Agregarea amolinei pe heparină și alte polizaharide acide în focalizarea izoelectrică

Mecanismul de complexare a amolinei cu heparina în intervalul pI 3,5–5 în focalizarea izoelectrică a fost explorat prin tehnica de legare a colorantului la diferite valori ale pH-ului în soluție. Nu există o interacțiune semnificativă între heparină și Amfoline la pH 6,7. O legare slabă sau selectivă are loc la pH 5,1 și o interacțiune foarte puternică la pH 3,5. În acest din urmă sistem, componentele Ampholine par să se comporte ca poliacțiuni datorită succesiunii lor ordonate de sarcini pozitive, fiecare cu câte două grupe metilen, ceea ce favorizează o legătură puternică cu polianionii. În plus, se pare că există stoichiometrii variabile pentru legarea puternică între heparină și Ampholine, în funcție de cantitățile lor relative. Se propune că, la un raport scăzut între heparină și Ampholine (exces de Ampholine), agregarea este perpendiculară pe lanțul de heparină, sarcina de amoniu finală a fiecărei molecule de Ampholine neutralizând o sarcină negativă de-a lungul moleculei de heparină; la rapoarte mai mari (exces de heparină), segmentul de Ampholine legat este aliniat paralel cu molecula de heparină, astfel încât, în medie, o componentă de Ampholine neutralizează aproximativ trei sarcini negative. Bandarea heparinei în focalizarea izoelectrică în intervalul de pH 3,0-4,5 poate fi explicată prin agregarea diverselor componente de pe heparină în cantități dependente de sarcina netă a speciei Ampholine la pH-ul dat și de modificarea stoichiometriei în funcție de variația raportului heparină/Ampholine de-a lungul gradientului de pH. S-a demonstrat, de asemenea, legarea amolinei de poligalacturonat în exces de amfolină într-un interval de pH care depinde de gradul de protonare a grupărilor carboxil ale acestei polizaharide acide, precum și de sarcina pozitivă netă a amolinei. Agregarea observată la pH 4,2 – 4,5 a condus la prezicerea și demonstrarea ulterioară a faptului că poligalacturonatul ar prezenta, de asemenea, legare la focalizarea izoelectrică. Acest lucru susține ipoteza conform căreia agregarea amolinei pe polianioni cu o densitate de sarcină suficientă este un fenomen general care poate duce la formarea de benzi false pentru anumiți polimeri la intervale de pH adecvate în focalizarea izoelectrică. Pe baza comportamentului lor în focalizarea izoelectrică la pH 3,0 – 4,5, puterea de agregare a polianionilor studiați pare a fi heparina A = heparina B mai mare decât poliglutamatul mai mare decât heparina B redusă la carboxil mai mare decât acidul poligalacturonic.