Ensaios de Apoptose Mais Usados na Pesquisa de Apoptose
Question:
Quais são os Ensaios de Apoptose mais Usados?
O Homem Proteína Diz:
A pesquisa de apoptose requer o uso de uma ampla gama de ensaios de apoptose, uma vez que o processo em si é bastante complicado. Além disso, não há um único parâmetro que possa definir a morte celular em todos os sistemas, então você deve usar várias abordagens em sua pesquisa.
Principais tipos de ensaios de apoptose
Existem cinco tipos distintos de ensaios de apoptose que estão sendo usados atualmente na pesquisa de apoptose. Isto inclui ensaios de caspase, ensaios de fragmentação de DNA, ensaios de permeabilidade celular e ensaios mitocondriais. Além disso, há também um tipo de ensaio que pode ser usado para facilitar a análise da via de sinalização da apoptose.
Avaliações de caspase. A presença de enzimas caspase em qualquer amostra é um indicador seguro de que eventos bioquímicos complexos associados à apoptose estão ocorrendo. Como tal, os ensaios de caspase podem ser usados para detectar apoptose em populações celulares durante os seus estágios iniciais. Estes ensaios usam rotineiramente substratos específicos que são digeridos por caspases para liberar a colorimetria dos substratos fluorométricos.
ensaios de fragmentação de DNA. Apoptose e clivagem de DNA andam de mãos dadas para que você possa determinar a extensão da apoptose medindo os fragmentos de DNA presentes na sua amostra. A maioria dos pesquisadores usa a análise apoptópica de DNA ladder, quantificação ELISA e ensaios TUNEL (terminal deoxinucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) para esta finalidade.
Avaliações de permeabilidade de células. A apoptose do estágio médio pode ser determinada através de ensaios de permeabilidade celular. Como você provavelmente sabe, células saudáveis têm membranas plasmáticas rígidas enquanto células mortas têm membranas celulares altamente permeáveis. Com suas membranas altamente comprometidas, os corantes fluorescentes podem facilmente passar através das células apoptópicas. Quando isso acontece, você irá observar uma fluorescência característica ou padrão de coloração que indica a presença de populações de células apoptópicas em sua amostra.
O aumento da permeabilidade celular também resulta na perda de proteínas citosólicas da célula. A LDH é uma enzima citosólica solúvel que é liberada no meio de cultura após a perda da integridade da membrana resultante da apoptose ou necrose. A atividade LDH, portanto, pode ser usada como um indicador da integridade da membrana celular e serve como um meio geral para avaliar a citotoxicidade resultante de compostos químicos ou fatores tóxicos ambientais. Existem vários ensaios para a quantificação de LDH liberado.
ensaios mitocondriais. Os ensaios mitocondriais podem ajudar a determinar o estágio inicial da apoptose, uma vez que usam um corante catiónico que emite uma fluorescência diferente quando usado em populações de células saudáveis e populações de células apoptópicas.
Saber quais os ensaios de apoptose a usar e quando usá-los pode ajudá-lo muito na sua pesquisa, então é melhor começar a conhecê-los de cor.