Porównanie działania przeciwgrzybiczego żelu Aloevera i Triphala: An in vitro study Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A

ORIGINAL ARTICLE

Year : 2017 | Volume : 29 | Issue : 2 | Page : 90-94

Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala: An in vitro study
Supreet Jain1, Sheetal Mujoo2, Minal Daga3, Salona Kalra4, Ravleen Nagi1, Afshan Laheji5
1 Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
2 Department of Oral Medicine and Radiology, College of Dentistry, Jazan University, Saudi Arabia
3 Department of Conservative Dentistry and Endodontics, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur, Chhattisgarh, India
4 Department of Oral Medicine and Radiology, Triveni Institute of Dental Sciences Hospital and Research Centre, Bilaspur, Chhattisgarh, Indie
5 Department of Oral and Maxillofacial Pathology, Daswani Dental College, Kota, Rajasthan, India

Adres do korespondencji:
Supreet Jain
Department of Oral Medicine and Radiology, New Horizon Dental College and Research Institute, Sakri, Bilaspur, Chhattisgarh
Indie

Source of Support: Brak, Konflikt interesów: Brak

Check

DOI: 10.4103/jiaomr.JIAOMR_167_16

Abstrakt

Cel: Celem niniejszego badania było określenie i porównanie aktywności przeciwgrzybiczej i hamującej różnych stężeń żelu Aloevera i Triphala wobec doustnej Candiada albicans. Materiały i metody: Grzyby (C. albicans) wyizolowano od 10 pacjentów z kandydozą rzekomobłoniastą i pacjentów z zapaleniem jamy ustnej spowodowanym protezami zębowymi i przeniesiono na bulion Sabourauda, który następnie inkubowano w agarze Sabourauda z dekstrozą (SDA). Aktywność przeciwgrzybiczą żelu Aloevera i Triphala badano metodą dyfuzyjno-krążkową, a minimalne stężenie hamujące oznaczano metodą mikrorozcieńczeń w bulionie. Wyniki: Średnia wartość strefy zahamowania dla Aloevera wynosiła 3,35 ± 0,59 mm i 1,06 ± 0,41 mm odpowiednio przy 100% i 50%. Dla Triphala, to było 4,19 ± 0,57 mm i 1,79 ± 0,43 mm w 100% i 50%, odpowiednio (wartość P < 0,001). Strefa zahamowania 100% Triphala wykazała wyższą wartość niż strefa zahamowania Aloevera przy tym samym stężeniu (P = 0,004). Podobne wyniki uzyskano przy 50% stężeniu Triphala i Aloevera (P = 0,004). Minimalne stężenie hamujące żelu Aloevera i Triphala wobec C. albicans wynosiło odpowiednio 25% i 12,5%. Wnioski: Zarówno żel Aloevera jak i Triphala wykazywały właściwości przeciwgrzybicze w wyższych stężeniach i mogą być stosowane jako obiecujący dodatek do środków przeciwgrzybiczych.

Keywords: Antifungal, kultura, naturalny

Jak cytować ten artykuł:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala: An in vitro study. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017;29:90-4

Jak cytować ten URL:
Jain S, Mujoo S, Daga M, Kalra S, Nagi R, Laheji A. Comparison of antifungal effect of Aloevera gel and Triphala: An in vitro study. J Indian Acad Oral Med Radiol 2017 ;29:90-4. Available from: https://www.jiaomr.in/text.asp?2017/29/2/90/217911

