Aggregação de anfolina sobre heparina e outros polissacarídeos ácidos em focalização isoelétrica

O mecanismo de complexação da gama pI 3,5–5 Anfolina à heparina em focalização isoelétrica tem sido explorado pela técnica de ligação de corantes a diferentes valores de pH em solução. Não há interação significativa entre a heparina e a Ampholina a pH 6,7. A ligação fraca, ou seletiva, ocorre a pH 5,1, e a interação muito forte a pH 3,5. Neste último sistema, os componentes da Ampholina parecem comportar-se como policias devido à sua sequência ordenada de cargas positivas, cada um com dois grupos de metileno separados, o que favorece uma forte ligação aos polianóis. Além disso, parecem existir estequiometrias variáveis para a forte ligação entre a heparina e a Ampholina, dependendo das suas quantidades relativas. Propõe-se que, numa razão baixa de heparina para Ampholina (excesso de Ampholina), a agregação seja perpendicular à cadeia da heparina, com a carga final de amônio de cada molécula de Ampholina neutralizando uma carga negativa ao longo da molécula de heparina; em proporções mais elevadas (excesso de heparina), o segmento de Ampholina ligado é alinhado paralelamente à molécula de heparina, de modo que, em média, um componente de Ampholina neutraliza aproximadamente três cargas negativas. A bandagem da heparina em foco isoelétrico na faixa de pH 3,0–4,5 pode ser explicada pela agregação dos vários componentes sobre a heparina em quantidades dependentes da carga líquida sobre a espécie Ampholina no pH dado, e sobre as estequiometrias variáveis em função da variação da razão entre a heparina e a Ampholina ao longo do gradiente de pH. A ligação da Ampholina ao poligalacturonato também foi demonstrada em excesso de Ampholina em uma faixa de pH dependente do grau de protonação dos grupos carboxil deste polissacarídeo ácido, bem como da carga líquida positiva da Ampholina. A agregação observada no pH 4,2–4,5 levou à previsão e subsequente demonstração de que o poligalacturonato também exibiria ligação sobre o foco isoelétrico. Isto suporta a hipótese de que a agregação de Ampholina em polianiões com densidade de carga suficiente é um fenômeno geral que pode levar a bandagem espúria de certos polímeros em faixas apropriadas de pH no foco isoelétrico. Com base no seu comportamento em focalização isoelétrica a pH 3,0–4,5, a força de agregação dos polianions estudados parece ser a heparina A = heparina B maior que o poliglutamato maior que a heparina B reduzida a carboxil maior que o ácido poligalacturônico.