Amfotrope en VSV-G-pseudotype retrovirale vectoren transduceren menselijke hematopoietische progenitorcellen met gelijkaardige efficiëntie

Een beperking van retrovirale genoverdracht in hematopoietische stamcellen is het lage niveau van amfotrope virusreceptor. In de huidige studie hebben we onderzocht of retrovirale vectoren, gepseudotypeerd met het G-eiwit van het vesiculaire stomatitis virus (VSV), deze beperking kunnen overwinnen. Menselijke progenitorcellen gezuiverd door magnetische korrels en celsortering werden getransduceerd met een amphotropische of VSV-G-gepseudotypeerde retrovirale vector die de afgekapte menselijke zenuwgroeifactorreceptor als merkergen bevatte. De cellen werden voorgestimuleerd met flt-3 ligand, stamcelfactor, en interleukine-3 en getransduceerd op fibronectine. De expressie van het merkergen werd geanalyseerd met behulp van flowcytometrie. De transductie-efficiëntie van amphotropisch en VSV-G-pseudotype virus voor CD34+ cellen verschilde niet significant. Genoverdracht naar CD34+CD38- cellen, die verrijkt zijn in meer immature progenitors, was niet beperkt en de overdrachtsefficiënties voor deze subset waren ook vergelijkbaar voor beide pseudotypes. De toevoeging van fibronectine verbeterde de genoverdracht met de amphotrope vector aanzienlijk (5- tot 19,3-voudig, gemiddeld 12,6), terwijl het effect op het VSV-G-pseudotype veel minder uitgesproken was (1- tot 3,9-voudig, gemiddeld 2,1, P = 0,04). Concluderend kan worden gesteld dat hoge niveaus van genoverdracht naar menselijke hematopoietische progenitors werden bereikt met een geoptimaliseerd transductieprotocol, en dat de transductie-efficiëntie niet verder kon worden verbeterd door het gebruik van VSV-G-pseudotypen. Beenmergtransplantatie (2000) 25 , Suppl. 2, S75-S79.