NanoHybrids – Antibody Conjugation for Gold Nanoparticles
Antibody conjugated gold nanoparticle probes allow for the study and visualization of cellular and molecular processes in vitro and in vivo; a critical tool for both basic science researchers and clinicians.
Mange investigators spend excessive time and energy synthesizing these conjugates themselves with varying degrees of success and inconsistent results. De fleste finder, at når de udfører konjugationer på egen hånd, lider de af inkonsekvent antistof-til-partikel-tilknytning og ikke-reproducerbar cellemærkningseffektivitet.
Løsningen af det første problem med inkonsekvent antistof-til-partikel-tilhæftning kræver både:
(1) skabelse af en stabil binding mellem partikel og antistof og
(2) korrekt karakterisering af antistof-tilhæftningen.
For at skabe en stabil binding skal antistofferne være kovalent knyttet til overfladen. Skemaet nedenfor viser flere forskellige metoder til antistofkonjugering.
Den fysiske adsorptionsmetode er den mindst stabile. Den er afhængig af affiniteten af visse funktionelle grupper på proteiner som f.eks. aminer og thioler til at blive tiltrukket via ikke-kovalente interaktioner til partikeloverfladen. I et in vivo-miljø eller endog i cellemedier kan antistoffer, der er fysisk adsorberet, let fortrænges.
Det er derfor den kovalente konjugationsmetode, der er den mest udbredte metode. Den giver en stabil binding mellem guldnanopartiklen og antistoffet, og der kan anvendes flere forskellige kemier såsom N-hydroxysuccinimid (NHS) koblet med 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimid (EDC). Selv om denne metode giver en stabil vedhæftning, skal den dog stadig karakteriseres.
Direktionel konjugering for bedre effektivitet
Karakterisering af antistofkonjugerede guldnanopartikler indebærer normalt estimering af forholdet mellem antistof og partikel ved at sammenligne fluorescensmålinger af fluorfor-markerede antistofkonjugerede partikler med kendte fluorfor-markerede antistofstandarder. Selve målingen kan kompliceres af fluoroforenes udslukning ved metalnanopartiklernes overflade. Desuden skal forskerne også forberede det fluorforkonjugerede antistof og dets standarder.
NanoHybrider kan anvende en retningsbestemt konjugationsmetode, som afhjælper mange af disse problemer.
For at muliggøre retningsbestemt fastgørelse bindes den ene ende af et heterobifunktionelt tværlinkermolekyle til antistoffets Fc-region. Den anden ende af linkeren binder sig direkte til guldnanopartiklens overflade, hvilket giver en retningsbestemt binding mellem antistoffet og partiklen. Ved hjælp af denne metode opnås en stabil binding mellem partikel og antistof, samtidig med at den variable region (Fv), eller det antigeninteragerende sted, forbliver sterisk uhindret og tilgængelig for binding.
Den retningsbestemte karakter af tilknytningen gør karakteriseringen af forholdet mellem antistof og partikel mere konsistent og forbedrer også effektiviteten af cellemærkning og molekylær målretning. Mærkningseffektiviteten kan øges med 7 til 10 gange ved anvendelse af en retningsbestemt metode i forhold til en ikke-retningsbestemt metode til fastgørelse. Anvendelse af retningsbestemt konjugerede guldnanopartikler kan give betydelige omkostningsbesparelser, øge produktiviteten og fremskynde videnskabelige opdagelser.
Specifikke antistofkonjugeringstjenester
Vi kan konjugere vores guldnanopartikler til antistoffer, proteiner eller andre molekyler efter eget valg. Vi tilbyder også teknisk support til forskere, der gerne vil købe vores guldnanopartikler og arbejde med konjugeringerne. Kontakt os i dag for dine brugerdefinerede konjugationsbehov.
