Validation of an ADCC assay using human primary natural killer cells to evaluate biotherapeutic products bearing an Fc region

De ontwikkeling van biotherapeutica vereist een voortdurende verbetering van de analytische methodologieën voor de beoordeling van hun kwaliteitskenmerken. Een subset van biotherapeutica is ontworpen om te interageren met specifieke antigenen die blootgesteld zijn aan de membranen van doelcellen of circuleren in een oplosbare vorm, en effectorfuncties worden bereikt via herkenning van hun Fc-regio door effectorcellen die mechanismen induceren zoals antilichaam-afhankelijke cel-gemedieerde cytotoxiciteit (ADCC). ADCC inductie is dus een kritisch kwaliteitsattribuut (CQA) dat geëvalueerd moet worden om de biotherapeutische doeltreffendheid te verzekeren. De inductie van ADCC kan worden geëvalueerd door gebruik te maken van effectorcellen uit verschillende bronnen, zoals mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) en genetisch gemodificeerde cellijnen (bv. getransfecteerde NK- of Jurkat-cellen), en afhankelijk van het gebruikte type effectorcellen kunnen verschillende benaderingen worden gebruikt voor detectie en interpretatie van de resultaten. In dit verband is validatie van de assays van belang om de betrouwbaarheid van de resultaten overeenkomstig het beoogde doel te waarborgen. Hier laten we de standaardisatie en validatie zien van ADCC assays om de potentie te testen van drie biotherapeutische eiwitten, waarbij primaire NK cellen verkregen uit vers bloed worden gebruikt als effectorcellen en celdood wordt gedetecteerd door middel van flowcytometrie. Het voordeel van het gebruik van primaire NK-cellen in plaats van gemodificeerde cellen is dat de respons dichter ligt bij die welke in vivo optreedt, aangezien de cytotoxiciteit op een directe manier wordt geëvalueerd. Uit onze resultaten blijkt dat de assays in alle gevallen een karakteristieke sigmoïdale dosis/respons-curve vertoonden die voldeed aan nauwkeurige, precieze en specifieke parameters. De gevalideerde ADCC assay is dan ook een geschikt alternatief om de biologische activiteiten van dit soort biotherapeutica te evalueren.