Wstęp

Candida jest rodzajem drożdżaków i jest najczęstszą przyczyną zakażeń grzybiczych jamy ustnej. Większość gatunków Candida jest nieszkodliwymi komensalami lub endosymbiontami gospodarzy, w tym ludzi, jednak w przypadku upośledzonego systemu immunologicznego lub zaburzonych barier śluzówkowych mogą one wkraczać i wywoływać choroby. Candida albicans jest najczęściej izolowanym gatunkiem i jest odpowiedzialna za pleśniawki jamy ustnej, kandydozę rzekomobłoniastą.
Koszty, skutki uboczne i zwiększona odporność na komercyjnie dostępne leki przeciwgrzybicze doprowadziły badaczy do zbadania naturalnych środków ziołowych przeciwko infekcjom grzybiczym., Tradycyjnie stosowane rośliny lecznicze są bogatym źródłem czynników przeciwdrobnoustrojowych i są łatwo dostępne na obszarach wiejskich. Są one relatywnie tańsze od nowoczesnych leków. Produkty metabolitów wtórnych, wytwarzane przez rośliny lecznicze, są ważnym źródłem wielu leków farmaceutycznych.
Aloevera jest rośliną podobną do kaktusa, należącą do rodziny Liliacea. Żel Aloevera jest śluzowatym, bezbarwnym żelem, wydzielanym przez komórki parenchymatyczne świeżych liści Aloevera. Zawiera 98-99% wody i 1-2% związków aktywnych, takich jak aloina, aloe-emodyna, aloemannan, flawonoidy, aloesyna, sterole, aminokwasy i witaminy. Triphala oznacza trzy owoce, jest indyjskim ajurwedyjskim preparatem zawierającym Terminali chebula, T. Belerica i Phyllantus embelica w proporcji 1:1:1. Jego fitochemiczne składniki to tanina, kwas galusowy, kwas elagowy, fenol i glikozydy. Zarówno Aloevera jak i Triphala mają właściwości antybakteryjne, antyoksydacyjne, przeciwgrzybicze, przeciwzapalne i immunomodulacyjne.,,, Wpływ ekstraktów Aloevera i Triphala na infekcję Candida w jamie ustnej był badany przez bardzo niewielu badaczy w Indiach. Celem badania było określenie aktywności przeciwgrzybiczej i hamującej różnych stężeń żelu Aloevera i Triphala wobec C. albicans.

Materiały i metody

Badanie przeprowadzono w Zakładzie Mikrobiologii, New Horizon Dental College and Research Institute, Bilaspur. Ethical clearance został podjęty od instytucjonalnej komisji etycznej. Od wszystkich pacjentów uzyskano świadomą zgodę. Wymaz z Candida pobrano od pacjentów cierpiących na kandydozę rzekomobłoniastą przy użyciu protezy zębowej i przeniesiono do bulionu Sabourauda. Wszystkie izolaty Candida potwierdzono testem probówkowym i testem kiełkowania zarodników. Wyizolowane próbki Candida inkubowano w agarze Sabourauda z dekstrozą SDA (HIMEDIA laboratories, Mumbai) w temperaturze 4°C.

Rysunek 1: Wzrost Candida w bulionie Sabourauda Kliknij tutaj, aby zobaczyć

Przygotowanie ekstraktu Aloevera
Gruby naskórek świeżego liścia Aloevera został usunięty, a stały śluzowaty żel został zebrany do sterylnego pojemnika. Dziesięć milimetrów żelu mieszano w 100 ml 1% dimetylosulfotlenku (DMSO) i przechowywano w temperaturze 4°C. DMSO (≤1%) ma nieistotny wpływ na wzrost grzybów i dlatego został użyty jako rozpuszczalnik.

Rysunek 2: Ekstrakcja żelu Aloevera ze świeżych liści w sterylnej płytce Kliknij tutaj, aby zobaczyć

Przygotowanie ekstraktu Triphala
Stu gram Triphala churna (Dabur Triphala churna) zmieszano w 100 ml wody, aby uzyskać roztwór wodny . Następnie roztwór ten był gotowany przez 45 minut. Później został schłodzony i przefiltrowany. Ten filtrat został użyty do sprawdzenia jego działania przeciwgrzybiczego. Właściwości przeciwgrzybicze żelu Aloevera i Triphala wykryto przy użyciu metody dyfuzyjnej.

