Comparação do efeito antifúngico do gel de Aloevera e Triphala: Um estudo in vitro Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A

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ArTIGOORIGINAL

Ano : 2017 | Volume : 29 | Edição : 2 | Página : 90-94

Comparação do efeito antifúngico do gel de Aloevera e Triphala: Um estudo in vitro
Supreet Jain1, Sheetal Mujoo2, Minal Daga3, Salona Kalra4, Ravleen Nagi1, Afshan Laheji5
1 Departamento de Medicina Oral e Radiologia, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, Índia
2 Departamento de Medicina Oral e Radiologia, Faculdade de Odontologia, Universidade Jazan, Arábia Saudita
3 Departamento de Odontologia Conservadora e Endodontia, Faculdade de Odontologia New Horizon e Instituto de Pesquisa, Bilaspur, Chhattisgarh, Índia
4 Departamento de Medicina Oral e Radiologia, Triveni Institute of Dental Sciences Hospital and Research Centre, Bilaspur, Chhattisgarh, India
5 Department of Oral and Maxillofacial Pathology, Daswani Dental College, Kota, Rajasthan, Índia

Endereço de Correspondência:
Supreet Jain
Departamento de Medicina Oral e Radiologia, New Horizon Dental College and Research Institute, Sakri, Bilaspur, Chhattisgarh
India

Fonte de suporte: Nenhum, Conflito de Interesses: Nenhum

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DOI: 10.4103/jiaomr.JIAOMR_167_16

Resumo

Aim: O objectivo deste estudo foi determinar e comparar as actividades antifúngicas e inibitórias de várias concentrações de gel de Aloevera e Triphala contra Candiada albicans oral. Materiais e Métodos: Os fungos (C. albicans) foram isolados de 10 pacientes com candidíase pseudomembranosa e pacientes com estomatite de dentadura e transferidos para o caldo de Sabouraud, que posteriormente foi incubado no ágar dextrose de Sabouraud (SDA). A atividade antifúngica do gel de Aloevera e Triphala foi testada pelo método de difusão em disco, e a concentração inibitória mínima foi determinada pelo método de microdiluição do caldo. Resultados: O valor médio da zona de inibição do Aloevera foi de 3,35 ± 0,59mm e 1,06 ± 0,41mm a 100% e 50%, respectivamente. Para Triphala, foi de 4,19 ± 0,57mm e 1,79 ± 0,43mm a 100% e 50%, respectivamente (valor de P < 0,001). A zona de inibição de 100% de Triphala apresentou valor maior que a de Aloevera na mesma concentração (P = 0,004). Resultados semelhantes foram obtidos com 50% de concentração de Triphala e Aloevera (P = 0,004). A concentração inibitória mínima de gel de Aloevera e Triphala contra C. albicans foi de 25% e 12,5%, respectivamente. Conclusão: O gel de Aloevera e Triphala apresentaram propriedades antifúngicas em concentrações mais elevadas e podem ser usados como adjunto promissor para agentes antifúngicos.

Keywords: Antifúngico, cultura, natural

Como citar este artigo:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparação do efeito antifúngico do gel de Aloevera e do Triphala: Um estudo in vitro. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017;29:90-4

Como citar esta URL:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparação do efeito antifúngico do gel de Aloevera e Triphala: Um estudo in vitro. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017 ;29:90-4. Disponível em: https://www.jiaomr.in/text.asp?2017/29/2/90/217911

