Șobolan albinos
La șobolanii albinoși adulți (Ortín-Martínez et al., 2015; Salinas-Navarro et al., 2010; Schnebelen et al., 2009; Valiente-Soriano et al., 2015b), precum și la șobolanii albinoși adulți (Cuenca et al., 2010; Salinas-Navarro et al., 2009c) și șoareci pigmentați (Valiente-Soriano et al., 2015a), OHT a dus, în primele 2 săptămâni, la pierderea a aproximativ 80% din populația RGC identificată în retina stângă (cu lasere) cu ajutorul trasorilor retrograzi FG sau OHSt aplicați pe ambele SCi cu 1 săptămână înainte de prelucrarea animalelor. Aceste retine au prezentat zone aproape lipsite de RGC marcate retrograd și au adoptat forma unor sectoare în formă de plăcintă cu baza situată la periferia retinei și vârful spre discul optic; aceste zone au fost mai frecvente în retinele dorsale și au variat ca mărime de la un sector mic la unul sau mai multe cvadranturi retiniene. În schimb, retinele din dreapta (martor care nu a fost laserat) au prezentat o distribuție normală a RGC-urilor (marcate retrograd sau imunomarcate cu Brn3a) cu cele mai mari densități în streașina vizuală, de-a lungul axei nasotemporale în retina dorsală, atingând un vârf în cadranul superotemporal, așa cum a fost descris anterior (Nadal-Nicolás et al, 2009, 2012, 2014, 2015; Ortín-Martínez et al., 2010, 2014; Salinas-Navarro et al., 2009a,b). Construirea hărților de izodensitate a permis examinarea detaliată a distribuției topologice a RGC-urilor supraviețuitoare în aceste retine OHT (Fig. 2-4, 6 și 8). Am constatat o variabilitate în ceea ce privește severitatea leziunilor retiniene, iar acest lucru este în concordanță cu rapoartele anterioare din acest laborator (Vidal-Sanz et al., 2012) și din alte laboratoare (Fu și Sretavan, 2010; Levkovitch-Verbin et al., 2002). Mai mult, variabilitatea gradului de degenerare a fost, de asemenea, raportată la un model de șoarece pigmentat ereditar de glaucom experimental, șoarecii DBA/2J (Filippopoulos et al., 2006; Howell et al., 2007; Jakobs et al., 2005; Pérez de Lara et al., 2014; Schlamp et al., 2006; Soto et al., 2008). În plus față de această pierdere sectorială, hărțile de izodensitate au dezvăluit, de asemenea, o pierdere difuză, chiar și în zonele retinei care prezintă RGC-uri supraviețuitoare. Această cantitate de degenerare a retinei s-a bazat pe cuantificarea RGC-urilor marcate cu trasori retrograzi aplicați pe SCi cu 1 săptămână înainte de procesarea animalelor. Atunci când populația supraviețuitoare de RGCs a fost identificată cu dextran tetrametilrhodamine (DTMR), un trasor care, atunci când este aplicat pe ciotul ocular al ON transectat orbital, difuzează pasiv spre somatele celulare, sau cu imunocolorația Brn3a, a existat o neconcordanță clară între numărul de RGCs trasate și numărul de DTMR+RGCs sau Brn3a+RGCs în aceeași retină. Numărul de Brn3a+RGCs a fost semnificativ mai mare decât cel al RGCs trasate în perioadele timpurii după LP, dar nu și la intervale de supraviețuire de 5 săptămâni sau mai mult, ceea ce indică faptul că, în perioadele timpurii de după OHT, o populație mare de RGCs supraviețuitoare și-a pierdut transportul axonal retrograd activ (Agudo-Barriuso et al., 2013a; Vidal-Sanz et al., 2012); o astfel de alterare a fost observată anterior în urma altor tipuri de leziuni ale retinei sau ale ON (Lafuente López-Herrera et al., 2002; McKerracher et al., 1990). Cu toate acestea, între 1 și 5 săptămâni după LP, numărul de Brn3a+RGC a scăzut semnificativ, ceea ce indică faptul că pierderea de RGC a fost progresivă între 1 și 5 săptămâni după LP.
