Validation of an ADCC assay using human primary natural killer cells to evaluate biotherapeutic products bearing an Fc region

Rozwój bioterapeutyków wymaga ciągłego doskonalenia metodologii analitycznych w celu oceny ich atrybutów jakościowych. Podgrupa bioterapeutyków jest zaprojektowana do interakcji ze specyficznymi antygenami, które są eksponowane na błonach komórek docelowych lub krążą w formie rozpuszczalnej, a funkcje efektorowe są osiągane poprzez rozpoznawanie ich regionu Fc przez komórki efektorowe, które indukują mechanizmy takie jak cytotoksyczność zależna od przeciwciał (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC). Dlatego indukcja ADCC jest krytycznym atrybutem jakości (CQA), który musi być oceniany w celu zapewnienia skuteczności bioterapii. Indukcja ADCC może być oceniana przez wykorzystanie komórek efektorowych z różnych źródeł, takich jak komórki jednojądrowe krwi obwodowej (PBMC) i genetycznie zmodyfikowane linie komórkowe (np. transfekowane NKs lub komórki Jurkat), a różne podejścia mogą być stosowane do wykrywania i interpretacji wyników w zależności od rodzaju wykorzystanych komórek efektorowych. W związku z tym, walidacja testów jest istotna, aby zapewnić wiarygodność wyników zgodnie z zamierzonym celem. W niniejszej pracy przedstawiamy standaryzację i walidację testów ADCC do badania siły działania trzech białek bioterapeutycznych z wykorzystaniem pierwotnych komórek NK uzyskanych ze świeżej krwi jako komórek efektorowych i wykrywania śmierci komórek za pomocą cytometrii przepływowej. Zaletą użycia pierwotnych komórek NK zamiast komórek modyfikowanych jest to, że odpowiedź jest bliższa tej występującej in vivo, ponieważ cytotoksyczność jest oceniana w sposób bezpośredni. Nasze wyniki wskazują, że we wszystkich przypadkach, testy wykazywały charakterystyczną sigmoidalną krzywą dawka/odpowiedź zgodną z dokładnymi, precyzyjnymi i specyficznymi parametrami. W związku z tym, zwalidowana próba ADCC jest odpowiednią alternatywą do oceny aktywności biologicznej tego typu bioterapeutyków.