Validace testu ADCC s využitím lidských primárních přirozených zabíječských buněk pro hodnocení bioterapeutických přípravků s Fc oblastí

Vývoj bioterapeutik vyžaduje neustálé zlepšování analytických metodik pro hodnocení jejich kvalitativních vlastností. Podskupina bioterapeutik je navržena tak, aby interagovala se specifickými antigeny, které jsou vystaveny na membránách cílových buněk nebo cirkulují v rozpustné formě, a efektorové funkce je dosaženo prostřednictvím rozpoznání jejich Fc oblasti efektorovými buňkami, které indukují mechanismy, jako je cytotoxicita závislá na protilátkách (ADCC). Indukce ADCC je tedy kritickým atributem kvality (CQA), který musí být hodnocen, aby byla zajištěna účinnost bioterapeutika. Indukci ADCC lze hodnotit pomocí efektorových buněk z různých zdrojů, jako jsou mononukleární buňky periferní krve (PBMC) a geneticky modifikované buněčné linie (např. transfekované NK nebo Jurkat buňky), přičemž pro detekci a interpretaci výsledků lze použít různé přístupy v závislosti na typu použitých efektorových buněk. V tomto ohledu je důležitá validace testů, aby byla zajištěna spolehlivost výsledků podle zamýšleného účelu. V tomto článku ukazujeme standardizaci a validaci testů ADCC pro testování účinnosti tří bioterapeutických proteinů za použití primárních NK buněk získaných z čerstvé krve jako efektorových buněk a detekci buněčné smrti pomocí průtokové cytometrie. Výhodou použití primárních NK namísto modifikovaných buněk je, že odpověď je bližší reakci probíhající in vivo, protože cytotoxicita je hodnocena přímým způsobem. Naše výsledky ukazují, že ve všech případech testy vykazovaly charakteristickou sigmoidální křivku dávka/odezva, která odpovídala přesným, precizním a specifickým parametrům. Validovaný test ADCC je tedy vhodnou alternativou pro hodnocení biologické aktivity tohoto typu bioterapeutik.