Introdução

Candida é um género de leveduras e é a causa mais comum de infecção fúngica oral. A maioria das espécies de Candida são comensais inofensivos ou endosímbones de hospedeiros, incluindo humanos; no entanto, quando há comprometimento do sistema imunológico ou quando as barreiras mucosas são perturbadas, elas podem invadir e causar doenças. A Candida albicans é a espécie mais comumente isolada e é responsável pela candidíase oral, pseudomembranosa.
O custo, efeitos colaterais e maior resistência aos medicamentos antifúngicos comercialmente disponíveis levaram os pesquisadores a explorar os remédios naturais à base de ervas contra infecções fúngicas., As plantas medicinais tradicionalmente usadas são uma rica fonte de agentes antimicrobianos e estão facilmente disponíveis em áreas rurais. Elas são relativamente mais baratas do que a medicina moderna. Produtos de metabolitos secundários, produzidos por plantas medicinais, são uma fonte importante de muitas drogas farmacêuticas.
Aloevera é uma planta tipo cacto que pertence à família Liliacea. O gel de Aloevera é um gel incolor mucilaginoso, secretado pelas células parenquimatosas das folhas frescas de Aloevera. Contém 98-99% de água e 1-2% de compostos ativos, como aloína, aloe-emodina, aloemannan, flavonóides, aloesina, esteróis, aminoácidos e vitaminas. Triphala significa três frutos, é uma formulação ayurvédica indiana composta por Terminali chebula, T. Belerica, e Phyllantus embelica na proporção 1:1:1, Seus constituintes fitoquímicos são tanino, ácido gálico, ácido elágico, fenol, e glicosídeos. Tanto Aloevera como Triphala têm propriedades antibacterianas, antioxidantes, antifúngicas, anti-inflamatórias e imunomoduladoras, Os efeitos dos extratos de Aloevera e Triphala na infecção oral por Candida foram estudados por pouquíssimos pesquisadores na Índia. O objetivo do estudo foi determinar as atividades antifúngicas e inibitórias de várias concentrações de gel de Aloevera e Triphala contra C. albicans.

Materiais e Métodos

O estudo foi conduzido no Departamento de Microbiologia, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur. A aprovação ética foi retirada do comitê de ética institucional. O consentimento livre e esclarecido foi retirado de todos os pacientes. O cotonete Candida foi retirado dos pacientes que sofriam de candidíase pseudomembranosa usando estomatite de dentadura e transferido para o caldo do Sabouraud. Todos os isolados de Candida foram confirmados por teste de germinação em tubo e teste de germinação de esporos. Esta amostra isolada de Candida foi incubada em ágar dextrose de Sabouraud SDA (laboratórios HIMEDIA, Mumbai) a 4°C.

Figura 1: Crescimento de Candida no caldo de Sabouraud Clique aqui para ver

Preparação do extrato de Aloevera
Epiderme espessa da folha fresca de Aloevera foi removida e o gel mucilaginoso sólido foi coletado em um recipiente estéril . Dez milímetros do gel foram misturados em 100 ml de dimetil sulfóxido a 1% (DMSO) e mantidos a 4°C. O DMSO (≤1%) tem um efeito insignificante no crescimento de fungos e, portanto, foi usado como solvente.

Figura 2: Extracção de gel de Aloevera de folhas frescas em placa estéril Clicar aqui para ver

Preparação do extracto de Triphala
Cem gramas de Triphala churna (Dabur Triphala churna) foram misturados em 100 ml de água para fazer uma solução aquosa . Depois esta solução foi fervida durante 45 minutos. Mais tarde, foi arrefecida e filtrada. Este filtrado foi utilizado para verificar o seu efeito antifúngico. A propriedade antifúngica do gel de Aloevera e Triphala foi detectada usando o método de difusão em disco.

Figura 3: Churna Triphala Clique aqui para ver

Ativação de Candida albicans
Esporos de fungos foram estriados em placa de ágar dextrose de batata (PDA) e incubados a 37°C por 24 h antes do teste. Todas as placas (n = 10) foram mantidas a 4°C para uso posterior.
Método de difusão em disco
Poços de oito milímetros foram perfurados em cada placa (n = 10 para Candida) tendo C. albicans ativado, com uma broca de 8 mm em ágar semeado na qual 100%, 50%, 25%, e 12,5% de extrato de gel de Aloevera foram vertidos. Similarmente, para Triphala, poços de 8 mm foram perfurados em placa diferente (n = 10 para Triphala) tendo C. albicans ativado, com broca de 8 mm em ágar semeado no qual 100%, 50%, 25%, 12,5% do extrato de Triphala foi vertido. Após normalizada à temperatura ambiente, as placas foram incubadas a 37°C por 24 horas. A zona de inibição foi medida e registrada .

Figura 4: (a) Zona de inibição com 100% de concentração de Triphala. (b) Zona de inibição a 50% da concentração de Triphala. (c) Zona de inibição a 100% da concentração de Aloevera. (d) Zona de inibição a 50% da concentração de Aloevera Clique aqui para ver

Concentração inibitória mínima
Concentração inibitória mínima (MIC) foi feita usando o método de diluição de microbroth. A maior diluição que não produziu uma única colónia fúngica foi tomada como a MIC. Extratos de aloevera foram misturados com 1% de DMSO para obter várias concentrações do estoque, ou seja, 100%, 50%, 25%, 12,5%, e 6,25%. Da mesma forma, várias concentrações de Triphala foram obtidas através da mistura do extrato com água destilada. Volume igual das várias concentrações de cada extrato e foram misturados em microtubos (caldo Sabouraud dextrose) para perfazer 0,5 ml de solução. Os tubos foram incubados a 37°C durante 24 horas. Posteriormente, a diluição do teste foi subcultivada em SDA e incubada por 24 h para verificar o crescimento fúngico .