Rycina 3: Triphala churna Kliknij tutaj, aby zobaczyć

Aktywacja Candida albicans
Zarodniki grzybów wysiano na płytkę z agarem dekstrozy ziemniaczanej (PDA) i inkubowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny przed badaniem. Wszystkie płytki (n = 10) przechowywano w temperaturze 4°C do dalszego użycia.
Metoda dyfuzyjna
W każdej płytce (n = 10 dla Candida) z aktywowanym C. albicans, po aktywacji C. albicans, wywiercono ośmiomilimetrowe dołki wiertłem 8 mm w posianym agarze, do którego wsypano 100%, 50%, 25% i 12,5% ekstraktu żelowego Aloevera. Podobnie dla Triphala, w różnych płytkach (n = 10 dla Triphala) posiadających aktywowane C. albicans, nawiercono 8 mm dołki wiertłem w agarze posiewowym, do którego wsypano 100%, 50%, 25%, 12,5% ekstraktu Triphala. Po normalizacji do temperatury pokojowej, płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny. Strefę zahamowania mierzono i zapisywano .

Rysunek 4: (a) Strefa zahamowania przy 100% stężeniu Triphala. (b) Strefa zahamowania przy 50% stężeniu Triphala. (c) Strefa zahamowania przy 100% stężeniu Aloevera. (d) Zone of inhibition at 50% concentration of Aloevera Click here to view

Minimum inhibitory concentration
Minimum inhibitory concentration (MIC) was done using the microbroth dilution method. Jako MIC przyjęto najwyższe rozcieńczenie, które nie dało ani jednej kolonii grzyba. Ekstrakty Aloevera zmieszano z 1% DMSO w celu uzyskania różnych stężeń zapasu, tj. 100%, 50%, 25%, 12,5% i 6,25%. Podobnie, różne stężenia Triphala otrzymano przez zmieszanie ekstraktu z wodą destylowaną. Równe objętości różnych stężeniach każdego ekstraktu i zostały zmieszane w mikroprobówkach (Sabouraud dextrose broth), aby utworzyć 0,5 ml roztworu. Probówki inkubowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny. Później, testowe rozcieńczenia były subkulturowane na SDA i inkubowane przez 24 h w celu sprawdzenia wzrostu grzybów .

Rycina 5: Minimalne stężenie hamujące dla Triphala i Aloevera Kliknij tutaj, aby zobaczyć

Analiza statystyczna
Dane zostały opracowane w MS Office Excel. Analizę statystyczną przeprowadzono przy użyciu pakietu oprogramowania SPSS w wersji 21 (SPSS Statistics for Windows, Version 21.0. Chicago: SPSS Inc.). Analizę wariancji (ANOVA) przeprowadzono dla porównań wewnątrz- i międzygrupowych. Test post hoc (Tukey HSD) przeprowadzono również w celu porównania różnych stężeń Aloevera, Triphala i obu. Wyniki były mierzone jako średnia ± SD. Wartość P mniejszą niż <0,05 uznano za istotną statystycznie, a <0,001 za wysoce istotną.

Wynik

Pobrane próbki Candida poddano analizie metodą barwienia metodą Grama, która wykazała obecność skupisk pseudohyphae sugerujących występowanie gatunku C. albicans. Średnia wartość strefy zahamowania dla Aloevera wynosiła 3,35 ± 0,59 mm i 1,06 ± 0,41 mm odpowiednio przy 100% i 50%. Dla Triphala wynosiła 4,19 ± 0,57 mm i 1,79 ± 0,43 mm odpowiednio w 100% i 50%. Zarówno Triphala jak i Aloevera gel wykazywały właściwości przeciwgrzybicze przy wyższych stężeniach (100% i 50% stężenia, wartość P < 0,001).

