Biliverdin (BV) Isomers Analysis service

Biliverdin é um pigmento verde formado como subproduto da decomposição da hemoglobina. Consiste em quatro anéis de pirólise ligados linearmente (um tetrapirrol). A biliverdina é formada quando o grupo heme da hemoglobina é clivado na sua ponte alfa-meteno. A biliverdina resultante é então reduzida à bilirrubina, um pigmento amarelo, pela enzima biliverdina redutase. A mudança de cor de um hematoma de roxo profundo para amarelo ao longo do tempo é um indicador gráfico desta reacção. A biossíntese da hemoglobina é um precursor da bilirrubina. Ocorre na bílis dos anfíbios e das aves, mas não na bílis ou soro humano normal.

O hemograma é mais conhecido como um constituinte da hemoglobina, que é liberado em associação com a quebra dos glóbulos vermelhos envelhecidos. O heme também é contido em uma ampla gama de enzimas cuja rotação também leva à liberação de heme livre. O heme livre pode ser tóxico, portanto a natureza desenvolveu uma família de enzimas heme oxigenase para degradar o heme, e seu bloqueio leva a um grande aumento da excreção de heme não metabolizado na bílis. Estas enzimas fendem o anel de heme para formar biliverdina, ferro e um fragmento de 1-carbono como monóxido de carbono. O CO é cada vez mais apreciado como um neurotransmissor, e o ferro, ele próprio tóxico, é excretado das células por uma bomba recentemente caracterizada. A biliverdina parece ser um produto final apropriado do caminho, sendo prontamente excretada na bílis para entrar no intestino e deixar o corpo nas fezes. De fato, em aves, répteis e anfíbios, a biliverdina é o produto final predominante da degradação do heme. Por razões que até agora pareciam obscuras, nos mamíferos, a biliverdina sofre metabolismo adicional, sendo reduzida pela biliverdina redutase (BVR) à bilirrubina, uma etapa que consome o recurso energético nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH).

Figura 1. Heme oxigenase e reação enzimática de biliverdina redutase.

Biliverdinas são derivadas formalmente de hemes pela remoção oxidativa de uma ponte de methine e perda do átomo de ferro. A natureza assimétrica do heme IX resulta na possibilidade de quatro isômeros diferentes de biliverdina, cada um correspondendo à remoção de uma ponte de metina diferente e nomeado em conformidade. Assim, os isómeros Ixα, IXβ, IXγ e IXδ ilustrados no esquema I correspondem respectivamente à remoção de α, β, γ e δ pontes de mesoheme. Tal isomerismo é importante no estudo do metabolismo de heme e bilin.

Figura 2. Estruturas de quatro isômeros de biliverdinas (Ixα, IXβ, IXγ e IXδ).

Biliverdina possuem propriedades antimutagênicas e antioxidantes significativas e, portanto, podem cumprir uma função fisiológica útil. Biliverdina e bilirrubina têm demonstrado ser potentes necrófagos de radicais peroxil. Também demonstraram inibir os efeitos dos hidrocarbonetos policíclicos aromáticos, aminas heterocíclicas e oxidantes – todos eles mutagénicos. Alguns estudos descobriram que pessoas com níveis mais elevados de bilirrubina e biliverdina nos seus corpos têm uma menor frequência de cancro e doenças cardiovasculares. Tem sido sugerido que a biliverdina – assim como muitos outros pigmentos tetrapirrolicos – pode funcionar como um inibidor da protease HIV-1, além de ter efeitos benéficos na asma, embora sejam necessárias mais pesquisas para confirmar esses resultados. Atualmente não há implicações práticas no uso de biliverdina no tratamento de qualquer doença.

Nos mamíferos, a transformação de biliverdina por biliverdina redutase é rápida. A biliverdina é assim uma espécie de vida curta e, em comparação com a bilirrubina, está presente no soro em concentrações relativamente baixas. O aumento das concentrações séricas de biliverdina (hiperbiliverdinaemia ou icterícia verde) em seres humanos é raro, e é causado principalmente por mutações nos genes das enzimas metabólicas. A biliverdina não foi incluída nos testes diagnósticos padrão; entretanto, vários estudos sugeriram a administração de biliverdina em terapia devido à sua atividade antioxidante e antiinflamatória. Tal administração poderia aumentar a demanda por um ensaio de biliverdina no futuro. Por outro lado, já existe a necessidade de um ensaio de diagnóstico de biliverdina na medicina veterinária. Aves e répteis têm pouca atividade de biliverdina redutase, e produzem quantidades muito baixas de bilirrubina. O aumento das concentrações de biliverdina no soro, bílis ou excreta pode apontar para anemia devido a intoxicação ou infecção ou problemas hepáticos ou obstrução biliar. A biliverdinúria é quase sempre o sinal de doença hepática e ocorre devido a um acúmulo sérico de biliverdina que excede o limiar renal. Portanto, a biliverdina é um analito alternativo no diagnóstico de doenças de aves e répteis, para o qual os valores de referência ainda não foram estabelecidos. Adicionalmente, a biliverdina é também um pigmento importante das cascas dos ovos em várias espécies. Estudos de coloração de ovos também requerem um ensaio de biliverdina para determinar o conteúdo de biliverdina nas cascas de ovos.

Existe assim uma clara necessidade de um método eficiente, simples e econômico para a determinação de biliverdina. A Proteômica Criativa fornece um sistema de cromatografia em camada fina unidimensional que foi usado para a resolução dos isômeros de biliverdina IXα, IXβ, IXγ e IXδ, e cada isômero é identificado sem ambigüidade.

Resumo

• Identificação e quantificação dos isómeros de biliverdina (BV)

Requisito de Amostra

• Volume Normal: 100ul plasma; 50mg tecido; 2e7 células
• Volume Mínimo: 50uL de plasma; 30mg de tecido; 5e6 células

Relatório

• Passará um relatório técnico detalhado no final de todo o projecto, incluindo o procedimento experimental, parâmetros do instrumento.
• Analitos são relatados como uM ou ug/mg (tecido), e os CV’s são geralmente<10%.
• O nome dos analitos, abreviatura, fórmula, peso molecular e CAS# também seriam incluídos no relatório.

Com conjunto integrado de separação, sistemas de caracterização, identificação e quantificação com excelente robustez & reprodutibilidade, alta e ultra-sensibilidade, a Creative Proteomics fornece serviços metabólicos de biliverdina (BV) isomerística de confiança, rápida e rentável.

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