Validação de um ensaio ADCC usando células assassinas naturais primárias humanas para avaliar produtos bioterapêuticos contendo uma região Fc

O desenvolvimento da bioterapêutica requer uma melhoria contínua nas metodologias analíticas para a avaliação dos seus atributos de qualidade. Um subconjunto de bioterapêutica é projetado para interagir com antígenos específicos que são expostos nas membranas das células-alvo ou que circulam na forma solúvel, e as funções efetoras são obtidas através do reconhecimento de sua região Fc por células efetoras que induzem mecanismos como a citotoxicidade mediada por células anti-corpo (ADCC). Assim, a indução do ADCC é um atributo de qualidade crítica (CQA) que deve ser avaliado para garantir a eficácia bioterapêutica. A indução de ADCC pode ser avaliada utilizando células efetoras de diferentes fontes, tais como células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e linhas de células geneticamente modificadas (por exemplo, células NK transfectadas ou células Jurkat), e diferentes abordagens podem ser utilizadas para a detecção e interpretação dos resultados, dependendo do tipo de células efetoras utilizadas. Neste sentido, a validação dos ensaios é relevante para assegurar a fiabilidade dos resultados de acordo com o objectivo pretendido. Aqui mostramos a padronização e validação dos ensaios ADCC para testar a potência de três proteínas bioterapêuticas usando células NK primárias obtidas de sangue fresco como células efetoras e detectando a morte celular por citometria de fluxo. A vantagem de utilizar células NK primárias em vez de células modificadas é que a resposta está mais próxima da que ocorre in vivo, uma vez que a citotoxicidade é avaliada de forma direta. Nossos resultados indicam que em todos os casos, os ensaios exibiram uma curva sigmoidal característica de dose/resposta, obedecendo a parâmetros precisos, precisos e específicos. Assim, o ensaio ADCC validado é uma alternativa adequada para avaliar as atividades biológicas deste tipo de bioterapêutica.