Regular ArticleAngiotensine II Modulates ANP-R2/ANP-C Receptor-mediated Inhibition of Adenylyl Cyclase in Vascular Smooth Muscle Cells: Role of Protein Kinase C☆

In de huidige studies hebben we de modulatie van atriale natriuretische peptide (ANP) receptor van R2 subtype (ANP-R2/ANP-C) gekoppeld aan adenylyl cyclase/cAMP signaal transductie systeem door angiotensine II (angII) onderzocht. C-ANF4-23 en AngII remden de adenylyl cyclase activiteit op een concentratie-afhankelijke manier in vasculaire gladde spiercellen (VSmc A-10). De maximale remmingen bedroegen respectievelijk ongeveer 40 en 30%, met een schijnbare Kiof van ongeveer 1 en 10 nm. Voorbehandeling van de cellen met AngII resulteerde in de verzwakking van zowel C-ANF4-23 als AngII-gemedieerde remmingen van adenylyl cyclase, zonder de -ANF binding te veranderen. De niveaus van Giα-2- en Giα-3-eiwitten, bepaald door immunoblotting, werden ook verhoogd door AngII-behandeling. Bovendien stimuleerde AngII-behandeling de fosforylering van Giα2, maar niet van Giα3 of ANP-C-receptor, zoals bleek uit immunoprecipitatie van de eiwitten met specifieke antilichamen na het voorlabelen van de cellen met orthofosfaat. Staurosporine en chelerythrine, protein kinase C (PKC) remmers van respectievelijk 1 en 100 nm, verhinderden de AngII-gemedieerde desensitisatie van C-ANF4-23-gevoelig adenylyl cyclase. Bovendien werd de AngII-gemedieerde fosforylering van Giα2proteïne ook gedeeltelijk geremd met ongeveer 35% door behandeling met staurosporine. Deze resultaten suggereren dat de verzwakking van C-ANF4-23-gemedieerde remming van adenylyl cyclase activiteit door AngII mogelijk niet wordt toegeschreven aan de downregulatie van receptoren of aan de verlaagde niveaus van G-eiwitten, en mogelijk PKC-afhankelijke mechanismen impliceert.