Autoradiógrafo
Em biologia, esta técnica pode ser usada para determinar a localização tecidual (ou celular) de uma substância radioativa, seja introduzida em uma via metabólica, ligada a um receptor ou enzima, ou hibridizada a um ácido nucléico. As aplicações da autorradiografia são amplas, variando de biomédica a ciências ambientais e industriais.
Autorradiografia do receptorEditar
O uso de ligantes radiolabelados para determinar a distribuição tecidual dos receptores é denominado autorradiografia do receptor in vivo ou in vitro se o ligante for administrado na circulação (com posterior remoção e secção do tecido) ou aplicado nas secções teciduais, respectivamente. Uma vez conhecida a densidade do receptor, a autorradiografia in vitro também pode ser usada para determinar a distribuição anatômica e a afinidade de um fármaco marcado com radioligação em relação ao receptor. Para a autorradiografia in vitro, a radioligand foi aplicada diretamente em cortes de tecido congelado sem administração ao sujeito. Assim, não pode acompanhar completamente a distribuição, metabolismo e situação de degradação no corpo vivo. Mas como o alvo nas criosecções está amplamente exposto e pode entrar em contacto directo com a radioligandria, a autorradiografia in vitro ainda é um método rápido e fácil de rastrear candidatos a drogas, PET e ligandos SPECT. Os ligandos são geralmente rotulados com 3H (trítio), 18F (fluroina), 11C (carbono) ou 125I (radioiodo). Comparado à autoradiografia in vitro, a autoradiografia ex vivo foi realizada após a administração de radioligand no corpo, que pode diminuir os artefatos e estão mais próximos do ambiente interno.
A distribuição das transcrições de RNA em cortes teciduais pelo uso de oligonucleotídeos radioligados, complementares ou ácidos ribonucleicos (“riboprobes”) é chamada histoquímica de hibridização in situ. Precursores radioativos de DNA e RNA, -timidina e -uridina respectivamente, podem ser introduzidos às células vivas para determinar o tempo de várias fases do ciclo celular. As sequências virais de RNA ou DNA também podem ser localizadas desta forma. Estas sondas são normalmente rotuladas com 32P, 33P ou 35S. No domínio da endocrinologia comportamental, a autoradiografia pode ser utilizada para determinar a absorção hormonal e indicar a localização do receptor; um animal pode ser injectado com uma hormona marcada com radiolimite, ou o estudo pode ser realizado in vitro.
Taxa de replicação de ADNEditar
A taxa de replicação de ADN numa célula de rato que cresce in vitro foi medida pela autoradiografia como 33 nucleótidos por segundo. A taxa de alongamento de ADN T4 em E. coli infectada com fagos também foi medida por autoradiografia como 749 nucleótidos por segundo durante o período de aumento exponencial do ADN a 37 °C.
Detecção de fosforilação de proteínaEdit
Fosforilação significa a adição pós-tradicional de um grupo fosfato a aminoácidos específicos de proteínas, e tal modificação pode levar a uma mudança drástica na estabilidade ou na função de uma proteína na célula. A fosforilação da proteína pode ser detectada em um autorradiógrafo, após a incubação da proteína in vitro com a cinase apropriada e γ-32P-ATP. O fosfato radiolabelado deste último é incorporado à proteína que é isolada via SDS-PAGE e visualizada em um autorradiógrafo do gel. (Ver figura 3. de um estudo recente mostrando que a proteína de ligação CREB é fosforilada por HIPK2.)
Detecção do movimento de açúcar no tecido vegetalEditar
Na fisiologia vegetal, a autoradiografia pode ser usada para determinar o acúmulo de açúcar no tecido foliar. O acúmulo de açúcar, no que diz respeito à autorradiografia, pode descrever a estratégia de carregamento de floema utilizada em uma planta. Por exemplo, se os açúcares se acumulam nas veias menores de uma folha, é esperado que as folhas tenham poucas conexões plasmodesmatais, o que é indicativo de movimento applásico, ou uma estratégia ativa de carregamento de floema. Os açúcares, tais como sacarose, frutose ou manitol, são radiolatinizados com , e depois absorvidos no tecido foliar por simples difusão. O tecido foliar é então exposto a filme autorradiográfico (ou emulsão) para produzir uma imagem. As imagens mostrarão padrões venosos distintos se o acúmulo de açúcar estiver concentrado nas veias foliares (movimento apoplástico), ou as imagens mostrarão um padrão estático se o acúmulo de açúcar for uniforme em toda a folha (movimento simplástico).
Outras técnicasEditar
Esta abordagem autorradiográfica contrasta com técnicas como PET e SPECT onde a localização exata tridimensional da fonte de radiação é fornecida pelo uso cuidadoso de contagem de coincidências, contadores gama e outros dispositivos.
Krypton-85 é usado para inspecionar componentes de aeronaves para pequenos defeitos. Krypton-85 é permitido penetrar pequenas fissuras, e então sua presença é detectada por autoradiografia. O método é chamado “krypton gas penetrant imaging” (imagem penetrante de gás de krypton). O gás penetra aberturas menores do que os líquidos utilizados na inspeção penetrante de corantes e na inspeção penetrante fluorescente.