Iepure albinos

Irritare primară-piele

Animalele care au fost utilizate pe scară largă pentru detectarea proprietăților iritante ale substanțelor chimice sunt iepurele albinos, cobaiul albinos și șoarecele alb. Ori de câte ori un produs chimic este aplicat prin aplicare cutanată repetată, obiectivul testului este de a detecta atât efectele topice, cât și cele sistemice. Atunci când compușii sunt absorbiți în mod semnificativ de piele, se poate determina LD50. În cazul în care se utilizează iepuri, durata testelor poate varia de la un minim de 3 zile, care implică aplicarea agentului o singură dată, până la 2 ani. Ori de câte ori studiul este de tip prelungit, animalele sunt urmărite într-o manieră similară studiilor generale prelungite descrise anterior, și anume, animalele sunt supuse unor teste hematologice, de chimie clinică și de urină. Atunci când trebuie evaluate efectele cancerigene, testele cutanate sunt prelungite pentru o perioadă de 2 ani, timp în care agentul este pictat pe piele de cel puțin două ori pe săptămână pe durata testului.

Testul cutanat acut este, de obicei, un test de 3 zile. Acesta se efectuează pe un număr limitat de iepuri albino care au fost împărțiți în două grupe egale. Zona de pe spatele fiecărui animal care se întinde de la baza gâtului până la sferturile posterioare este rasă sau epilată. Într-unul dintre grupuri, o suprafață de aproximativ 3,5 cm2 de piele goală este abrazată prin efectuarea unor incizii minore prin stratul superficial de celule; cu alte cuvinte, inciziile nu sunt suficient de adânci pentru a deranja derma sau a produce sângerări. În cazul în care materialul de testare este un lichid, se plasează 0,5 ml sau mai puțin de material sub o compresă de tifon de 1 × 1 inch, care este fixată pe zona epilată a pielii, atât la animalele abrazive, cât și la cele neabrazive. În cazul în care agentul este un solid, acesta se dizolvă într-un solvent adecvat, cum ar fi uleiul vegetal sau apa, și se introduc 0,5 g de substanță sub tifonul de tifon. Ori de câte ori se utilizează un solvent, se include în test un grup de control format din animale expuse numai la solvent. În general, animalele sunt apoi imobilizate în ciorapi de imobilizare, iar întregul trunchi al fiecărui animal este înfășurat într-un liant neabsorbant pentru următoarele 24 de ore. După intervalul de timp de 24 de ore, liantul și tamponul sunt îndepărtate, iar zona de expunere este evaluată și este reevaluată 48 de ore mai târziu.

Evaluarea efectelor asupra pielii implică utilizarea unui sistem de notare a gradului de roșeață și a gradului de edem la locul de aplicare a tamponului de tifon. Sistemul de notare utilizat este în mod obișnuit cel care a fost publicat în Registrul Federal în secțiunea 191.11 din Legea federală privind substanțele periculoase din Statele Unite ale Americii. Punctajul implică atribuirea relativă a unor numere separate pentru gradul de eritem și gradul de formare a edemului, după cum urmează: niciun eritem, 0; eritem ușor, abia perceptibil, 1; eritem bine definit, 2; eritem moderat până la sever, 3; și eritem sever, roșu sfeclă, cu leziuni în profunzime, 4; niciun edem, 0; edem ușor, abia perceptibil, cu marginile ridicate, 2; edem moderat, cu suprafața ridicată cu aproximativ 1 mm, 3; edem sever, cu suprafața ridicată mai mult decât înainte și care se extinde dincolo de zona de expunere, 4. Se enumeră scorurile obținute atât pentru eritem, cât și pentru edem la fiecare perioadă de notare și atât pentru pielea abrazată, cât și pentru pielea intactă și se calculează media pentru fiecare grup și pentru fiecare tip de efect. Toate cele opt valori medii sunt apoi adunate și împărțite la 4, deoarece există patru valori medii pentru fiecare efect (eritem și edem), obținându-se astfel o cifră numerică finală care reprezintă scorul de iritație primară. Atunci când toxicitatea sistemică trebuie să fie determinată în plus față de toxicitatea locală, animalele sunt tratate o singură dată, așa cum s-a indicat mai sus, cu excepția faptului că zona de expunere este spălată după îndepărtarea tifonului, iar animalele sunt urmărite în următoarele 14 zile pentru a se vedea dacă există dovezi ale efectelor locale și sistemice.

În studiile de administrare prelungită și repetată pentru perioade de 3 luni, iepurii albino tineri de ambele sexe sunt împărțiți la întâmplare în trei grupuri de trei până la șase animale în fiecare grup, plus un număr egal de animale de control. Zona de expunere de pe pielea a cel puțin două animale din fiecare grup este abrazată. Materialul de testare este aplicat direct pe piele 5 zile/săptămână, pentru un total de 60 de aplicații. Întregul trunchi al fiecărui animal este înfășurat ca la testul anterior, iar învelișul este fixat cu bandă adezivă. Animalelor li se pun coliere pentru a preveni ingerarea materialului de testare. La intervale de timp în timpul testului se notează efectele topice observate, iar animalele sunt observate pentru efecte sistemice. La sfârșitul secvenței de expunere, animalele sunt ucise și se efectuează necropsii complete. Se evaluează secțiunile histologice ale zonei de expunere a pielii, precum și ale tuturor țesuturilor anormale.

Investigarea posibilelor efecte cancerigene ale administrării topice repetate de agenți chimici implică studii a căror durată variază între 3 luni și 2 ani. Animalele utilizate în mod obișnuit sunt șoarecii albi, iar testul include atât grupuri de animale de control pozitive, cât și negative, plus un minim de două grupuri de testare care sunt repartizate la concentrații de doze mari și mici ale agentului. Numărul de animale din fiecare grup este cuprins între 25 și 50 de masculi plus un număr egal de femele, toate acestea fiind adăpostite individual. Pielea fiecărui animal se rade pe partea din spate a bazei gâtului și între omoplați. Agentul se pictează sau se lasă să cadă dintr-o pipetă pe pielea expusă. La fiecare aplicare, volumul de material aplicat este de 0,1 ml, iar animalele sunt tratate de două ori pe săptămână pe durata experimentului. Animalele care supraviețuiesc experimentului, precum și cele care se îmbolnăvesc în timpul experimentului sunt necropsiate. Se efectuează o examinare histopatologică a tuturor țesuturilor, așa cum este descris în testele convenționale de toxicitate cronică. Se acordă o atenție deosebită evaluării animalelor pe parcursul studiului pentru a determina apariția și natura tumorilor cutanate la animale. Aceste teste sunt în mod obișnuit modificate pentru a include proceduri care să detecteze dacă substanța chimică testată acționează prin inițierea sau favorizarea apariției de tumori.