Albino Konijn
Primaire Irritatie-Huid
De dieren die veel gebruikt zijn voor de detectie van irriterende eigenschappen van chemicaliën zijn het albino konijn, de albino cavia, en de witte muis. Wanneer een chemische stof herhaaldelijk dermaal wordt toegediend, is het doel van de test zowel topische als systemische effecten op te sporen. Wanneer verbindingen in aanzienlijke mate door de huid worden geabsorbeerd, kan de LD50 worden bepaald. Wanneer konijnen worden gebruikt, kan de duur van de proeven variëren van minimaal 3 dagen, waarbij het middel één keer wordt aangebracht, tot maximaal 2 jaar. Wanneer het onderzoek van het langdurige type is, worden de dieren op soortgelijke wijze gevolgd als de algemene langdurige onderzoeken die eerder zijn beschreven; dat wil zeggen dat de dieren worden onderworpen aan hematologisch, klinisch-chemisch en urineonderzoek. Wanneer de carcinogene effecten moeten worden geëvalueerd, worden de huidtests verlengd tot een periode van 2 jaar, gedurende welke het agens gedurende de test ten minste tweemaal per week op de huid wordt aangebracht.
De acute huidtest is gewoonlijk een test van 3 dagen. Hij wordt uitgevoerd op een beperkt aantal albino-konijnen die in twee gelijke groepen zijn verdeeld. Het gebied op de rug van elk dier dat zich uitstrekt van de basis van de nek tot de achtervoeten wordt geschoren of onthaard. In de ene groep wordt een oppervlakte van ongeveer 2 in.2 van de blote huid geschuurd door het maken van kleine insnijdingen door de oppervlakkige laag cellen; dat wil zeggen dat de insnijdingen niet diep genoeg zijn om het derma te verstoren of bloedingen te veroorzaken. Indien het testmateriaal een vloeistof is, wordt 0,5 ml of minder van het materiaal onder een gaasje van 1 × 1 inch gebracht, dat op zijn plaats wordt gehouden over het geschaafde deel van de huid van zowel de geschaafde als de niet-geschaafde dieren. Indien het middel een vaste stof is, wordt deze opgelost in een geschikt oplosmiddel zoals plantaardige olie of water en wordt 0,5 g van de stof onder het gaasje aangebracht. Wanneer een oplosmiddel wordt gebruikt, wordt een controlegroep van dieren die alleen aan het oplosmiddel zijn blootgesteld, in de proef opgenomen. De dieren worden dan in het algemeen geïmmobiliseerd in fixatiepoten en de gehele romp van elk dier wordt gedurende de volgende 24 uur in een niet-absorberend bindmiddel gewikkeld. Na het tijdsinterval van 24 uur worden het bindmiddel en het kompres verwijderd en wordt de blootgestelde zone geëvalueerd en 48 uur later opnieuw geëvalueerd.
Bij de evaluatie van de effecten op de huid wordt gebruik gemaakt van een scoresysteem voor de mate van roodheid en de mate van oedeem op de plaats waar het gaaskompres is aangebracht. Het gebruikte scoresysteem is gewoonlijk datgene dat in het Federal Register is gepubliceerd in sectie 191.11 van de Federal Hazardous Substances Act van de Verenigde Staten. Het puntensysteem bestaat uit de relatieve toekenning van afzonderlijke cijfers voor de mate van erytheem en de mate van oedeemvorming, en wel als volgt geen erytheem, 0; gering, nauwelijks waarneembaar erytheem, 1; duidelijk erytheem, 2; matig tot ernstig erytheem, 3; en ernstig, bietenrood, erytheem met verwondingen in de diepte, 4; geen oedeem, 0; gering, nauwelijks waarneembaar oedeem met opstaande randen, 2; matig oedeem waarbij het oppervlak ongeveer 1 mm is opgetrokken, 3; ernstig oedeem waarbij het gebied meer is opgetrokken dan voorheen en zich uitstrekt tot buiten de blootstellingszone, 4. De scores voor zowel erytheem als oedeem in elke scoringsperiode en voor zowel de geschaafde als de intacte huid worden genoteerd en het gemiddelde voor elke groep en voor elk type effect wordt berekend. Alle acht gemiddelde waarden worden vervolgens bij elkaar opgeteld en gedeeld door 4, aangezien er vier gemiddelde waarden voor elk effect (erytheem en oedeem) zijn, wat een numeriek eindcijfer oplevert dat de primaire irritatiescore is. Wanneer naast de lokale toxiciteit ook de systemische toxiciteit moet worden bepaald, worden de dieren één keer behandeld zoals hierboven aangegeven, behalve dat de blootstellingszone wordt gewassen nadat het gaasje is verwijderd en de dieren de daaropvolgende 14 dagen worden gevolgd op aanwijzingen voor lokale en systemische effecten.
In langdurige, herhaalde toedieningsstudies met een duur van 3 maanden worden jonge albino-konijnen van beide geslachten willekeurig verdeeld in drie groepen van drie tot zes dieren in elke groep plus een gelijk aantal controledieren. De blootstellingszone op de huid van ten minste twee dieren in elke groep wordt geschraapt. Het testmateriaal wordt 5 dagen per week rechtstreeks op de huid aangebracht voor in totaal 60 toepassingen. De hele romp van elk dier wordt omwikkeld zoals in de vorige test en de omwikkeling wordt met plakband vastgezet. De dieren krijgen een halsband om om inslikken van het testmateriaal te voorkomen. De waargenomen topische effecten worden tijdens de test met tussenpozen genoteerd en de dieren worden geobserveerd op systemische effecten. Aan het eind van de blootstellingsreeks worden de dieren gedood en worden volledige necropsies uitgevoerd. Histologische secties van de blootgestelde huid en van alle abnormale weefsels worden geëvalueerd.
Het onderzoek naar mogelijke carcinogene effecten van herhaalde topische toediening van chemische agentia omvat studies die in duur variëren van 3 maanden tot 2 jaar. De gewoonlijk gebruikte dieren zijn witte muizen, en de test omvat zowel positieve als negatieve controlegroepen van dieren plus een minimum van twee testgroepen die worden toegewezen aan hoge en lage doseringsconcentraties van het agens. Het aantal dieren in elke groep varieert van 25 tot 50 mannetjes plus een gelijk aantal wijfjes, die alle afzonderlijk worden gehuisvest. De huid van elk dier wordt geschoren over de achterkant van de nekbasis en tussen de schouderbladen. Het middel wordt op de blootgestelde huid geschilderd of uit een pipet op die huid gedruppeld. Bij elke toepassing is het volume aangebracht materiaal 0,1 ml, en de dieren worden twee keer per week behandeld voor de duur van het experiment. Bij de dieren die het experiment overleven en bij de dieren die tijdens het experiment ziek worden, wordt een necropsie verricht. Histopathologisch onderzoek wordt verricht op alle weefsels zoals beschreven in de conventionele chronische toxiciteitsproeven. Speciale aandacht wordt besteed aan de beoordeling van de dieren in de loop van het onderzoek op het verschijnen en de aard van huidtumoren bij de dieren. Deze proeven worden gewoonlijk zodanig gewijzigd dat zij procedures omvatten om na te gaan of de geteste chemische stof het ontstaan van tumoren initieert of bevordert.