Validering av en ADCC-analys med hjälp av primära naturliga mördarceller från människor för att utvärdera bioterapeutiska produkter med en Fc-region

Utvecklingen av bioterapeutiska läkemedel kräver en kontinuerlig förbättring av de analytiska metoderna för bedömning av deras kvalitetsegenskaper. En delmängd bioterapeutika är utformade för att interagera med specifika antigener som är exponerade på målcellernas membran eller cirkulerar i löslig form, och effektorfunktioner uppnås via igenkänning av deras Fc-region av effektorceller som inducerar mekanismer som antikroppsberoende cellmedierad cytotoxicitet (ADCC). ADCC-induktion är således en kritisk kvalitetsegenskap (CQA) som måste utvärderas för att säkerställa bioterapeutisk effekt. Induktion av ADCC kan utvärderas genom att använda effektorceller från olika källor, t.ex. mononukleära celler från perifert blod (PBMC) och genetiskt modifierade cellinjer (t.ex. transfekterade NK- eller Jurkat-celler), och olika tillvägagångssätt kan användas för detektion och tolkning av resultaten beroende på vilken typ av effektorceller som används. Det är därför viktigt att validera testerna för att säkerställa att resultaten är tillförlitliga i förhållande till det avsedda ändamålet. Här visar vi standardiseringen och valideringen av ADCC-analyser för att testa styrkan hos tre bioterapeutiska proteiner genom att använda primära NK-celler som erhållits från färskt blod som effektorceller och genom att detektera celldöd med flödescytometri. Fördelen med att använda primära NK-celler i stället för modifierade celler är att responsen ligger närmare den som uppstår in vivo eftersom cytotoxiciteten utvärderas på ett direkt sätt. Våra resultat visar att testerna i samtliga fall uppvisar en karakteristisk sigmoidal dos/responskurva som överensstämmer med exakta, precisa och specifika parametrar. Därmed är den validerade ADCC-analysen ett lämpligt alternativ för att utvärdera den biologiska aktiviteten hos denna typ av bioterapeutiska läkemedel.