Teste de apoptoză utilizate în mod obișnuit în cercetarea apoptozei
Întrebare:
Care sunt cele mai utilizate teste de apoptoză?
The Protein Man Says:
Cercetarea apoptozei necesită utilizarea unei game largi de teste de apoptoză, deoarece procesul în sine este destul de complicat. În plus, nu există un singur parametru care să definească moartea celulară în toate sistemele, astfel încât ar trebui să folosiți mai multe abordări în desfășurarea cercetărilor dumneavoastră.
Principalele tipuri de teste de apoptoză
Există cinci tipuri distincte de teste de apoptoză care sunt utilizate în prezent în cercetarea apoptozei. Acestea includ testele de caspază, testele de fragmentare a ADN-ului, testele de permeabilitate celulară și testele mitocondriale. În plus, există, de asemenea, un tip de test care poate fi utilizat pentru a facilita analiza căilor de semnalizare a apoptozei.
Teste de caspază. Prezența enzimelor caspaze în orice eșantion dat este un indicator sigur că au loc evenimente biochimice complexe asociate cu apoptoza. Ca atare, testele caspazei pot fi utilizate pentru a detecta apoptoza în populațiile de celule în cele mai timpurii stadii ale sale. Aceste teste utilizează în mod obișnuit substraturi specifice care sunt digerate de caspaze pentru a elibera substraturi colorimetrice sau fluorometrice.
Teste de fragmentare a ADN-ului. Apoptoza și scindarea ADN-ului merg mână în mână, astfel încât puteți determina gradul de apoptoză prin măsurarea fragmentelor de ADN prezente în proba dumneavoastră. Majoritatea cercetătorilor folosesc în acest scop analiza scării ADN apoptopic, cuantificarea ELISA și testele TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling).
Sesizări de permeabilitate celulară. Apoptoza în stadiul mediu poate fi determinată prin utilizarea testelor de permeabilitate celulară. După cum probabil știți, celulele sănătoase au membrane plasmatice rigide, în timp ce celulele moarte au membrane celulare foarte permeabile. Cu membranele lor foarte compromise, coloranții fluorescenți pot trece cu ușurință prin celulele apoptopice. Când se întâmplă acest lucru, veți observa un model caracteristic de fluorescență sau de colorare care indică prezența populațiilor de celule apoptopice în proba dumneavoastră.
Creșterea permeabilității celulare are ca rezultat, de asemenea, pierderea proteinelor citosolice din celulă. Lactat dehidrogenaza (LDH) este o enzimă citosolică solubilă care este eliberată în mediul de cultură în urma pierderii integrității membranei rezultate fie din apoptoză, fie din necroză. Prin urmare, activitatea LDH poate fi utilizată ca indicator al integrității membranei celulare și servește ca mijloc general de evaluare a citotoxicității care rezultă din compuși chimici sau factori toxici din mediu. Există mai multe teste pentru cuantificarea LDH eliberate.
Testări mitocondriale. Testele mitocondriale pot ajuta la determinarea stadiului timpuriu al apoptozei, deoarece utilizează un colorant cationic care emite o fluorescență diferită atunci când este utilizat în populații de celule sănătoase și în populații de celule apoptopice.
Cunoașterea testelor de apoptoză care trebuie utilizate și a momentului în care trebuie utilizate vă poate ajuta foarte mult în cercetările dumneavoastră, așa că ar fi bine să începeți să le cunoașteți pe de rost.
.