Tabela 1: Średnia wartość strefy zahamowania Aloevera i Triphala w różnych stężeniach Kliknij tutaj, aby zobaczyć

Zaobserwowano wysoce znaczącą różnicę pomiędzy 100% i 50% Aloevera (P< 0,001, t = 19,17). Podobne wyniki zaobserwowano dla 100% i 50% Triphala (P< 0,001, t = 31,58) . Gdy przeprowadzono ANOVA, stopień swobody pomiędzy Aloevera i Triphala wynosił 3, a w obrębie grup (100% v/s 50%) wynosił 36. W teście Post hoc, strefa zahamowania 100% Triphala wykazała wyższą wartość niż Aloevera przy tym samym stężeniu (P = 0,004). Podobne wyniki uzyskano przy 50% stężeniu Triphala i Aloevera (P = 0,000). Przy niższych stężeniach (25% i 12,5%) nie stwierdzono działania przeciwko Candida. MIC żelu Aloevera i Triphala wobec C. albicans wynosił odpowiednio 25% i 12,5%.

Tabela 2: Test t-Studenta pokazujący porównanie w obrębie grupy Click here to view

Tabela 3: Test ANOVA pokazujący stopień swobody pomiędzy grupami i w obrębie grupy Click here to view

Tabela 4: Test post hoc (Tukey HSD) pokazujący porównanie w obrębie grup Click here to view

.

Dyskusja

Występowanie wielolekoopornych (MDR) bakterii i grzybów oraz wysokie koszty leków farmaceutycznych spowodowały konieczność opracowania alternatywnych leków z naturalnych i innych źródeł. Rośliny lecznicze, które są używane od czasów starożytnych w Ajurwedzie, mogą być jedną z tych alternatyw, ponieważ są tanie, bezpieczne i skuteczne przeciwko wielu mikrobom. Wielu badaczy sprawdziło przeciwbakteryjne działanie Aloevera i Triphala.,,, Bardzo niewiele badań zostało przeprowadzonych w celu sprawdzenia przeciwgrzybiczego działania tych roślin przeciwko infekcji jamy ustnej candidial.,,,,,, Obecne badanie zostało przeprowadzone w celu określenia przeciwgrzybiczej i hamującej aktywności różnych stężeń żelu Aloevera i Triphala przeciwko C. albicans. W obecnym badaniu, zarówno Triphala jak i Aloevera wykazały właściwości przeciwkandidalne w 100% i 50% stężeniu. Nie zaobserwowano znaczących zmian przy niższych stężeniach (25% i 12,5%).