Figura 5: Concentração inibitória mínima para Triphala e Aloevera Clique aqui para ver

Análise estatística
Os dados foram compilados no MS Office Excel. A análise estatística foi feita usando o pacote de software SPSS versão 21 (SPSS Statistics for Windows, Version 21.0. Chicago: SPSS Inc.). O teste de análise de variância (ANOVA) foi realizado para comparações intra e intergrupos. Teste post-hoc (Tukey HSD) também foi realizado para comparar diferentes concentrações de Aloevera, Triphala, e ambos. Os resultados foram medidos como média ± DP. O valor de P menor que <0,05 foi considerado estatisticamente significante e <0,001 altamente significante.

Resultado

As amostras de Candida coletadas foram analisadas por coloração de Gram, que mostrou presença de aglomerados de pseudo-hifas sugerindo espécies de C. albicans. O valor médio da zona de inibição para Aloevera foi de 3,35 ± 0,59mm e 1,06 ± 0,41mm a 100% e 50%, respectivamente. Para Triphala, foi de 4,19 ± 0,57mm e 1,79 ± 0,43mm a 100% e 50%, respectivamente. Tanto Triphala quanto o gel de Aloevera apresentaram propriedade antifúngica em concentrações mais elevadas (100% e 50% de concentração, valor de P < 0,001).

Tabela 1: Valor médio da zona de inibição de Aloevera e Triphala em diferentes concentrações Clique aqui para visualizar

Foram observadas diferenças altamente significativas entre 100% e 50% de Aloevera (P< 0,001, t = 19,17). Resultados semelhantes foram observados para 100% e 50% Triphala (P< 0,001, t = 31,58) . Quando ANOVA foi realizada, o grau de liberdade entre Aloevera e Triphala foi de 3 e dentro dos grupos (100% v/s 50%) foi de 36 . No teste Post hoc, a zona de inibição de 100% de Triphala apresentou valor maior que Aloevera na mesma concentração (P = 0,004). Resultados semelhantes foram obtidos na concentração de 50% de Triphala e Aloevera (P = 0,000) . Com menor concentração (25% e 12,5%), não houve efeito contra a Candida. O MIC de gel de Aloevera e Triphala contra C. albicans foi de 25% e 12,5%, respectivamente.

Tabela 2: Teste t de Student para mostrar comparação dentro do grupo Clique aqui para ver

Tabela 3: Teste de ANOVA mostrando grau de liberdade entre os grupos e dentro do grupo Clique aqui para ver

Tabela 4: Teste Pós-Hoc (Tukey HSD) mostrando comparação dentro dos grupos Clique aqui para ver

Discussão

O aparecimento de bactérias e fungos multirresistentes (MDR) e o alto custo das drogas farmacêuticas exigiram o desenvolvimento de drogas alternativas de fontes naturais e outras. As plantas medicinais, que estão sendo usadas desde os tempos antigos na Ayurveda, poderiam ser uma dessas alternativas por serem baratas, seguras e eficazes contra muitos micróbios. Muitos pesquisadores verificaram o efeito antibacteriano do Aloevera e Triphala.,,, muito poucos estudos foram realizados para verificar o efeito antifúngico destas plantas contra a infecção candidata oral.,,,,,, O presente estudo foi realizado para determinar as atividades antifúngicas e inibitórias de várias concentrações de gel de Aloevera e Triphala contra C. albicans. No presente estudo, tanto o Triphala como o Aloevera apresentaram propriedades anticandidais em concentrações de 100% e 50%. Não foram observadas alterações significativas em concentrações menores (25% e 12,5%).
Sheta et al. utilizaram DMSO 0,5% e água destilada como solvente e Triphala (suspensão) misturado para obter uma concentração final de 100 mg/ml. Verificaram que a zona de inibição do Triphala contra Candida foi de 12 mm quando a água foi utilizada como solvente e 20 mm quando o DMSO foi utilizado como solvente. Os autores também verificaram a propriedade antifúngica do DMSO e descobriram que ele não tem efeito antifúngico. Eles não ferveram suspensão de água, o que poderia ser a causa de melhores resultados do que o nosso estudo. Randhawa sugeriu que o DMSO aumenta a permeabilidade da célula através da ligação com a membrana celular, causando assim um efeito sinérgico com drogas anticandidais. No caso apresentado, a água foi utilizada como solvente para Triphala. El-Mekkawey et al. descobriram que T. chebula pode inibir a espécie Candida (incluindo C. albicans resistentes a coágulos). Malhotra et al. em seu estudo in vitro descobriram que as unidades formadoras de colônias (UFC) de C. albicans caíram a zero após 10 minutos pelo uso de colutório Triphala a 6%.
Khaing descobriram que o extrato etílico de Aloevera não tem efeito anticandidal. Um estudo semelhante de Kaur et al. mostrou que o Aloevera é eficaz contra os C. albicans. Eles sugeriram que um resultado positivo em seu estudo poderia ser devido à mudança no procedimento de extração do gel, ou seja, eles extraíram o gel à temperatura ambiente, enquanto um estudo prévio extraiu o gel a 90°C. Assim, o componente ativo poderia ter sido perdido no extrato etanolico se a extração fosse feita a uma temperatura mais alta.

