Validarea unui test ADCC utilizând celule naturale killer primare umane pentru evaluarea produselor bioterapeutice care conțin o regiune Fc

Dezvoltarea de produse bioterapeutice necesită o îmbunătățire continuă a metodologiilor analitice pentru evaluarea atributelor de calitate ale acestora. Un subset de produse bioterapeutice este conceput pentru a interacționa cu antigeni specifici care sunt expuși pe membranele celulelor-țintă sau care circulă într-o formă solubilă, iar funcțiile efectoare sunt obținute prin recunoașterea regiunii Fc a acestora de către celulele efectoare care induc mecanisme precum citotoxicitatea mediată celulară dependentă de anticorpi (ADCC). Astfel, inducerea ADCC este un atribut critic de calitate (CQA) care trebuie evaluat pentru a asigura eficacitatea bioterapeutică. Inducerea ADCC poate fi evaluată prin utilizarea de celule efectoare din diferite surse, cum ar fi celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC) și liniile celulare modificate genetic (de exemplu, celule NK transfectate sau celule Jurkat), iar pentru detectarea și interpretarea rezultatelor pot fi utilizate diferite abordări în funcție de tipul de celule efectoare utilizate. În acest sens, validarea testelor este relevantă pentru a asigura fiabilitatea rezultatelor în funcție de scopul urmărit. În prezenta lucrare, prezentăm standardizarea și validarea testelor ADCC pentru a testa potența a trei proteine bioterapeutice, utilizând celule NK primare obținute din sânge proaspăt ca celule efectoare și detectând moartea celulară prin citometrie de flux. Avantajul utilizării celulelor NK primare în locul celulelor modificate constă în faptul că răspunsul este mai apropiat de cel care are loc in vivo, deoarece citotoxicitatea este evaluată în mod direct. Rezultatele noastre indică faptul că, în toate cazurile, testele au prezentat o curbă doză/răspuns sigmoidală caracteristică, respectând parametri exacți, preciși și specifici. Prin urmare, testul ADCC validat reprezintă o alternativă adecvată pentru evaluarea activităților biologice ale acestor tipuri de produse bioterapeutice.