Sheta et al. użyli 0,5% DMSO i wody destylowanej jako rozpuszczalnika i zmieszali Triphalę (zawiesinę), aby uzyskać końcowe stężenie 100 mg/ml. Stwierdzili, że strefa zahamowania dla Triphala przeciwko Candida wynosiła 12 mm, gdy woda była używana jako rozpuszczalnik i 20 mm, gdy DMSO był używany jako rozpuszczalnik. Autorzy sprawdzili również właściwości przeciwgrzybicze dla DMSO i stwierdzili, że nie ma on działania przeciwgrzybiczego. Nie gotowali oni zawiesiny wodnej, co może być przyczyną lepszych wyników niż w naszych badaniach. Randhawa sugerował, że DMSO zwiększa przepuszczalność komórek poprzez wiązanie się z błoną komórkową, co powoduje efekt synergistyczny z lekami przeciwpierwotniakowymi. W prezentowanym przypadku jako rozpuszczalnik dla Triphali zastosowano wodę. El-Mekkawey i wsp. stwierdzili, że T. chebula może hamować rozwój Candida species (w tym C. albicans opornego na klotrimazol). Malhotra i wsp. w swoim badaniu in vitro stwierdzili, że jednostki tworzące kolonie (CFU) C. albicans spadły do zera po 10 minutach stosowania 6% płynu do płukania ust Triphala.
Khaing stwierdził, że etanolowy ekstrakt z Aloevera nie ma działania przeciwkandidalnego. Podobne badanie przeprowadzone przez Kaur et al. wykazało, że Aloevera jest skuteczna przeciwko C. albicans. Zasugerowali, że pozytywny wynik w ich badaniu może być spowodowany zmianą procedury ekstrakcji żelu, tj. ekstrahowali żel w temperaturze pokojowej, podczas gdy wcześniejsze badanie ekstrahowali żel w 90°C. Stąd składnik aktywny mógł zostać utracony w ekstrakcie etanolowym, jeśli ekstrakcja odbywała się w wyższej temperaturze.
W badaniu przeprowadzonym przez Stanley et al. stwierdzono, że strefa zahamowania dla Aloevera przeciwko C. albicans wynosiła 4 mm, a MIC 50%, co było podobne do obecnego badania. Shireen et al. stwierdził, że właściwości przeciwgrzybicze Aloevera są zależne od dawki. Pobrali oni sok Aloevera (1000, 500, 250, 100 μg) ze świeżych liści i zmieszali go z 10 ml etanolu. Strefa zahamowania wynosiła 14 mm przeciwko C. albicans w stężeniu 1000 μg, co było porównywalne z amfoterycyną B. Chainani i wsp. użyli etanolowego ekstraktu Triphala i stwierdzili, że wykazał on działanie przeciwkandidalne w stężeniu 5% i wyższym. Triphala wykazała lepsze wyniki w porównaniu z Aloevera, z większą strefą zahamowania zarówno w 100% jak i 50% stężeniu. Ponadto Triphala hamuje wzrost Candida w niższym stężeniu (12,5%) w porównaniu do Aloevera (50%).
Przeciwbakteryjne działanie Aloevera przypisuje się naturalnemu składnikowi zwanemu antrachinonami (emodyna, kwas aloesowy, aloina, antracen, antranol, barbaloina, kwas chryzofanowy, olejek eteryczny, ester kwasu cynamonowego, izobarbaloina i resistannol).Oczyszczone białko aloesowe o 14 kDa z żelu z liści Aloevera wykazało silną aktywność przeciwgrzybiczą przeciwko C. albicans.Przeciwgrzybicze działanie Triphala jest spowodowane jego dwoma składnikami .

Odkryliśmy, że zarówno Triphala jak i Aloevera wykazały aktywność przeciwgrzybiczą przeciwko C. albicans. Jednak mechanizm działania tych ziołowych środków na mikroby jest jeszcze do zrozumienia. Ponadto, konieczne są dalsze badania na różnych obciążeniach grzybiczych i różnych stężeniach zarówno Triphala i Aloevera, aby sprawdzić ich siłę działania przeciwko różnym gatunkom Candida.

Wnioski

Wzrost liczby patogenów grzybiczych, ograniczone możliwości terapeutyczne, działania niepożądane leków terapeutycznych i pojawienie się MDR razem stanowią obciążenie dla pacjentów z obniżoną odpornością. C. albicans jest najczęstszym zakażeniem oportunistycznym jamy ustnej, często izolowanym z próbek tkanek pacjentów dotkniętych chorobą. W medycynie tradycyjnej od wieków stosowano produkty roślinne. Ze względu na ich łatwą dostępność i mniejszą toksyczność, podejmowane są wysiłki w celu opracowania opcji terapeutycznych z wykorzystaniem cząsteczek pochodzenia roślinnego. Niniejsze badanie jest również podobnym wysiłkiem mającym na celu sprawdzenie przeciwgrzybiczych efektów Triphala i Aloevera. W tym badaniu, Aloevera i Triphala okazały się wykazywać aktywność przeciwgrzybiczą.
Limitations
The present study was conducted in in vitro and involved a small sample size. W przyszłości należy przeprowadzić więcej badań na większej populacji (in vivo), aby udowodnić skuteczność przeciwgrzybiczą Aloevera i Triphala przeciwko C. albicans, aby scharakteryzować mechanizm działania w celu dalszego przełożenia na zastosowania kliniczne i pokonania wyzwań związanych z terapiami grzybiczymi.
Wsparcie finansowe i sponsoring
Nie dotyczy.
Konflikty interesów
Brak konfliktów interesów.

