Kansas State University

Mars 2019

Rheumatoid faktor (RF) och antikärnantikroppar (ANA) vid diagnos av autoimmuna sjukdomar hos veterinära patienter

av Drs. Brandy Kastl och Nora Springer

Diagnosen av autoimmuna sjukdomar inom veterinärmedicinen kan vara en utmaning. Serumtitrar för autoantikroppar, särskilt för reumatoid faktor (RF) och/eller antikärnantikroppar (ANA), används ofta vid misstanke om autoimmun sjukdom. Båda dessa tester är dock av störst diagnostisk nytta när de tolkas i samband med den fullständiga kliniska bilden. Om man förstår både styrkorna och fallgroparna med autoantikroppsdetektering kan man förbättra den korrekta tolkningen av positiva resultat. I den här artikeln kommer vi att använda det diagnostiska arbetet med polyartrit som ett exempel på den kliniska användbarheten av både RF och ANA.

RF- och ANA-titer i serum används ofta i det diagnostiska arbetet vid misstanke om immunmedierad polyartrit hos hundar (se tabell 1 – Diagnostiskt tillvägagångssätt vid polyartrit hos hundar). Diagnostisk utvärdering av polyartrit, oavsett art, bör först inledas med röntgenbilder av de drabbade lederna och samtidig analys av synovialvätska. Med hjälp av röntgenbilderna kan man avgöra om artritlesionerna är erosiva (dvs. med benpåverkan) eller icke-erosiva (dvs. utan benpåverkan). Samtidigt identifierar analysen av synovialvätska inflammation och ibland infektionsorganismer. Avsaknad av mikroskopiskt synliga organismer i synovialvätskan utesluter inte en infektiös etiologi. I slutändan kommer kombinationen av radiografiska egenskaper, synovialvätskefynd och resultat från kompletterande tester av infektionssjukdomar att begränsa differentialförteckningen (se tabell 1) vid kaninpolyartrit. När lesionsegenskaperna passar och infektionssjukdomar har uteslutits ger både RF- och ANA-titer ytterligare stöd för diagnosen reumatoid artrit (RA) respektive systemisk lupus erythematosus (SLE).

Figur 1: Schematisk beskrivning av reumatoid faktor

Rheumatoid artrit bör övervägas vid erosiv, neutrofil polyartrit utan identifierbar infektiös etiologi. Ytterligare information om diagnosen av reumatoid artrit finns på www.rheumatology.org i ACR-EULAR Classification Criteria for Rheumatoid Arthritis från 2010, som anses vara tillämplig på veterinärmedicinska arter. Vid RA ansamlas autoantikroppar som är riktade mot det kristalliserbara fragmentet (Fc-regionen) av IgG-antikroppar (figur 1). Dessa IgM-, IgA- eller IgG-autoantikroppar kallas tillsammans för reumatoid faktor (RF). Under normala omständigheter underlättar RF avlägsnandet av antikropp-antigenkomplex efter ett immunologiskt svar. På grund av denna normala immunologiska funktion är förhöjda RF-titrar i serum inte patognomoniska för RA och kan förekomma hos en liten andel normala individer eller hos personer med andra kroniska inflammatoriska tillstånd. Hos patienter med RA sker en överdriven produktion av RF efter den första ledinflammationen och förstärker därefter artritbildningen genom att immunkomplex deponeras i ledvävnaden. På grund av denna fördröjning av RF-ackumulering kommer en liten andel av patienterna med RA att ha negativa RF-titrar. Oavsett detta förblir bestämning av RF-titer i serum en grundpelare i diagnosen av RA.

I motsats till RA orsakar sytemisk lupus erythematosus (SLE) en icke-erosiv, inflammatorisk polyartrit. Hos hundar baseras diagnosen SLE ofta på förekomsten av ≥ 2 kliniska tecken som är associerade med autoimmunitet (tabell 2. Förslag till diagnostiska kriterier för SLE hos hundar) i kombination med en serum ANA-titer > 1:160. Antinukleära antikroppar (ANA) är ett paraplybegrepp för autoantikroppar som är riktade mot olika nukleära antigener, t.ex. histoner och DNA. Liksom för RF är en positiv ANA-titer i serum inte patognomonisk för diagnosen SLE. Positiva ANA-titrar kan observeras hos friska individer eller i samband med kronisk inflammation (t.ex. atopisk dermatit, dobermannhepatit), infektionssjukdomar (t.ex. ehrlichios, leishmaniasis), neoplasi eller mediciner (t.ex. sulfonamider, penicillin, tetracykliner). Därför bör detektion av serum ANA reserveras för kliniska fall där SLE är starkt misstänkt. Eftersom nukleära antigener är väl bevarade mellan däggdjursarter bestäms ANA-titrar hos hundar vid KSVDL genom indirekt flourescerande antikroppsdetektion med råtthepatocyter som substrat (figur 2). Flera serieutspädningar av patientens serum inkuberas med ett tunt preparat av råttleverceller. ANA som finns i serumet binds till kärnorna i råtthepatocyterna. Därefter tillsätts en sekundär flourescentmärkt antikropp för att framhäva patientens antikroppar (dvs. ANA) komplexerade med deras nukleära antigener (figur 2).

Figur 2A. Schematisk bild av detektion av ANA-titrar i serum hos hundar med hjälp av indirekta fluorescerande antikroppar (inte i skala).	Figur 2B. Positivt testresultat med immunofluorescens lokaliserad till kärnor.

Slutsatsen är att RF- och ANA-titer i serum kan vara användbara vid diagnos av autoimmuna sjukdomar. Viktigt är att både serum RF- och ANA-titer bör reserveras för patienter med kliniska symtom som är förenliga med reumatoid artrit respektive systemisk lupus erythematosus. Infektionssjukdomar, andra autoimmuna sjukdomar och neoplastiska tillstånd bör effektivt uteslutas innan dessa tester utförs och särskilt innan positiva resultat tolkas. KSVDL:s kliniska immunologiska laboratorium erbjuder för närvarande validerad kommersiell detektion av serum RF- och ANA-titrar för hundar. Ungefär 1-3 ml serum, separerat från blodproppen och placerat i ett färskt rödtoppsrör, begärs för testning. När serumet har separerats ska det förvaras i kylskåp och skickas med kylförpackning inom 1-2 dagar efter insamlingen. För ytterligare frågor om något av dessa tester, kontakta KSVDL Client Care på 1-866-512-5650 eller 785-532-5650.

Tabell 1. Diagnostiskt tillvägagångssätt för polyartrit hos hundar	Tabell 2: Föreslagna diagnostiska kriterier för SLE hos hundar

.