NanoHybrids – Antikroppskonjugering för guldnanopartiklar
Antikroppskonjugerade guldnanopartikelsonder gör det möjligt att studera och visualisera cellulära och molekylära processer in vitro och in vivo, vilket är ett viktigt verktyg för både forskare inom grundforskning och kliniker.
Många forskare spenderar mycket tid och energi på att syntetisera dessa konjugat själva, med varierande grad av framgång och inkonsekventa resultat. De flesta upptäcker att när de utför konjugeringarna på egen hand lider de av inkonsekventa antikropp-till-partikel-anslutningar och icke-reproducerbar cellmärkningseffektivitet.
För att lösa det första problemet med inkonsekventa fästen mellan antikropp och partikel krävs både:
(1) skapande av en stabil koppling mellan partikeln och antikroppen och
(2) korrekt karakterisering av antikroppens fäste.
För att skapa en stabil koppling bör antikropparna vara kovalent kopplade till ytan. I schemat nedan visas flera olika metoder för antikroppskonjugering.
Den fysiska adsorptionsmetoden är den minst stabila. Den förlitar sig på affiniteten hos vissa funktionella grupper på proteiner, såsom aminer och tioler, för att attraheras via icke-kovalenta interaktioner till partikelytan. I en in vivo-miljö, eller till och med i cellmedia, kan antikroppar som är fysiskt adsorberade lätt förflyttas.
Därmed är den kovalenta konjugationsmetoden den mest använda metoden. Den ger en stabil koppling mellan guldnanopartikeln och antikroppen och flera olika kemier som N-hydroxysuccinimid (NHS) kopplat till 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid (EDC) kan användas. Även om denna metod ger en stabil fastsättning måste den dock fortfarande karakteriseras.
Direktionell konjugering för bättre effektivitet
Karakterisering av antikroppskonjugerade guldnanopartiklar innebär vanligtvis att man uppskattar förhållandet mellan antikropp och partikel genom att jämföra fluorescensmätningar av fluorescensmärkta antikroppskonjugerade partiklar med kända fluorescensmärkta antikroppsstandarder. Själva mätningen kan kompliceras av att fluoroforen släcks ut vid metallnanopartiklarnas yta. Dessutom måste forskarna också förbereda den fluorforkonjugerade antikroppen och dess standarder.
NanoHybrider kan använda en riktad konjugeringsmetod som lindrar många av dessa problem.
För att möjliggöra riktad infästning binds den ena änden av en heterobifunktionell tvärbindningsmolekyl till antikroppens Fc-region. Den andra änden av linkern binds direkt till guldnanopartikelns yta, vilket ger en riktad koppling mellan antikroppen och partikeln. Med denna metod uppnås en stabil koppling mellan partikeln och antikroppen samtidigt som den variabla regionen (Fv), eller den plats där antigenet interagerar, lämnas steriskt obehindrad och tillgänglig för bindning.
Den riktade karaktären hos fästet gör karakteriseringen av förhållandet mellan antikropp och partikel mer konsekvent och förbättrar också effektiviteten av cellmärkning och molekylär målinriktning. Märkningseffektiviteten kan ökas med 7 till 10 gånger om man använder en riktningsbestämd jämfört med en icke riktningsbestämd fästningsmetod. Användning av riktningskonjugerade guldnanopartiklar kan ge betydande kostnadsbesparingar, öka produktiviteten och påskynda vetenskapliga upptäckter.
Custom Antibody Conjugation Services
Vi kan konjugera våra guldnanopartiklar till antikroppar, proteiner eller andra molekyler efter eget val. Vi erbjuder också teknisk support för forskare som vill köpa våra guldnanopartiklar och arbeta med konjugeringarna. Kontakta oss redan idag för dina behov av anpassad konjugering.
.