Figura 2. Hipertensiunea oculară induce pierderea celulelor ganglionare retiniene ortotopice și dislocate. Hărți a trei retină reprezentative (una pe rând) care arată distribuția ortotopice (oRGCs) urmărite retrograd (A, C, E) și deplasate (dRGCs) (A′, C′, E′), și a Brn3a+oRGCs (B, D, F) sau Brn3a+dRGCs (B′, D′, F′) la un șobolan naiv (primul rând) sau la șobolani experimentali (al doilea și al treilea rând) la 3 săptămâni după fotocauterizarea cu laser a vaselor limbare și episclerale pentru a induce hipertensiune oculară. Hărțile de izodensitate (C-F) și ale vecinilor lor corespunzători (C′-F′) arată o pierdere topologică paralelă între oRGC și dRGC (FG trasate și Brn3a+), ceea ce este în concordanță cu o compresie axonală produsă la nivelul capului nervului optic. În partea de jos a fiecărei hărți este indicat numărul de RGCs sau dRGCs reprezentate. Scala de culori (diferite nuanțe de gri în versiunea tipărită) pentru hărțile de izodensitate în (B) în dreapta jos, pentru hărțile de vecinătate în (A′). RE, ochiul drept; LE, ochiul stâng; D, dorsal; V, ventral; N, nazal; T, temporal. Bară de scară în (A) = 1 mm.
Figura 3. Pierderea după OHT este selectivă pentru RGC-urile din GCL. Hărți de izodensitate de la o retină experimentală reprezentativă la 15 zile după fotocauterizarea cu laser a venelor perilimbar și episcleral, imunoreacționate pentru Brn3a (A) și colorate cu DAPI în stratul celulelor ganglionare (B). Harta de izodensitate Brn3a arată sectoarele retiniene tipice în formă de plăcintă, lipsite de RGC-uri într-o retină experimentală la 15 zile după OHT indusă de LP. Aceeași retină prezintă un număr mare de nuclei colorați cu DAPI în zonele lipsite de Brn3a+RGC, așa cum se reflectă în harta izodensității DAPI (B). Partea de jos a fiecărei hărți: numărul de celule numărate în acea retină. Scara de culori a densității (diferite nuanțe de gri în versiunea tipărită) din A și B din dreapta jos variază de la 0 [violet (negru în versiunea tipărită)] la ≥ 3500 RGCs/mm2 sau ≥ 5000 DAPI+nuclee (roșu (gri în versiunea tipărită)), respectiv. (C-E) Micrografiile cu putere mai mare din inserția din A, B care arată Brn3+RGC (C), calretinin+neuroni (D) și DAPI+nuclee (E) pentru a ilustra faptul că în sectoarele retinei cu un număr redus de Brn3a+RGC au existat un număr mare de DAPI+nuclee (E), multe dintre acestea fiind celule amacrine deplasate (calretinin+neuroni, D) în GCL. LE, ochiul stâng; D, dorsal; V, ventral; N, nazal; T, temporal. Bară de scară pentru (A) și (B) = 1 mm. Bara de scară pentru (C-D) = 50 μm.
Figura 4. Aspectul normal al vaselor retiniene în retinele hipertensive oculare. (A, A′) Retina naivă marcată retrograd cu fluorogold (FG) aplicat pe ambii coliculi superiori cu 1 săptămână înainte de procesarea animalelor și harta de izodensitate corespunzătoare. (B) Vasele retiniene imunizate cu anticorpi RECA1 într-o reconstrucție retiniană în alb și negru cu montură întreagă. (C, D) Detalii ale retinei (A), luate din cadranul dorsotemporal (C) și inferotemporal (D), care arată FG+RGC (alb), Brn3a+RGC (roșu (negru în versiunea tipărită)) și RECA1+vasele (verde (gri în versiunea tipărită)). În retina naivă, există un transport axonal retrograd competent (RAT), iar vasele retiniene imunomarcate par normale. La două săptămâni după fotocauterizarea cu laser a vaselor perilimbajale și episclerale, o retină hipertensivă oculară prezintă o pierdere tipică a RAT în retina dorsală de-a lungul unui sector mare care se întinde de la ora 8 la ora 5 (E-E′). Vasele retiniene, în reprezentarea alb-negru (F), par normale și similare din punct de vedere morfologic cu retina naivă de control. Acestea se observă, de asemenea, în mărirea luată dintr-o zonă fără RAT (G) sau cu RAT (H). D, dorsal; V, ventral; T, temporal; N, nazal.
.