Zmiany patologiczne wywołane przez Anoplocephala perfoliata w połączeniu krętniczo-kątniczym u koni

Do badań wybrano losowo 31 koni rasy mieszanej, w wieku od 15 miesięcy do 13 lat, regularnie kierowanych do rzeźni. Wśród nich było 11 zwierząt wolnych od pasożytów (grupa kontrolna) oraz 20 koni dotkniętych spontanicznym zarażeniem A. perfoliata. U wszystkich koni, w ciągu 30 minut od śmierci, pobrano próbkę z połączenia krętniczo-kątniczego. Następnie próbki jelit były płukane w bieżącej wodzie i natychmiast umieszczane w 10% obojętnie zbuforowanej formalinie. W międzyczasie dorosłe tasiemce przyczepione do połączenia krętniczo-kątniczego były bezpośrednio liczone, rejestrowane, płukane w bieżącej wodzie i konserwowane w 10% roztworze formaliny. Zebrane tasiemce umieszczano w roztworze laktofenolu, a następnie montowano na szkiełkach mikroskopowych w celu identyfikacji przy użyciu parametrów morfologicznych (Euzeby 1981). Na podstawie liczby stwierdzonych tasiemców, wybrane 31 koni podzielono na cztery grupy: grupa „N” – 0 tasiemców; grupa „A” – od 1 do 20 tasiemców; grupa „B” – od 20 do 100 tasiemców; grupa „C” – ponad 100 tasiemców.

Z każdej próbki pobrano wycinki parafinowe o grubości 5µm, które barwiono hematoksyliną-eozyną i fioletem krezolowym. Badanie histologiczne przeprowadzono w celu oceny następujących parametrów: limfomonocytarne i eozynofilowe nacieki zapalne w błonie śluzowej/podśluzowej, zanik/wypuklenie kosmków jelitowych, zmiany nadżerkowe/wrzodziejące, zmiany zwyrodnieniowe komórek zarodkowych oraz hiperplazja pęcherzyków limfatycznych jelita. Każdemu wybranemu parametrowi indywidualnie przypisywano punktację: 0 – brak zmian; 1 – zmiany łagodne; 2 – zmiany umiarkowane; 3 – zmiany wyraźne. W konsekwencji, na podstawie sumy punktów, uszkodzenie błony śluzowej i podśluzowej oceniano następująco: 0 (brak zmian) z 0-2 punktami; I (łagodne zmiany) z 3-7 punktami, II (umiarkowane zmiany) z 8-12 punktami i III (wyraźne zmiany) z 13-15 punktami.

W miejscu połączenia krętniczo-kątniczego, grubości warstw mięśni okrężnych i podłużnych były kwantyfikowane za pomocą analizy obrazu (NIS-Elements Br-2) w celu identyfikacji stanów przerostowych. Dla każdej próbki badanie histopatologiczne ENS zostało ocenione przez ocenę morfometryczną w celu oceny średniej gęstości liniowej dla zwojów mięśniowych, liczby komórek neuronalnych i średniego odsetka chromatolitycznych/nekrotycznych komórek neuronalnych w trzech 3-cm sekcjach seryjnych.

Uogólniony model liniowy (GLM) został użyty do sprawdzenia znaczącej korelacji między obciążeniem pasożytniczym a oceną histopatologiczną zmian śluzówkowych i podśluzówkowych. Jednokierunkowa analiza wariancji (ANOVA), a następnie test porównań wielokrotnych Tukeya zostały wykorzystane do wykrycia istotnych różnic pomiędzy liczbą zwojów mięśniowych, liczbą komórek neuronalnych, odsetkiem neuronów chromatolitycznych/nekrotycznych, grubością warstw mięśniowych oraz grupą zidentyfikowaną na podstawie liczby stwierdzonych tasiemców. Jako poziom istotności przyjęto pięć procent. Analiza statystyczna została przeprowadzona przy użyciu oprogramowania w wersji R 2.7 (GNU GENERAL PUBLIC LICENSE, Free Software Foundation, Inc., Boston, USA).

.