Veelgebruikte apoptose-assays in apoptose-onderzoek
Vraag:
Wat zijn de meestgebruikte apoptose-assays?
The Protein Man Says:
Apoptose-onderzoek vereist het gebruik van een breed scala van apoptose-tests, aangezien het proces zelf nogal gecompliceerd is. Bovendien is er geen enkele parameter die celdood in alle systemen kan definiëren, zodat u verschillende benaderingen moet gebruiken om uw onderzoek uit te voeren.
Hoofdsoorten apoptosis assays
Er zijn vijf verschillende soorten apoptosis assays die momenteel worden gebruikt in apoptosis-onderzoek. Dit omvat caspase-tests, DNA-fragmentatie-tests, celpermeabiliteits-tests en mitochondriale tests. Daarnaast is er ook een type assay dat kan worden gebruikt om de analyse van de apoptosesignaleringsroute te vergemakkelijken.
Caspase-assays. De aanwezigheid van caspase-enzymen in een gegeven monster is een zekere indicator dat complexe biochemische gebeurtenissen in verband met apoptose plaatsvinden. Caspase-analyses kunnen dan ook worden gebruikt om apoptose in celpopulaties in de vroegste stadia op te sporen. Deze assays maken routinematig gebruik van specifieke substraten die door caspases worden verteerd om colorimetrische of fluorometrische substraten vrij te maken.
DNA-fragmentatietests. Apoptose en DNA-splitsing gaan hand in hand, zodat u de mate van apoptose kunt bepalen door de DNA-fragmenten te meten die in uw monster aanwezig zijn. De meeste onderzoekers gebruiken hiervoor apoptopische DNA-ladderanalyse, ELISA-kwantificering en TUNEL-tests (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling).
Celpermeabiliteitstests. Apoptose in het middenstadium kan worden bepaald met behulp van celpermeabiliteitsbepalingen. Zoals u waarschijnlijk weet, hebben gezonde cellen stijve plasmamembranen, terwijl dode cellen zeer doorlaatbare celmembranen hebben. Met hun zeer gecompromitteerde membranen kunnen fluorescerende kleurstoffen gemakkelijk door apoptopische cellen passeren. Wanneer dit gebeurt, zult u een karakteristiek fluorescentie- of kleuringpatroon waarnemen dat de aanwezigheid van apoptopische celpopulaties in uw monster aangeeft.
De toename van de celpermeabiliteit resulteert ook in het verlies van cytosolische eiwitten uit de cel. Lactaatdehydrogenase (LDH) is een oplosbaar cytosolisch enzym dat vrijkomt in het kweekmedium na verlies van membraanintegriteit als gevolg van hetzij apoptose of necrose. LDH-activiteit kan derhalve worden gebruikt als indicator van de integriteit van het celmembraan en dient als algemeen middel om de cytotoxiciteit als gevolg van chemische verbindingen of toxische milieufactoren te beoordelen. Er bestaan verschillende assays voor de kwantificering van vrijgekomen LDH.
Mitochondriale assays. Mitochondriale assays kunnen helpen bij het bepalen van apoptose in een vroeg stadium, aangezien gebruik wordt gemaakt van een kationogene kleurstof die een verschillende fluorescentie afgeeft bij gebruik in gezonde celpopulaties en apoptopische celpopulaties.
Weten welke apoptose-assays te gebruiken en wanneer ze te gebruiken, kan u enorm helpen bij uw onderzoek, dus u kunt ze maar beter uit uw hoofd leren.