	Rathod M, Das N, Dhale D. Antifungal activity of two medicinal plants against fungus Candida albicans. Int J Pharma Bio Science 2015;6:701-6.
	Martins C, Silva D, Neres A, Magalha T, Watanabe G, Modolo L, et al. Curcumin as a promising antifungal of clinical interest. J Antimicrob Chemother 2009;63:337-9.
	Fani M, Kohanteb J. Inhibitory activity of Aloe vera gel on some clinically isolated cariogenic and periodontopathic bacteria. J Oral Sci 2012;54:15-21.
	Vogler BK, Ernst E. Aloe vera: Systematyczny przegląd jego skuteczności klinicznej. Br J Gen Pract 1994;9:823-8.
	Ahmad I, Mehmood Z, Mohammad F. Screening of some Indian medicinal plants for their antimicrobial properties. J Ethnopharmacol 1998;62:183-93.
	Wadhwan R, Sharma S, Solanki G, Solanki R. Role of triphala in dentistry: A review. Int J Preclinical Pharmaceutical Res 2014;2:95-9.
	Kammoun M, Miladi S, Ali YB, Damak M, Gargouri Y, Bezzine S.In vitro study of the PLA2 inhibition and antioxidant activities of Aloe vera leaf skin extracts. Lipids Health Dis 2011;10:30.
	Shetty PJ, Hegde V, Gomes L. Anticandidal efficacy of denture cleansing table, Triphala, Aloe vera, and Cashew leaf on complete dentures of institutionalized elderly. J Ayurveda Integr Med 2014;5:11-4.
	Randhawa MA, Aljabre SHM. Dimethyl Sulfoxide (DMSO) has an additive effect and alters minimal inhibitory concentrations of antifungal drugs. J Rawalpindi Med College 2007;11:54-60.
	Harringtom A, McCourtney K, Nowowiejski D, Limaye A. Differentiation of Candida albicans yeast directly from blood cultures by gram stain morphology. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2007;26:325-9.
	El-Mekkawey M, Merelhy M. Inhibitory effects of Egyptian folk medicine on Human Immunodeficiency Virus (HIV) reverse transcriptase. Chem Pharm Bull 1995;43:641-8.
	Sheta MM, Kikani KM, Kavithia P, Thakkar J, Rangnani T. Study of antimicrobial activity of Triphala and its individual components. Int J Herb Med 2016;4:41-3.
	Malhotra A, Malhotra I, Solanki R, Khangwal M, Kumar D. Evaluation of antibacterial and antifungal properties of herbal mouthwash- A prospective study. Int J Enhanced Res Med Dent Care 2015;2:33-7.
	Khaing TA. Evaluation of the antifungal and antioxidant activities of the leaf extract of Aloe vera (Aloe barbadensis Miller). World Acad Sci Engineer Tech 2011;5:3-23.
	Kaur H, Goyal RR, Bhattacharya A, Gupta R, Lal NK, Arora B, et al. Antifungal activity of phyto-extracts of Piper Longum, Aloevera, and Withania somnifera against human fungal opportunistic pathogen Candida albicans. DU J Undergrad Res Innov 2015;1:107-15.
	Stanley MC, Ifeanyi OE, Eziokwu OG. Antimicribial effects of Aloevera on some human pathogens. Int J Curr Microbiol App Sci 2014;3:1022-8.
	Shireen F, Manipal S, Prabhu D. Antifungal activity of aloevera:In vitro study. SRM J Res Dent Sci 2015;6:92-5.
	Chainani S, Siddana S, Reddy CV, Thippeswamy M, Maurya M, Rudraswami S. Antimicrobial activity of Triphala on Lactobacilli and candida albicans: Anin vitro study. J Orofac Sci 2015;7:104-7.
	Pandey R, Mishra A. Antibacterial activities of crude extract of Aloe barbedensis to clinically isolated bacterial pathogens. Appl Biochem Biotechnol 2010;160:1356-61.

Ryciny

, , , , ,
.