緩を、没食子酸はラット大動脈の収縮を誘導することが報告されている。 これらのデータは、今回我々がラット腸間膜動脈で得た知見を支持するものである。 このように、水性抽出物はメタノール抽出物に比べて没食子酸の含量が非常に高いことが、腸間膜動脈における収縮反応を媒介するメカニズムの一つである可能性が示唆された。 興味深いことに、特にK+前収縮動脈において、両抽出物の相反する血管作用が明らかとなった。 従って、水性抽出物中のフラボノイドの血管活性は、高K+存在下では低下するか消失する可能性がある。 その上、メタノール抽出物に対する最大弛緩反応は、PGF2α収縮動脈に比べ、K+前収縮腸間膜動脈で著しく減少することにも気がついた。 これまで、ケルセチンを含むいくつかのフラボノイドの血管弛緩作用は、K+収縮したラット大動脈輪では、フェニレフリンによる収縮に対して顕著な弛緩作用を示すのに反して、弱いか無視できる程度であることが報告されている。 そこで、ケルセチンについては、C-5が-OHで置換されていることにより、非受容体作動性スパスモゲン（K+）に比べ、受容体作動性スパスモゲンに対する選択性が高くなることが示唆された。 このことは、ケルセチンを主要フラボノイドとして含むメタノール抽出物が、PGF2αとK+の前収縮した腸間膜動脈で弛緩反応に差が生じたことを支持すると思われる。 水性抽出物については、前述のケルセチンの高K+存在下での効果の低さに加えて、没食子酸の含有量が多いことが、K+前収縮腸間膜動脈における収縮効果を説明していると思われる。 さらに、K+チャネルの開口部を介して作用する血管作動性物質の弛緩作用は、高K+収縮時には著しく減弱することも知られている。 K+収縮した動脈において、メタノール抽出物および水抽出物の弛緩作用がそれぞれ低下または消失したことは、その作用機序にK+チャネル活性化が関与している可能性を示唆しており、今後の検討が必要である。 本研究では、抽出物の血管作用における内皮の役割の可能性を検証した。 ラット腸間膜動脈において、内皮の推定阻害剤であるL-NOARG、ODQおよびインドメタシンの存在下で、メタノールおよび水性抽出物に対する弛緩反応に変化はなかった。 内皮を除去した腸間膜動脈で得られた結果も平行していた。 これらの結果から，A. vulgarisのメタノールおよび水性抽出物は，内皮血管拡張物質であるNOおよびプロスタサイクリンが，腸間膜動脈における急性弛緩作用に関与していない可能性が示唆された。 フラボノイドの弛緩作用は、内皮依存的あるいは独立的なメカニズムで作用することが報告されている。 両抽出物に含まれるケルセチンは、単離抵抗性腸間膜血管床の内皮非依存性弛緩を誘導することが示された。 さらに、ケルセチンを含むいくつかのフラボノイドの血管弛緩作用は、K+チャネルブロッカーの存在下で阻害されることが報告されている。 3077>

L-NAME誘発高血圧ラットにおいて、A. vulgaris長期投与による血圧上昇の予防効果を評価した。 水性抽出物ではなくメタノール抽出物を2週間経口投与したところ、腸間膜動脈における血管弛緩作用に伴い、血圧上昇を有意に減少させた。 A. vulgarisのメタノール抽出物の顕著な血管弛緩作用と血圧低下作用は、フラボノイド、特にケルセチンの高含有によるものである可能性が示唆された。 一方、L-NAME誘発高血圧ラットにおいて、A. vulgarisの水性抽出物が血圧を下げないこと、およびK+収縮動脈の収縮緊張を増大させることは、フラボノイド含有量が少なく、没食子酸を多く含むことに起因している可能性が示唆された。 このように，ラット腸間膜動脈におけるA. vulgarisの水性およびメタノール抽出物の血管作用は，in vitroまたはin vivo実験のいずれにおいても，異なる抽出プロセスによるフラボノイド組成と関連している可能性が高い． 水性抽出物の代わりにメタノール抽出物を使用すると、心血管障害、特に高血圧症に使用できる可能性がある。 これらの結果は、このハーブの作用機序と臨床的価値を明らかにするための更なる研究をもたらす可能性が高い。