Um estudo de Stanley et al. descobriu que a zona de inibição do Aloevera contra C. albicans era de 4 mm e MIC era de 50%, o que era similar ao presente estudo. Shireen et al. descobriram que a propriedade antifúngica do Aloevera é dependente da dose. Eles tomaram suco de Aloevera (1000, 500, 250, 100 μg) de folhas frescas e o misturaram com 10 ml de etanol. A zona de inibição foi de 14 mm contra C. albicans na concentração de 1000 μg, que era comparável à anfotericina B. Chainani et al. utilizaram extrato etílico de Triphala e descobriram que ele apresentava efeito anticandidal na concentração de 5% e acima. Triphala mostrou melhores resultados quando comparado com Aloevera, com maior zona de inibição tanto na concentração de 100% quanto na de 50%. Além disso, Triphala inibe o crescimento de Candida em menor concentração (12,5%) quando comparado ao Aloevera (50%).
O efeito antimicrobiano do Aloevera é atribuído ao componente natural chamado antraquinonas (emodina, ácido aloético, aloína, antraceno, antranol, barbaloin, ácido crisofanico, óleo etéreo, éster de ácido cinâmico, isobarbaloin e resistannol).A proteína de aloe purificada de 14 kDa do gel de folhas de Aloevera exibiu uma potente atividade antifúngica contra C. albicans. O efeito antifúngico do Triphala é devido aos seus dois componentes .
Nós descobrimos que ambos Triphala e Aloevera mostraram atividade antifúngica contra C. albicans. Entretanto, o mecanismo de ação destes agentes herbais sobre os micróbios ainda não foi compreendido. Além disso, são necessários mais estudos sobre várias cargas fúngicas e várias concentrações tanto de Triphala como de Aloevera para verificar sua potência contra várias espécies de Candida.

Conclusão

Increase em patógenos fúngicos, opções terapêuticas limitadas, efeitos colaterais da droga terapêutica, e surgimento de MDR juntos colocam uma carga sobre os pacientes com imunidade comprometida. C. albicans é a infecção oportunista mais comum da cavidade oral, frequentemente isolada de amostras de tecido dos pacientes afetados. Os medicamentos tradicionais têm usado produtos vegetais desde há muito tempo. Devido à sua facilidade de disponibilidade e efeito menos tóxico, têm sido feitos esforços para desenvolver opções terapêuticas utilizando moléculas de fontes vegetais. Este estudo é também um esforço semelhante para verificar os efeitos antifúngicos do Triphala e do Aloevera. Neste estudo, o Aloevera e o Triphala mostraram atividade antifúngica.
Limitações
O presente estudo foi realizado in vitro e envolveu uma pequena amostra de tamanho. No futuro, mais ensaios deverão ser realizados em populações maiores (in vivo) para comprovar a eficácia antifúngica do Aloevera e Triphala contra C. albicans para caracterizar o mecanismo de ação para posterior tradução em uso clínico e superação dos desafios da terapêutica fúngica.

Apoio financeiro e patrocínio
Nulo.
Conflitos de interesse
Não há conflitos de interesse.

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Figuras

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